重组牙鲆MRF4在大肠杆菌中的表达、纯化及多克隆抗体分析(英文)

MRF4 是肌肉发生调节因子家族的一员,其对肌肉的发育有重要的调节作用. 对于养殖鱼类,生长速度是很重要的经济指标,而肌肉的发育对鱼类的生长非常重要. 制备了 MRF4 的多克隆抗体以分析在鱼类中 MRF4 的功能. 通过采用大肠杆菌表达系统及 pET-30 表达载体对牙鲆肌肉发生调节因子 MRF4 进行了体外重组表达. 所得到的 MRF4 重组蛋白为可溶性的. 在自然条件下,经金属离子螯合柱纯化后,得到了电泳纯的融合蛋白,通过免疫新西兰大白兔制备 MRF4 的多克隆抗体. 蛋白质印迹分析显示:重组蛋白能被抗组氨酸标签的抗体及所制备的多克隆抗体识别,而且这一多克隆抗体能检测到内源性的 MRF4 蛋白,从而进一步证明了抗血清中含有 MRF4 的抗体. MRF4 融合蛋白的成功表达及其多克隆抗体的制备为进一步深入研究其在牙鲆肌肉发育过程中的分子机制奠定了基础.