双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用

目的:探讨双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)体系在细胞自噬中的作用。方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-II/LC3-I比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-e GFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素(200 nmol/L)处理3 h,采用荧光显微镜统计,并比较两种方法转染后HEK293细胞内LC3亮点的变化。结果:不同浓度雷帕霉素处理HEK293细胞,LC3-II蛋白和LC3-II/LC3-I比值均增加;转染GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色亮点的数量增加;转染mRFP-e GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色和红色亮点数量均增加。结论:双荧光mRFP-e GFP-LC3体系优于单荧光GFP-LC3体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法。

MRFP模块音频媒体能力的设计与实现

IMS网络中MRFP模块实现了IMS网络的媒体资源承载功能,具体包括音频媒体流编解码、转换、混合及播放等功能。为了能提供良好的媒体资源承载能力,MRFP模块需要有高度并发处理音频的能力。同时,MRFP模块还必须可以稳定地提供媒体处理能力。本文基于Elang开发语言及相应的电信开放平台,通过设计和实现一个高度并发及高度稳定的音频媒体处理系统,以使得MRFP模块的音频媒体承载能力可以得到进一步提升。

基于IMS的视频会议系统模型及其会话控制流程研究

对IETF和3GPP的会议模型进行了比较研究,在此基础上,全面解析了IMS架构下以MRFC/AS为核心的会议控制流程,探讨了AS和MRFC之间的交互机制。同时还分析了IMS会议的功能实体与主流设备厂家物理网元的对应关系。

慢病毒载体法制备红色荧光蛋白转基因小鼠

目的利用慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(mRFP)转基因小鼠,并建立转基因小鼠的技术平台。方法将携带mRFP基因的慢病毒注入ICR鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔代鼠,然后应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等鉴定并获得mRFP转基因鼠。结果移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎40枚给2只假孕母鼠,共获得仔鼠6只;利用体视荧光显微镜检测mRFP表达,在蛋白水平证实6只F0代中,2只(R3和R4)鼠耳高表达mRFP,其余的弱表达mRFP(R1、R2和R5)或荧光强度(R6)与野生型ICR鼠无明显差别,而DNA水平检测证实,6只F0代中,5只(R1、R2、R3、R4和R5)基因组中整合有外源转基因hUb-mRFP,预示基因型鉴定结果很好验证了体视荧光显微镜鉴定结果。此外,mRFP转基因首建鼠基因组中整合的mRFP基因可稳定遗传和表达。结论建立了慢病毒法快速制备转基因小鼠的技术平台,这为针对不同基因建立相应转基因小鼠以实现恒定或条件性的转基因过表达或RNA干涉(RNAi),并进而在体内解析相应基因功能和建立人类疾病模型等奠定了坚实基础。

基于IMS架构的视频会议多点技术研究

首先介绍了IMS视频会议系统概念,然后分析IMS系统框架结构,重点阐述基于IMS架构的视频会议系统多点技术实现机制、协议接口规范和多点控制与处理的业务流程。

饥饿诱导人胚肾细胞自噬模型的构建

目的探讨饥饿诱导的人胚肾细胞(HEK293)自噬模型的构建。方法采用Earle's平衡盐溶液(EBSS)分别处理HEK293细胞0、1、2、4、8 h,显微镜下观察细胞形态变化,蛋白免疫印迹法检测自噬微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62的表达;双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)质粒转染HEK293细胞24 h后,荧光显微镜观察EBSS饥饿条件下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的变化。结果饥饿处理后,HEK293细胞皱缩、变小变圆,蛋白免疫印迹法可检测到LC3的蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加;荧光显微镜可观察到细胞内红色和绿色LC3荧光亮点均增加。结论饥饿可成功诱导HEK293细胞自噬,表现为LC3蛋白表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的增加,以及荧光显微镜下细胞内红色和绿色LC3荧光亮点的增加。

基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用

目的:构建能够用于稳定动态监测细胞自噬流变化和过表达基因的红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-鼠源LC3融合慢病毒多功能表达载体(PCDH-Duo-mRFP-eGFPph-LC3rat,PCDH-Duo),并构建小鼠腹腔巨噬细胞Raw264. 7稳转株观察自噬流变化。方法:应用基于PCR精确合成mRFP-eGFPph-LC3rat融合全基因,将其克隆至慢病毒表达载体PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP中,重组质粒经菌落PCR、酶切及测序分析正确无误后,包装慢病毒,转染Raw264. 7细胞,并利用流式分选术获取稳转株,经氯喹抑制自噬模型及Western blot鉴定eGFP蛋白表达确认其可靠性。结果:成功构建了PCDH-Duo重组慢病毒质粒,包被慢病毒并获得Raw264. 7稳定细胞系(Raw264. 7-PCDHDuo),可稳定表达双荧光蛋白,经3mmol/L氯喹作用6h后,能够稳定准确指示自噬流变化。结论:成功构建了基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统,为研究细胞自噬与编码基因及非编码基因之间的关系提供了方便有力的工具。

智能光网络最大恢复失败概率的研究

随着光网络的迅速发展,多业务驱动下的智能光网络(ION)对服务质量(QoS)的要求愈加严格,对ION生存性的研究也必须考虑QoS问题。提出了与可生存的智能光网络的QoS可用性指标相关的概念—最大恢复失败概率(MRFP),将其嵌入工作通道优先算法(WPF),提出了基于最大恢复失败概率的工作通道优先算法(WPF-FP),并进行了仿真。