BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响

目的:探讨BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响及其治疗作用。方法:12周龄MRL/lpr小鼠分别腹腔注射JQ150 mg/(kg·d)或10%DMSO;每2周检测24 h尿蛋白定量;6周后检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、补体C3、补体C4、抗ds-DNA抗体、ANA及IgG、IgG1、IgG2a、IgM等免疫球蛋白水平;PAS染色观察肾脏组织病理学改变,免疫荧光染色观察IgG和C3免疫复合物沉积情况。利用流式细胞术检测小鼠B细胞各亚群细胞的比例;RT-qPCR检测脾脏prdm1 mRNA表达水平。结果:与DMSO组相比,JQ1治疗组小鼠24 h尿蛋白定量显著减少,血清BUN、Cr水平明显降低,补体C3、C4水平明显升高,抗ds-DNA抗体、ANA以及IgG、IgG1、IgG2a和IgM等免疫球蛋白水平明显降低;此外,JQ1治疗组小鼠肾小球、肾血管的病理损害程度均明显减轻,肾脏IgG和C3免疫复合物沉积显著减少。同时,JQ1治疗组小鼠脾脏、淋巴结、外周血B细胞中浆细胞和记忆B细胞亚群的比例显著下降;JQ1治疗亦显著抑制狼疮小鼠B细胞内调节浆细胞分化的关键转录因子prdm1 mRNA表达。结论:BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠具有显著的治疗作用,通过抑制Blimp1表达进而调节浆细胞分化可能是其发挥治疗作用的机制之一。BET蛋白可能是SLE治疗的新靶标。

解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr狼疮小鼠肾组织GRα的调控作用研究

目的探讨解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠肾组织糖皮质激素受体信号通路的作用机制。方法 30只MRL/lpr小鼠随机分为模型组、西药组和中药组,另选10只昆明鼠作为正常对照组。HE染色分析小鼠肾组织病理改变;RT-PCR和Western blot分析糖皮质激素受体α(GRα)的表达;免疫共沉淀检测GRα与亲环素A结合力的影响。结果两个用药组MRL/lpr小鼠肾损伤程度减轻。与模型组比较,西药组小鼠肾组织GRαmRNA及蛋白相对表达量降低,中药组两个指标增加,差异均有统计学意义(P<0.01)。解毒祛瘀滋肾方可显著提高GRα与亲环素A的结合力。结论上调GRα的表达并增强GRα与亲环素A的相互作用是解毒祛瘀滋肾方能够改善小鼠肾组织病变作用机制之一。

雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠抗ds-DNA抗体和T细胞表面分子CD69、CD25表达的影响

目的:初步观察雄黄对MRL/lpr狼疮小鼠SLE动物模型抗双链DNA抗体及T细胞表面分子CD69、CD25表达及其生存时间的影响。方法:将MRL/lpr狼疮小鼠随机分为空白(蒸馏水)对照组、纳米雄黄低中高剂量组,每天灌胃一次,分别在不同时间点采集血清和称重;在实验结束后,取外周淋巴结分离T细胞并体外培养;放射免疫法测定血清抗ds-DNA抗体效价,流式细胞仪检测T细胞表面活化分子CD69、CD25表达水平;并计算各个观察点的小鼠死亡率。结果:雄黄治疗各组MRL/lpr小鼠生存时间比对照组明显延长,差异有统计学意义(P<0.05);雄黄低、中、高各组血清抗ds-DNA抗体总平均值显著低于对照组,其中高剂量与低剂量比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。雄黄各剂量组T细胞表面的CD69和CD25表达水平较空白对照组有明显的降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:雄黄可能通过抑制MRL/lpr小鼠T细胞表面的CD69和CD25表达以减少T细胞的活化,从而减少抗ds-DNA抗体的分泌,减轻小鼠自身免疫反应损伤,延缓SLE疾病发展进程。

