肌萎缩性脊髓侧索硬化症细胞模型中mRAGE和esRAGE选择性剪接变化研究

目的探讨肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)细胞模型中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)两种亚型mRAGE和esRAGE选择性剪接变化。方法选取鼠运动元样细胞系NSC-34细胞为研究对象,以SH-SY5Y细胞c DNA为模板,构建铜/锌超氧化物歧化酶(SOD1)突变载体。将NSC-34细胞分为:空质粒组、正常SOD1蛋白表达质粒组、G93A质粒组,分别将空质粒、正常SOD1蛋白表达质粒、SOD1突变蛋白表达质粒(G93A质粒组)转染入细胞,另以正常NSC-34细胞组作为对照,不转染。转染后48 h,观察各组细胞形态学变化,采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)检测SOD1、mRAGE、esRAGE表达情况。结果 G93A质粒组与正常NSC-34细胞组细胞形态学比较,细胞胞体变圆,轴突变短且突起减少,空质粒组、正常SOD1蛋白表达质粒组与正常NSC-34细胞组比较无明显变化;qRT-PCR结果显示,正常SOD1蛋白表达质粒组、G93A质粒组细胞中SOD1为阳性表达,空质粒组及正常NSC-34细胞组SOD1为阴性表达,提示成功构建ALS细胞模型;与正常SOD1蛋白表达质粒组比较,G93A质粒组细胞中mRAGE表达明显增加(P<0.05),esRAGE表达明显降低(P<0.05)。结论在ALS病理过程中,胶质细胞中RAGE的选择性剪接调控异常改变,导致mRAGE亚型增加,esRAGE亚型减少。