丹参酮ⅡA与三氧化二砷联合诱导MR2细胞凋亡的研究

目的研究丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)联合三氧化二砷(As2O3)对耐维甲酸的急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞(MR2)诱导凋亡的协同效应,探讨其对MR2细胞P糖蛋白(Pgp)表达的作用。方法以0.5、2.0、5.0μmol/LAs2O3单独及联合1.0μg/mLTanⅡA作用于MR2细胞,应用MTT比色法检测细胞的增殖活性,Annexin V/PI标记法观察细胞的凋亡效应,免疫组化法观察细胞Pgp表达。结果临床剂量(0.5、2.0μmol/L)As2O3联合TanⅡA作用下,随着作用时间延长,对MR2细胞增殖抑制作用逐步增强,药物作用168h两组的细胞增殖抑制率分别为(90.67±5.52)%和(86.70±3.04)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P<0.01);诱导MR2细胞凋亡也逐步增强,168h两组的细胞凋亡率分别为(81.52±7.23)%和(90.75±6.44)%,均分别高于单用相应剂量As2O3组(P<0.01)。同时As2O3和TanⅡA单用及联合用药均能明显降低MR2细胞Pgp表达(P<0.01)。结论TanⅡA联合As2O3对MR2细胞诱导凋亡有协同作用,同时下调Pgp的表达。

蛋白磷酸酶2A在三氧化二砷诱导NB4、MR2细胞株凋亡过程中的变化

本研究探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性与表达的变化。不同浓度ATO单用或与冈田酸(OKA)联合作用于NB4、MR2细胞,然后采用MTT法测定药物对细胞增殖的影响,用瑞氏染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术测定细胞凋亡率,丝/苏氨酸磷酸化酶检测试剂盒分析药物对细胞内PP2A活性的影响,Western blot检测细胞内PP2A各亚基表达。结果表明:蛋白磷酸酶抑制剂OKA能明显增强ATO对NB4、MR2细胞的增殖抑制;OKA能促进ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡;ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中PP2A活性均下降,且随ATO浓度的增加PP2A活性下降越明显;与OKA连用后PP2A活性下降更加明显;在ATO诱导NB4、MR2细胞凋亡过程中,PP2A/A表达较对照组均明显减少,而B和C亚基表达与对照组比较变化不明显。结论:在ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡过程中,细胞内PP2A/A表达减少,PP2A活性降低,且随ATO浓度增加PP2A活性下降越明显,抑制PP2A活性有助于ATO诱导的NB4、MR2细胞凋亡。

三氧化二砷与维甲酸联合作用在NB4,MR2细胞系中的体外研究

目的 观察三氧化二砷 (As2 O3)和全反式维甲酸 (ATRA)联合作用对NB4 ,MR2不同亚型急性早幼粒白血病细胞株 ,诱导分化、增殖、凋亡的影响。方法 以NB4 ,MR2为体外模型 ,利用细胞生长曲线、台盼蓝拒染法、MTT法、NBT、细胞形态Wrigh’s Gimesa染色 ,观察细胞增殖、分化、凋亡的相互作用。结果 NB4细胞株 :0 .5 μmol LAs2 O3与 10 - 6 mol LATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现拮抗 ,而 0 .5 μmol LAs2 O3与 (10 - 7～ 10 - 8mol L)ATRA呈现协同 ;MR2细胞株 :0 .5 μmol LAs2 O3与 10 - 6 mol LATRA对细胞增殖、分化、凋亡呈现协同。结论 As2 O3与全反式维甲酸协同效应呈现不同细胞、剂量的特异性 ,MR2细胞株协同效应明显强于NB4细胞株。

氧化砷诱导耐药MR2细胞凋亡的机理研究

目的 探讨As2 O3 诱导耐药急性早幼粒细胞白血病 (APL)细胞凋亡的机制。方法 以耐维甲酸早幼粒白血病细胞株MR2为研究对象 ,非耐药早幼粒细胞白血病NB4为对照组 ,利用流式细胞仪、DNA电泳、免疫组化等手段 ,观察As2 O3 治疗耐药APL细胞的效应途径。结果 As2 O3 能显著诱导MR2细胞凋亡。MR2细胞P 糖蛋白 (PgP)表达 (30 %～ 40 % )较NB4细胞 (10 %～ 2 0 % )明显增强 (P <0 0 0 1) ,MR2细胞topoⅡβ表达 (17 6± 6 18～ 2 6 5± 10 0 1)较NB4细胞 (2 8 8± 3 37～38 3± 9 2 8)明显降低 (P <0 0 5 )。 0 5～ 2 0 μmol/LAs2 O3 能显著降低MR2细胞PgP表达和增强topoⅡβ表达 (P均 <0 0 5 )。结论 topoⅡβ表达降低和PgP高表达可能参与维甲酸耐药机制。调节topoⅡβ和PgP表达可能是As2 O3