IL-21单克隆抗体对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用

目的:探讨IL-21单克隆抗体对MRL/lpr狼疮小鼠的免疫治疗作用。方法:将20只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组和治疗组,每组10只;同年龄同性别C57BL/6小鼠10只作为正常组。治疗组小鼠每周腹腔注射IL-21单克隆抗体(100μg),正常组及模型组小鼠每周腹腔注射等量生理盐水(100μg),连续干预8周。干预结束后观察小鼠皮毛、活动等一般性状及浅表淋巴结大小,并采集小鼠血液、尿液及肾脏标本。采用Western blot法检测三组小鼠肾组织中IL-21蛋白表达情况;采用ELISA法比较三组小鼠血清抗ds-DNA抗体、ANA抗体、血尿素氮、肌酐和炎症因子IL-17A、TGF-β1水平;采用生物化学法比较三组小鼠24 h尿蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠肾组织IL-21、血清抗ds-DNA、ANA抗体水平、尿素氮、肌酐、IL-17A浓度及24 h尿蛋白水平均升高(P<0.05),TGF-β1浓度降低(P<0.01);与模型组比较,治疗组小鼠肾组织IL-21、血清抗ds-DNA、ANA抗体水平、尿素氮、肌酐、IL-17A浓度、24 h尿蛋白水平均降低(P<0.05),TGF-β1浓度升高(P<0.01)。结论:腹腔注射IL-21单克隆抗体可改善MRL/lpr狼疮小鼠免疫功能与肾损害,提示治疗机制可能与重塑Th17/Treg相关细胞因子平衡有关。

复方生地合剂对MRL/lpr狼疮小鼠TLR-NF-κB信号通路的调节作用

目的:探讨复方生地合剂对MRL/lpr狼疮小鼠Toll样受体(toll like receptors,TLRs)-核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的调节作用。方法:采用随机数字表法将MRL/lpr狼疮小鼠随机分组为模型组、中药组、西药组,另以C57BL/6小鼠作为空白组每组10只,均为12周龄雌性小鼠。中药组给予复方生地合剂灌胃治疗,西药组给予强的松悬液灌胃治疗,对照组和模型组以生理盐水灌胃治疗。8周后取外周血和脾脏分别检测外周血抗双链DNA抗体(Anti-double-stranded DNA antibody,dsDNA抗体)、干扰素-α(Interferon-α,IFN-α)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平、脾组织中TLR7/9,髓样分化因子88(myeloid differentiation primary-response gene 88,MyD88),NF-κB的基因表达以及TLR7、MyD88、NF-κB的蛋白表达。结果:模型组外周血dsDNA抗体、TNF-α和IFN-α水平高于空白组,中药组dsDNA抗体、TNF-α和IFN-α水平均低于模型组;模型组脾组织的TLR7、TLR9、MyD88和NF-κB的mRNA和蛋白表达都高于空白组mRNA和蛋白表达水平;中药组脾组织TLR7、TLR9、MyD88和NF-κB的mRNA以及TLR7、MyD88和NF-κB p65的蛋白表达水平都低于模型组mRNA和蛋白表达水。结论:复方生地合剂可以降低MRL/lpr狼疮小鼠外周血dsDNA水平,可能通过下调MRL/lpr狼疮小鼠TLR-MyD88-NF-κB通路发挥作用。

MRL/lpr狼疮小鼠和C57小鼠血常规、主要脏器系数的测定与比较

目的测定C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠在4月龄、5月龄和6月龄的血常规值和脏器系数。方法用MEK-7222K全自动血液分析仪检测C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠血常规值。结果血常规检测方面,C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠相比,中性粒细胞百分率(NE%)、红细胞计数(RBC)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均血红蛋白(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)在不同月龄的数值差异极显著(P<0.01);其中9个检测比较项目差异不显著(P>0.05)。脏器系数方面,C57小鼠的心脏系数、肾脏系数显著高于同月龄的MRL/lpr转基因小鼠(P<0.01);MRL/lpr转基因小鼠的肝脏系数显著高于同月龄的C57小鼠(P<0.01);其他比较项目差异不显著(P>0.05)。结论 C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠在同月龄的部分血常规数据和脏器系数差异显著。

青蒿-鳖甲药对配伍对MRL/lpr狼疮小鼠IL-6、IFN-γ分泌及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的:观察青蒿-鳖甲药对对MRL/lpr狼疮模型小鼠相关免疫指标及狼疮性肾炎(lupus nephri-tis,LN)病理改变的影响,探索青蒿-鳖甲药对对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的治疗机理。方法:采用ELISA方法检测小鼠血清中的IL-6、IFN-γ含量,对肾脏组织进行HE常规染色及PAS、Masson特殊染色。结果:灌胃青篙-鳖甲药对水煎液后,低、高剂量组MRL/lpr小鼠血清中的IL-6水平显著低于正常对照组(P<0.05或P<0.01);高剂量组血清中的IFN-γ水平与模型组相比,显著下降(P<0.05);高剂量组肾脏组织HE、PAS、Masson染色病理改变差异显著。结论:青蒿-鳖甲药对能抑制MRL/lpr小鼠血清中IL-6的生成,减少小鼠血清中IFN-γ的分泌,能明显改善小鼠狼疮性肾炎的病理状态。

