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牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
被引量:
6
1
作者
鲁俊鹏
罗满林
+1 位作者
宋延华
邹潍力
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期366-370,共5页
从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-M...
从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen- Bank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Western- blotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。
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关键词
牛分支杆菌
mpt83基因
克隆
原核表达
蛋白纯化
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职称材料
结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定
被引量:
1
2
作者
尤敏
邓小波
崔尚金
《现代预防医学》
CAS
北大核心
2008年第18期3594-3596,共3页
[目的]从分支杆菌培养物中提取DNA,扩增结核分支杆菌MPT83蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达、克隆和鉴定。[方法]从分支杆菌培养物中提取总DNA,扩增MPT83因并克隆入T载体,将目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21宿主菌,IPTG诱导...
[目的]从分支杆菌培养物中提取DNA,扩增结核分支杆菌MPT83蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达、克隆和鉴定。[方法]从分支杆菌培养物中提取总DNA,扩增MPT83因并克隆入T载体,将目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切进行鉴定。[结果]经SDS-PAGE分析,在约42ku处出现新的蛋白条带,5h后表达量即达到高峰;Western blotting分析表明,融合蛋白能够被分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。[结论]结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定,为结核病的诊断以及亚单位疫苗、核酸疫苗的制备和应用奠定基础。
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关键词
结核分支杆菌
mpt83基因
原核表达
SDS-PAGE
WESTERN
BLOTTING
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职称材料
题名
牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
被引量:
6
1
作者
鲁俊鹏
罗满林
宋延华
邹潍力
机构
华南农业大学 兽医学院
广东温氏食品集团有限公司
出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期366-370,共5页
基金
广东省"十五"重大科技攻关计划项目(2003A20403)
文摘
从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen- Bank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Western- blotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。
关键词
牛分支杆菌
mpt83基因
克隆
原核表达
蛋白纯化
Keywords
Mycobacterium bovis
mpt
83
gene
cloning
prokaryotic expression
protein purification
分类号
S852.618 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定
被引量:
1
2
作者
尤敏
邓小波
崔尚金
机构
黑龙江省医院道外分院防疫科
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
出处
《现代预防医学》
CAS
北大核心
2008年第18期3594-3596,共3页
文摘
[目的]从分支杆菌培养物中提取DNA,扩增结核分支杆菌MPT83蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达、克隆和鉴定。[方法]从分支杆菌培养物中提取总DNA,扩增MPT83因并克隆入T载体,将目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切进行鉴定。[结果]经SDS-PAGE分析,在约42ku处出现新的蛋白条带,5h后表达量即达到高峰;Western blotting分析表明,融合蛋白能够被分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。[结论]结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定,为结核病的诊断以及亚单位疫苗、核酸疫苗的制备和应用奠定基础。
关键词
结核分支杆菌
mpt83基因
原核表达
SDS-PAGE
WESTERN
BLOTTING
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
mpt
83
Prokaryotic expression
SDS-PAGE
Wostem blotting
分类号
R738.911 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
鲁俊鹏
罗满林
宋延华
邹潍力
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006
6
下载PDF
职称材料
2
结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定
尤敏
邓小波
崔尚金
《现代预防医学》
CAS
北大核心
2008
1
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职称材料
已选择
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