硫化砷对MR2细胞组织因子表达的影响

目的 探讨硫化砷 (雄黄As4S4,雌黄As2 S3 )对MR2细胞 (维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病细胞株 )促凝活性 (PCA)和组织因子 (TF)表达的影响。方法 用 30 0 μg·L-1As4S4与 2 μmol·L-1As2 S3 分别与MR2细胞共同孵育 6、12、2 4、4 8、72h ,用复钙时间、ELISA法、半定量RT PCR检测未处理及两种硫化砷处理后的MR2细胞的促凝活性、组织因子抗原表达及组织因子mRNA转录的变化 ,同时检测未处理的NB4、HL 6 0、K5 6 2细胞的促凝活性、组织因子抗原表达作为对照。结果 As4S4和As2 S3 均呈时间依赖方式下调MR2细胞的促凝活性、组织因子抗原的表达及其mRNA的转录。As4S4的下调作用比As2 S3 的作用更明显。结论 下调MR2细胞组织因子的表达并降低其促凝活性可能是硫化砷改善急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者弥散性血管内凝血 (DIC)

氧化砷对MR_2细胞耐药分子表达的影响

探讨三氧化二砷(As2O3)对肿瘤耐药分子的作用.以耐全反式维甲酸(ATRA)早幼粒自血病细胞株MR2为研究对象,以非耐药急性早幼粒白血病细胞株NB4为对照组,用免疫组化法观察P-糖蛋白(Pgp)、谷胱甘肽S转移酶(GST)的表达.MR2细胞Pgp表达(30％～40％)较NB4细胞(10％～20％)明显增强(P<0.001),MR2细胞GSTπ表达(60.4±4.0)～(66.5±4.4),较NB4细胞(28.3±5.6)～(31.2±5.1)明显增强(P<0.05).0.5～2.0 μmol/L As2O3能显著降低MR2细胞Pgp、GSTπ表达,而对GSTα、GSTμ无影响.Pgp、GSTπ表达的下调,可能是As2O3克服耐药的敏感性指标,而GSTα、GSTμ则否.全反式维甲酸(ATRA)可能是Pgp转运底物和GSTπ催化作用底物.

氧化砷对MR_2细胞耐药蛋白的调节作用

目的 :研究氧化砷 (三氧化二砷 ,As2 O3 )对肿瘤耐药蛋白的作用。方法 :以耐维A酸 (ATRA)早幼粒白血病细胞株MR2 为研究对象 ,以非耐药早幼粒白血病细胞株NB4为对照组 ,用免疫组化法观察P 糖蛋白 (Pgp)、多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达。结果 :MR2 细胞Pgp表达 (30 %～ 4 0 % )较NB4细胞 (10 %～ 2 0 % )明显增强 (P <0 .0 0 1) ,MR2 细胞MRP表达 (6 0 .4± 4 .0～ 6 6 .5± 4 .4 )较NB4细胞 (2 8.3± 5 .6～ 31.2± 5 .1)明显增强 (P <0 .0 0 1)。 0 .5～ 2 .0μmol/L氧化砷能显著降低MR2 细胞Pgp、MRP表达。MR2 细胞Pgp、MRP表达的降低与氧化砷作用浓度和作用时间成负相关。结论 :MR2 细胞耐药蛋白Pgp、MRP表达的下调 ,可能是氧化砷克服耐药的敏感性指标。维A酸 (ATRA)可能是Pgp、MRP的转运底物。