MRL/lpr狼疮小鼠CD4^+ CD25^+调节性T细胞和相关基因的研究

目的通过研究MRL/lpr系统性红斑狼疮(SLE)小鼠(模型组)胸腺、脾脏中CD4+ CD25+调节性T细胞(Tr)数量和相关基因的变化,探讨Tr在SLE发病中的作用。方法采用间接免疫荧光法检测模型组和对照组血清中抗核抗体水平,流式细胞术检测胸腺、脾脏中Tr数量,RT-PCR检测Tr功能基因表达水平。结果抗核抗体模型组均为阳性,而对照组均为阴性;胸腺、脾脏中Tr数量模型组与对照组无明显差别;Foxp3的表达水平在模型组胸腺中与对照组无明显差别,而在模型组脾脏中却低于对照组;CTLA-4的表达水平在模型组胸腺和脾脏均高于对照组。结论Tr数量的变化在MRL/lpr小鼠的发病中不起关键作用,而Tr功能的变化,尤其在外周的功能缺陷可能是其发病的原因之一,至于Tr的抑制功能是否真正发生变化,还有待于进一步通过体外抑制功能的检测来确定。

解毒祛瘀滋肾方干预TLR9信号通路对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏的保护作用

目的基于对TLR9-My D88-NF-κB通路的干预作用,阐明解毒祛瘀滋肾方对狼疮鼠肾脏的保护作用。方法将30只MRL/lpr狼疮鼠随机分为模型对照组、泼尼松治疗组、中药组共3组,对各治疗组进行相应的药物治疗,疗程8周。采用HE染色法、PAS染色法、Masson染色法分别对MRL/lpr小鼠肾脏切片进行病理染色,观察比较3组小鼠病理变化及治疗效果;采用real-time PCR法观察比较各组小鼠TLR-9、My D88、NF-κB mRNA表达量的差异。结果与模型组比较,中药组能明显改善MRL/lpr小鼠的肾组织病理损伤。Real-time PCR法结果显示:中药组MRL/lpr小鼠的肾组织TLR-9、My D88、NF-κB mRNA表达均低于模型组(均为P<0.05)。结论解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠肾脏具有保护作用,可对其病理变化产生影响,减轻其肾脏损害,延缓病程,并与解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr小鼠TLR-9-My D88-NF-κB信号通路的抑制作用相关。

CP-25抑制Th17细胞分化改善MRL/lpr狼疮小鼠肾损伤

目的研究芍药苷-6’-O-苯磺酸酯(CP-25)对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用及其对Th17细胞功能的调节。方法随机将MRL/lpr小鼠分为模型组、CP-25(20、40、80 mg·kg^(-1))组和泼尼松(prednisone,Pre)组(5 mg·kg^(-1)),设BALB/c小鼠为正常对照。给药组每日给予相应药物,正常组与模型组给予溶媒。HE染色观察小鼠肾脏病理,流式检测小鼠脾脏中T细胞亚群比例;Western blot和qPCR法分别检测小鼠脾脏p-STAT3、RORγt蛋白表达及IL-17A mRNA水平;ELISA法检测血清中IL-17A和抗dsDNA抗体水平。体外诱导Th17细胞分化,观察CP-25对Th17分化、p-STAT3和RORγt蛋白和IL-17A mRNA水平的影响。结果CP-25可明显改善MRL/lpr小鼠肾脏病理,降低抗dsDNA、IL-17A水平;降低小鼠脾脏中CD3^(+)细胞、CD4^(+)CD69^(+)细胞和CD4^(+)IL-17^(+)Th17细胞比例;降低脾脏p-STAT3、RORγt蛋白表达及IL-17A mRNA水平。体外结果显示,CP-25可抑制Th17细胞分化,降低p-STAT3、RORγt表达。结论CP-25可改善MRL/lpr小鼠肾脏病理,其机制与抑制STAT3的磷酸化,调节Th17细胞分化有关。

