沉默MPZL1调控β-catenin对A549/Tax细胞干性及耐药性的影响

目的探讨髓磷脂蛋白零样蛋白1(MPZL1)沉默后是否通过调控β-catenin表达对A549/Tax耐药性和细胞干性产生影响。方法采用不同浓度阿霉素和紫杉醇处理A549和A549紫杉醇耐药性(A549/Tax)细胞,观察两种细胞的耐药性差异。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot检测A549和A549/Tax细胞中MPZL1的表达量差异。对A549/Tax细胞沉默或者过表达MPZL1,进一步将细胞分为对照(control)组、短发卡RNA阴性对照(sh-NC)组、MPZL1沉默(sh-MPZL1)组、过表达阴性对照(OE-NC)组、MPZL1过表达(OE-MPZL1)组,运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和平板克隆实验分别检测MPZL1的表达变化对A549/Tax细胞增殖和克隆形成能力的影响。Western blot检测Wnt/β-catenin抑制剂XAV939和激活剂CHIR-99201处理细胞后,不同蛋白的表达变化。结果A549/Tax细胞对阿霉素和紫杉醇的半数抑制浓度(IC 50)较A549细胞明显增加(P<0.01)。MPZL1在A549/Tax中呈更高的表达趋势。MPZL1敲除后A549/Tax对阿霉素和紫杉醇的IC 50分别为2.731 mg/ml和4.939μg/ml,较阴性对照组的4.541 mg/ml和13.55μg/ml降低(P<0.01)。CCK-8和克隆形成实验结果显示,MPZL1敲除抑制肺癌A549/Tax细胞的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,MPZL1、肿瘤干性相关蛋白(CD44和CD133)、多药耐药蛋白1(MDR1)、肺耐药相关蛋白(LRP)和β-catenin在sh-MPZL1中的表达水平明显减少(P<0.01)。此外,XAV939可抑制MPZL1、CD44、CD133、MDR1、LRP和β-catenin的表达。CHIR-99201处理细胞后部分逆转敲除MPZL1对上述蛋白的抑制作用。结论MPZL1在肺癌A549/Tax细胞中高表达。敲除MPZL1可抑制肿瘤干性和细胞增殖,增强肺癌A549/Tax细胞对阿霉素和紫杉醇的敏感性。

胃癌中MPZL1的表达及其对胃癌细胞增殖能力的影响

目的探讨MPZL1在胃癌中的表达及其与胃癌患者预后的关系,以及MPZL1对胃癌细胞增殖、克隆形成能力的影响。方法利用GEPIA、UALCAN在线数据库分析MPZL1在多种恶性肿瘤中的表达情况,进一步运用KM Plotter和UALCAN数据库分析MPZL1对胃癌患者总生存时间的影响;采用Western blot检测胃癌细胞中MPZL1蛋白表达情况以及凋亡信号通路蛋白的变化;运用CCK-8和平板克隆实验分别检测MPZL1的表达变化对细胞增殖和克隆形成能力的影响。结果在线数据库GEPIA发现MPZL1在多种恶性肿瘤中呈高表达趋势。UALCAN和KM Plotter数据库分析结果显示MPZL1在胃癌组织中高表达,与胃癌患者的总生存时间呈负相关;CCK-8和平板克隆形成实验结果显示,过表达MPZL1促进胃癌细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05);Western blot结果显示,促凋亡蛋白Bad、Caspase-7表达水平在过表达组较对照组明显减少,在敲减组的表达水平高于对照组。结论MPZL1在胃癌组织中高表达,且促进胃癌细胞的增殖、克隆形成能力,可能与抑制凋亡信号通路有关。