亚硒酸钠诱导的人白血病耐药细胞株MR_2的生长抑制及凋亡

本文以人急性髓系白血病M3 型耐药细胞株 (抗全反式维甲酸ATRA)MR2 为研究对象 ,通过细胞生长增殖分析 ,细胞凋亡相关指标的检测 ,细胞内活性氧自由基含量的测定等 ,探讨亚硒酸钠对MR2 细胞的凋亡诱导作用及其作用机制。结果发现 :(1 )亚硒酸钠浓度大于 1 0 μmol L时对细胞株有明显的生长抑制作用 ,大于 2 0 μmol L时有明显的凋亡作用 ,并呈剂量时间依赖性增加。 40 μmol L的亚硒酸钠作用细胞 60h后 ,可使凋亡百分率超过 80 % ;(2 )亚硒酸钠作用细胞一定时间后可使胞内自由基水平增加 ,并在 2 4h时出现最大值。以上结果表明亚硒酸钠对MR2

氧化砷对MR2细胞耐药转运分子作用的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对肿瘤耐药转运分子的作用。方法以耐全反式维甲酸(ATRA)早幼粒白血病细胞株MR2为研究对象,以非耐药早幼粒白血病细胞株NB4为对照组,用免疫组化法观察P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药相关蛋白(LRP)的表达。结果MR2细胞Pgp表达为30%～40%,NB4细胞为10%～20%,二者差异有极显著性(P<0.001)。MR2细胞MRP表达为56.9±3.4～21.2±1.1,NB4细胞为20.6±5.3～16.7±1.2,二者差异有极显著性(P<0.001)。0.5～2.0μmol/LAs2O3能显著降低MR2细胞中Pgp和MRP的表达,而对LRP的表达无影响。MR2细胞中Pgp和MRP表达的降低与As2O3作用浓度和作用时间呈负相关。结论MR2细胞耐药转运分子Pgp和MRP表达的下调,可能是As2O3克服耐药的敏感靶分子,而LRP则否。

塞来昔布诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株MR2凋亡及机制的研究

目的:探讨塞来昔布诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株MR2细胞凋亡作用及其可能机制。方法:应用MTT法分析塞来昔布对细胞增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;PCR检测融合基因PML/RARα和凋亡相关基因Survivin表达;免疫印迹检测caspase-3、9和PARP蛋白表达。结果:MTT示塞来昔布对MR2细胞具有明显的增殖抑制作用,并具有时间和剂量依赖性。琼脂糖凝胶电泳见DNA片段化,形成典型梯状条带。流式细胞仪检测发现塞来昔布处理24 h后,随着作用浓度增加,MR2细胞早期凋亡率从5.06%增至36.1%,细胞内Survivin表达降低而PML/RARα无明显变化。同时伴有caspase-3、9和PARP蛋白的激活。结论:塞来昔布能够通过诱导凋亡抑制MR2细胞增殖,其机制可能与抑制Survivin表达有关,但与融合基因PML/RARα无明显关系。

维甲酸耐药细胞与敏感细胞的差异表达蛋白分析

背景与目的:维甲酸耐药机制有待进一步的深入研究。蛋白质组学以所有蛋白质为研究对象,从细胞水平及整体水平研究蛋白质的组成及其变化规律。本实验应用蛋白组学技术整体比较维甲酸耐药细胞与敏感细胞蛋白表达谱,筛选差异表达蛋白,以期获得维甲酸耐药相关蛋白。方法:提取维甲酸耐药细胞株MR2及维甲酸敏感细胞株NB4的总蛋白,通过双向凝胶电泳分离,获得二者高质量的蛋白表达谱,经PDQuestv7.1软件比较分析,筛选出二者间差异表达的蛋白质点,通过质谱仪鉴定表达差异的蛋白。结果:获得了分辨率高、重复性好的APL细胞的双向电泳图谱。PDQuestv7.1软件分析结果表明,MR2细胞及NB4细胞的pH4～7双向凝胶电泳所展示的蛋白点分别有(890±45)个和(912±56)个。二者间有57个差异显著的蛋白点,其中23个在MR2细胞中上调,34个下调。经质谱鉴定了10个蛋白,鉴定成功率达70%,鉴定的蛋白涉及癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:应用双向凝胶电泳技术整体展示了维甲酸耐药细胞株MR2及敏感细胞株NB4的蛋白表达谱,并分析、鉴定、筛选出与维甲酸耐药相关的差异表达蛋白,为进一步从多因素角度研究认识维甲酸耐药机制提供了新的线索。

基础理论

白藜芦醇对癌的化学预防作用//黄硐类化合物逆转Heb细胞多药耐药性//氧化砷对MR2细胞耐药蛋白的调节作用//肿瘤患者T细胞克隆性增殖与预后分析//关于PCR扩增体系优化的实验研究//临床级树突状细胞的分离和培养