CD40 siRNA对MRL/Lpr狼疮小鼠炎症反应的影响

目的:观察CD40的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)动物模型MRL/Lpr小鼠细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-4和抗双链DNA(anti-double strand DNA,anti-dsDNA)抗体表达水平的影响,探讨CD40 siRNA治疗MRL/Lpr小鼠的可能性。方法:16只MRL/Lpr小鼠随机分为对照组、空载体组、CD40-siRNA1组及CD40-siRNA2组,每组4只,将成功构建的CD40 siRNA表达载体尾静脉注射MRL/Lpr小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射等剂量、等比例的磷酸盐缓冲液(PBS)和p GFP-V-RS空载体,每隔1天1次,共6次,14 d处死小鼠,称其脾的质量,组织切片在荧光显微镜下观察小鼠脾是否有CD40 siRNA的表达,注射前及注射后第2、5、8、11和14天小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的表达水平变化,RT-PCR法检测小鼠脾组织中CD40 mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测小鼠脾组织中CD40蛋白的表达水平。结果:注射后的siRNA表达载体可以在小鼠脾中表达;注射CD40 siRNA组的小鼠脾质量减轻,由对照组(141.88±7.81)mg和空载体组(153.10±7.60)mg降低至CD40-siRNA1组(78.85±5.61)mg和CD40-siRNA2组(80.25±4.07)mg,注射前4组小鼠血清中IFN-γ、IL-17、IL-4和anti-ds DNA抗体的(质量)浓度比较,差异无统计学意义;而注射后第2、5和8天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠血清中IFN-γ、IL-17和(质量)浓度明显下降,CD40-siRNA1组的IFN-γ的(质量)浓度依次为(118.74±10.32)ng/L(pg/m L)、(115.24±8.26)ng/L、(113.71±5.02)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(117.83±6.83)ng/L、(114.07±0.97)ng/L、(112.67±9.66)ng/L;CD40-siRNA1组的IL-17的(质量)浓度依次为(7.05±0.41)ng/L、(6.34±0.76)ng/L、(5.83±0.43)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(7.07±0.22)ng/L、(6.35±0.49)ng/L、(6.12±0.80)ng/L;CD40-siRNA1组的anti-ds DNA的浓度依次为(7.51±0.29)ng/L、(6.74±0.45)ng/L、(6.32±0.39)ng/L;CD40-siRNA2组依次为(8.19±0.38)ng/L、(7.14±0.50)ng/L、(6.48±0.29)ng/L。IL-4的(质量)浓度明显升高,CD40-siRNA1组IL-4的(质量)浓度依次为(26.51±1.81)ng/L、(27.80±1.72)ng/L、(28.08±2.21)ng/L,CD40-siRNA2组依次为(26.28±2.03)ng/L、(28.15±2.95)ng/L、(28.37±1.71)ng/L。CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组与对照组和空载体组比较差异有统计学意义(P<0.05),注射后第11和14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组中这4个指标的(质量)浓度逐渐恢复至对照组和空载体组的(质量)浓度水平,IFN-γ、IL-17、IL-4的(质量)浓度4组小鼠比较,差异无统计学意义,注射后第11天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组anti-ds DNA抗体的水平尽管与对照组和空载体组比较有所提高,4组比较差异有统计学意义(P<0.05),而注射后第14天anti-ds DNA抗体的水平4组小鼠比较,差异无统计学意义。注射后第14天CD40-siRNA1组和CD40-siRNA2组MRL/Lpr小鼠脾组织中CD40 mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MRL/Lpr小鼠注射CD40 siRNA载体后,血清中IFN-γ、IL-17和anti-ds DNA抗体水平降低,IL-4的浓度升高,CD40 mRNA和蛋白的表达水平下降,说明CD40 siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠炎症反应减轻,疾病活动度下降,提示其对SLE动物模型MRL/Lpr小鼠有治疗作用。

解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr狼疮小鼠皮肤组织JAK1/STAT3信号通路的影响

[目的]探讨解毒祛瘀滋肾方对MRL/lpr狼疮小鼠皮肤组织酪氨酸蛋白激酶1/信号转导与转录激活因子3(Janus kinase 1/signal transducers and activators of transcription 3,JAK1/STAT3)信号通路的影响。[方法]将30只MRL/lpr小鼠随机分成模型组、西药组(强的松组)和中药组(解毒祛瘀滋肾方组),另选10只C57BL/6小鼠作为对照组。中药组予0.5mg·mL^-1的解毒祛瘀滋肾方水煎剂灌胃,西药组予0.5mg·mL^-1的强的松片混悬液灌胃,模型组和对照组予相同体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,各组均灌胃1次/d,连续干预8周。干预结束后观察小鼠皮毛、活动等一般性状及浅表淋巴结大小,并采集小鼠血液、皮肤和肾脏等样本。以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察皮损组织病理变化,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清JAK1/STAT3通路上游分子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10含量;Western blot检测皮肤组织JAK/STAT信号通路中JAK1、STAT3蛋白表达。[结果]与对照组比较,模型组小鼠皮肤组织病理显示损伤明显,血清IL-6、IL-10含量均明显升高(P<0.01),JAK1、STAT3蛋白表达均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,中药组、西药组小鼠皮肤病理损伤明显改善,血清IL-6、IL-10含量明显降低(P<0.01),皮肤JAK1、STAT3蛋白表达明显降低(P<0.01)。与西药组比较,中药组血清IL-6含量差异无统计学意义(P>0.05),而血清IL-10含量明显升高(P<0.05),JAK1、STAT3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]解毒祛瘀滋肾方能够降低MRL/lpr小鼠血清IL-6、IL-10含量,可抑制皮肤组织中JAK1、STAT3蛋白表达,提示阻断JAK/STAT信号通路可能是解毒祛瘀滋肾方治疗系统性红斑狼疮的作用机制之一。

基于16S rRNA高通量测序技术初步探讨双歧杆菌乳杆菌三联活菌片对系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr肠道菌群的影响

目的:基于16S rRNA高通量测序技术初步探讨双歧杆菌乳杆菌三联活菌片(金双歧)对系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr肠道菌群的影响。方法:将12只6~8周龄雌性SPF级MRL/lpr小鼠随机分为模型对照组和金双歧高、中、低剂量组,每组3只,以3只雌性6~8周龄SPF级BALB/C小鼠作为空白对照组。适应性喂养3 d后,金双歧高、中、低剂量组分别以金双歧溶液234μg、78μg、26μg灌胃,模型对照组及空白对照组每日灌胃等量生理盐水。灌胃1周后,从12只MRL/lpr小鼠和3只BALB/C小鼠的粪便中提取DNA,对核糖体RNA V3-V4区进行扩增,进行高通量测序得到原始数据,通过生物信息学的方法对数据进行质控过滤,对样品Alpha/Beta多样性进行分析以及后续差异分析。结果:Chao1、ACE、Shannon、Simpson指数的Alpha多样性分析显示,5组之间差异无统计学意义(P>0.05)。灌胃后,金双歧高、中、低剂量组Neisseria、Pseudomonas、Haemophilus的相对丰度明显低于模型对照组(P<0.05);金双歧中剂量组Actinobacteriota的相对丰度高于模型对照组、金双歧高剂量组、金双歧低剂量组(P<0.05);与空白对照组比较,金双歧高、中、低剂量组及模型对照组unidentified-Blautia的相对丰度降低(P<0.05)。结论:金双歧高、中、低剂量灌胃后,使Neisseria、Pseudomonas、Haemophilus、Lachnospira等有害菌的丰度下调。金双歧低剂量灌胃后,有益菌Fusobacteriota上调,说明金双歧能影响系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr的肠道菌群。

槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮小鼠肾损伤治疗作用的影响

目的研究槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮小鼠肾损伤病理进程发展的影响。方法正常饲养C57BL/6小鼠8只为正常组。8~10周龄MRL/Lpr狼疮小鼠24只随机分为模型组、槐杞黄颗粒组(HQH组)、地塞米松组(DXM组),每组8只。MRL/Lpr狼疮小鼠12周龄左右开始发病,HQH组与DXM组分别给予槐杞黄颗粒(4 g/kg)及地塞米松(2.5 mg/kg)灌胃治疗,每天1次,共治疗15天。检测各组小鼠体重,24 h尿蛋白、白蛋白、SCr、BUN及抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(ds DNA)含量水平,HE染色观察肾脏组织病理,免疫荧光发检测IgG及C3。结果与正常组比较,模型组体重增长差值减少,ANA、ds DNA、白蛋白、SCr、BUN水平升高(P<0.01)。与模型组比较,DXM组及HQH组体重差值增加(P<0.01),ANA、ds DNA、白蛋白、SCr、BUN水平下降(P<0.01)。与治疗前比较,治疗后DXM组及HQH组24 h尿蛋白量明显下降(P<0.05,P<0.01)。HE染色可见模型组肾小球细胞增生,且肾小球毛细血管壁有明显损伤,肾小球和肾间质炎细胞浸润,同时肾小管肿胀明显;DXM组和HQH组炎性细胞浸润明显减少,肾小管肿胀有所减轻。免疫荧光检测显示与正常组小鼠比较,模型组小鼠肾脏中IgG表达上升,C3的表达下降;DXM组及HQH组小鼠肾脏中IgG表达下降,C3表达上升。结论槐杞黄颗粒有改善MRL/Lpr狼疮小鼠肾脏病理的作用。

解毒祛瘀滋阴方和醋酸泼尼松治疗对MRL/lpr狼疮小鼠肠道微生态影响的比较

目的:比较解毒祛瘀滋阴方和醋酸泼尼松对MRL/lpr狼疮小鼠的肠道菌群影响,阐述中医药的优势。方法:运用Illumina MiSeq高通量测序技术分析狼疮模型小鼠、醋酸泼尼松治疗的狼疮小鼠和解毒祛瘀滋阴方治疗的狼疮小鼠的肠道菌群结构,利用LEfSe分析挖掘组间差异微生物。结果:与MRL/lpr狼疮小鼠比较,醋酸泼尼松治疗能上调Prevotella等致病菌丰度,但解毒祛瘀滋阴方治疗却下调其丰度。解毒祛瘀滋阴方治疗后的狼疮小鼠,肠道菌群多样性显著上调,Odoribacter和Ruminococcus等有益菌丰度上调。结论:相比于醋酸泼尼松,解毒祛瘀滋阴方更利于MRL/lpr狼疮小鼠肠道菌群的改善。

基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用

[目的]研究狼疮定对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响,并分析其对核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调节作用。[方法]将12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组(6只)、干预组(6只),另选取C57BL/6小鼠6只为对照组。干预组灌胃给予0.1 mL/10 g狼疮定浓缩液,对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,所有动物均干预8周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、α-干扰素(interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitorɑ,IκBα)、NF-κB抑制蛋白αp50(NF-κB inhibitorɑp50,IκBαp50)、NF-κB抑制蛋白αp65(NF-κB inhibitorɑp65,IκBαp65)表达水平,采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction,ARMS-q PCR)检测NF-κB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况,采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。[结果]与对照组比较,模型组血清炎性因子IL-6、IFN-α、TNF-α、NF-κB信号通路相关蛋白(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平、NF-κB信号通路相关mRNA(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平均显著升高(P<0.05),肾组织中IL-6、IFN-α、TNF-α表达水平升高(P<0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显,主要表现为肾小管扩张,肾小球硬化,结构严重破坏,且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后,MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P<0.05),肾组织炎性损伤较模型组减轻。[结论]狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应,从而减轻炎性肾损伤,其作用机制可能与下调NF-κB信号通路有关。

早期不同肠道菌群对解毒祛瘀滋阴方治疗MRL/lpr狼疮小鼠的影响

目的:探究不同初始肠道菌群对解毒祛瘀滋阴方治疗狼疮的影响。方法:雌性MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型对照组(灌胃0.9%氯化钠溶液,持续21d)、抗生素组(先灌胃抗生素混悬液14d,再灌胃0.9%氯化钠溶液7d)和粪菌移植组(先灌胃抗生素混悬液14d,再灌胃C57BL/6正常小鼠的粪菌悬液7d),再用解毒祛瘀滋阴方进行治疗,并用Illumina MiSeq高通量测序技术检测肠道菌群的改变,采用ELISA、RT-qPCR和HE染色评估狼疮病情变化。结果:在3种含不同初始肠道菌群的MRL/lpr小鼠中,解毒祛瘀滋阴方治疗过程中改变的肠道菌群和缓解狼疮的效果均具有差异。在正常肠道菌群的小鼠中,解毒祛瘀滋阴方能显著降低血清anti-dsDNA、IL-6、Cr和LDH的含量(P<0.01,P<0.05),降低肾脏TLR7/9基因的表达(P<0.01)和缓解肾脏病变,然而在抗生素小鼠中仅能显著降低血清anti-dsDNA和IL-6含量(P<0.01),在粪菌移植小鼠中未起到任何显著效果。结论:不同初始肠道菌群可影响解毒祛瘀滋阴方治疗SLE的疗效。

槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮肾小鼠Th17细胞的影响及机制研究

目的探讨槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮肾小鼠Th17细胞的影响以及相关机制。方法正常饲养C57BL/6小鼠8只为空白对照组,8~10周龄MRL/Lpr狼疮小鼠24只,随机分为模型组、槐杞黄颗粒治疗组和地塞米松治疗组,每组8只。MRL/Lpr狼疮小鼠12周龄左右开始发病,分别给予槐杞黄颗粒或地塞米松治疗,检测各组处理前后24h尿蛋白定量,血清TGF-β、IL-17含量,肾脏RORC mRNA表达水平。结果与模型组比较,地塞米松组和槐杞黄组小鼠治疗后尿蛋白含量明显下降[(245.87±47.25)mg/L、(333.18±22.19)mg/L比(474.69±48.76)mg/L,P<0.05];与空白组比较,地塞米松组、槐杞黄组TGF-β和IL-17均升高[TGF-β:(262.69±23.53)ng/L、(352.05±26.77)ng/L比(166.12±36.44)ng/L,P<0.01;IL-17:(265.25±44.29)pg/mL、(317.33±46.83)pg/mL比(172.03±45.21)pg/mL,P<0.05,P<0.01];与模型组比较,地塞米松组、槐杞黄组TGF-β和IL-17明显降低[TGF-β:(262.69±23.53)ng/L、(352.05±26.77)ng/L比(593.84±35.02)ng/L,P<0.01;IL-17:(265.25±44.29)pg/mL、(317.33±46.83)pg/mL比(602.13±58.30)pg/mL,P<0.01];与空白组比较,模型组肾脏Th17细胞比例和细胞数、RORC mRNA表达量显著上升[Th17比例:(8.62±0.77)%比(0.05±0.02)%,P<0.01;Th17细胞数:(8.62±0.77)104/mL比(0.05±0.02)104/mL,P<0.01;RORC mRNA:(11.08±0.89)比(1.00±0.05),P<0.01];与模型组比较,地塞米松组、槐杞黄组肾脏Th17细胞比例和细胞数、RORC mRNA表达显著下降[Th17比例:(0.15±0.04)%、(4.06±0.43)%比(8.62±0.77)%,P<0.01;Th17细胞数:(0.15±0.04)104/mL、(4.06±0.43)104/mL比(8.62±0.77)104/mL,P<0.01;RORC mRNA:(3.67±0.39)、(5.53±0.49)比(11.08±0.89),P<0.01]。结论槐杞黄颗粒能减少狼疮肾小鼠尿蛋白排出,调节Th17细胞分化,其机制可能与下调RORCmRNA表达有关。

MRL／lpr狼疮虚热证小鼠模型的建立与评价

目的探讨建立MRL／lpr狼疮虚热证小鼠模型的方法。方法取MRL／1pr狼疮小鼠随机分为两组，模型组给予长时间灌胃附子、肉桂、干姜（1：1：1）水煎液，空白对照组灌胃同次数等量生理盐水，造模结束后，检测MRL／lpr狼疮小鼠血清中T3、T4、E2、T、COR的变化。结果造模结束后，模型组MRL／1pr狼疮小鼠血清中T3、T4、E2、COR的含量均高于空白对照组，T的含量低于空白对照组，出现中医虚热证的临床表现。结论利用温热中药水煎剂灌胃造模复制MRL／lp浓疮虚热证小鼠模型的方法是可行的。

基于HPV16的新型伪病毒治疗MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的实验研究

目的构建基于人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,探讨对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用,为临床治疗系统性红斑狼疮提供实验依据。方法将12只3月龄MRL/lpr狼疮小鼠随机均分为治疗组和对照组,治疗前后测定尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体滴度。结果治疗组小鼠治疗后的尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体均下降,与治疗前有显著性差异(P<0.05),而对照组治疗前后无显著性差异(P>0.05),并且治疗组小鼠的平均生存期比对照组明显延长(P<0.05)。结论基于人乳头状病毒16型的新型伪病毒可显著改善MRL/lpr小鼠的免疫状况和肾脏功能,提高平均生存期。该研究结果为临床治疗系统性红斑狼疮提供了新的启示。