基于16S rRNA高通量测序技术初步探讨双歧杆菌乳杆菌三联活菌片对系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr肠道菌群的影响

目的:基于16S rRNA高通量测序技术初步探讨双歧杆菌乳杆菌三联活菌片(金双歧)对系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr肠道菌群的影响。方法:将12只6~8周龄雌性SPF级MRL/lpr小鼠随机分为模型对照组和金双歧高、中、低剂量组,每组3只,以3只雌性6~8周龄SPF级BALB/C小鼠作为空白对照组。适应性喂养3 d后,金双歧高、中、低剂量组分别以金双歧溶液234μg、78μg、26μg灌胃,模型对照组及空白对照组每日灌胃等量生理盐水。灌胃1周后,从12只MRL/lpr小鼠和3只BALB/C小鼠的粪便中提取DNA,对核糖体RNA V3-V4区进行扩增,进行高通量测序得到原始数据,通过生物信息学的方法对数据进行质控过滤,对样品Alpha/Beta多样性进行分析以及后续差异分析。结果:Chao1、ACE、Shannon、Simpson指数的Alpha多样性分析显示,5组之间差异无统计学意义(P>0.05)。灌胃后,金双歧高、中、低剂量组Neisseria、Pseudomonas、Haemophilus的相对丰度明显低于模型对照组(P<0.05);金双歧中剂量组Actinobacteriota的相对丰度高于模型对照组、金双歧高剂量组、金双歧低剂量组(P<0.05);与空白对照组比较,金双歧高、中、低剂量组及模型对照组unidentified-Blautia的相对丰度降低(P<0.05)。结论:金双歧高、中、低剂量灌胃后,使Neisseria、Pseudomonas、Haemophilus、Lachnospira等有害菌的丰度下调。金双歧低剂量灌胃后,有益菌Fusobacteriota上调,说明金双歧能影响系统性红斑狼疮模型小鼠MRL/lpr的肠道菌群。

BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响

目的:探讨BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响及其治疗作用。方法:12周龄MRL/lpr小鼠分别腹腔注射JQ150 mg/(kg·d)或10%DMSO;每2周检测24 h尿蛋白定量;6周后检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、补体C3、补体C4、抗ds-DNA抗体、ANA及IgG、IgG1、IgG2a、IgM等免疫球蛋白水平;PAS染色观察肾脏组织病理学改变,免疫荧光染色观察IgG和C3免疫复合物沉积情况。利用流式细胞术检测小鼠B细胞各亚群细胞的比例;RT-qPCR检测脾脏prdm1 mRNA表达水平。结果:与DMSO组相比,JQ1治疗组小鼠24 h尿蛋白定量显著减少,血清BUN、Cr水平明显降低,补体C3、C4水平明显升高,抗ds-DNA抗体、ANA以及IgG、IgG1、IgG2a和IgM等免疫球蛋白水平明显降低;此外,JQ1治疗组小鼠肾小球、肾血管的病理损害程度均明显减轻,肾脏IgG和C3免疫复合物沉积显著减少。同时,JQ1治疗组小鼠脾脏、淋巴结、外周血B细胞中浆细胞和记忆B细胞亚群的比例显著下降;JQ1治疗亦显著抑制狼疮小鼠B细胞内调节浆细胞分化的关键转录因子prdm1 mRNA表达。结论:BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠具有显著的治疗作用,通过抑制Blimp1表达进而调节浆细胞分化可能是其发挥治疗作用的机制之一。BET蛋白可能是SLE治疗的新靶标。

基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用

[目的]研究狼疮定对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响,并分析其对核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的调节作用。[方法]将12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组(6只)、干预组(6只),另选取C57BL/6小鼠6只为对照组。干预组灌胃给予0.1 mL/10 g狼疮定浓缩液,对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液,所有动物均干预8周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、α-干扰素(interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitorɑ,IκBα)、NF-κB抑制蛋白αp50(NF-κB inhibitorɑp50,IκBαp50)、NF-κB抑制蛋白αp65(NF-κB inhibitorɑp65,IκBαp65)表达水平,采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction,ARMS-q PCR)检测NF-κB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况,采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。[结果]与对照组比较,模型组血清炎性因子IL-6、IFN-α、TNF-α、NF-κB信号通路相关蛋白(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平、NF-κB信号通路相关mRNA(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平均显著升高(P<0.05),肾组织中IL-6、IFN-α、TNF-α表达水平升高(P<0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显,主要表现为肾小管扩张,肾小球硬化,结构严重破坏,且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后,MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P<0.05),肾组织炎性损伤较模型组减轻。[结论]狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应,从而减轻炎性肾损伤,其作用机制可能与下调NF-κB信号通路有关。

白芍总苷对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的影响

目的观察白芍总苷(TGP)对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的影响。方法将MRL/lpr狼疮肾炎小鼠随机分为模型组和TGP组。考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IgG型抗dsDNA抗体、ANA水平,HE染色光镜下观察肾组织病理改变,称脾脏和胸腺湿重,并计算脾脏和胸腺指数。结果①与模型组相比,TGP组用药后15、30 d尿蛋白含量显著下降(P<0.05),用药后30 d抗dsDNA抗体、ANA水平和脾脏质量及其指数均显著下降(P<0.05),肾脏组织病理损害明显减轻。②TGP组用药后15、30 d与用药前相比,尿蛋白含量、抗dsDNA抗体水平、ANA水平显著下降(P<0.05),而模型组抗dsDNA抗体水平显著上升(P<0.05),尿蛋白含量、ANA水平无显著差异;TGP组用药后30d与用药后15d相比尿蛋白含量显著下降(P<0.05),抗体水平无显著差异。结论白芍总苷可以降低尿蛋白含量和血清抗dsDNA抗体、ANA水平,明显改善肾组织病理损害,对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎具有一定疗效。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和脾淋巴细胞亚群增殖的影响

目的研究三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和淋巴细胞亚群的影响。方法将MRL/lpr狼疮鼠随机分为:ATO组、生理盐水(NS)组和环磷酰胺(CTX)组。另设正常C57/BL小鼠,随机分为ATO治疗组(0.4 mg/kg.d)和对照组(0.25 mL)。以上每组各6只,隔日腹腔注射,给药2个月后处死,称体重和脾脏重量算出脾脏指数;ELISA法测各组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平;流式细胞术测脾脏细胞亚群百分比。结果(1)MRL/lpr小鼠ATO治疗组脾脏指数、血清抗ds-DNA抗体水平和CD19+、CD3+、CD3+CD4+细胞百分比均低于NS对照组(P<0.01或P<0.05),NK细胞百分比明显高于NS对照组(P<0.05);(2)ATO治疗组小鼠的脾脏指数和CD3CD4双阳性细胞百分比显著低于CTX组(P<0.01),CTX治疗组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平均较对照组明显降低(P<0.01),但ATO治疗组的抗体水平较CTX治疗组高(P<0.05);(3)在C57/BL小鼠中,ATO治疗组和NS治疗组之间以上指标均无差异。结论ATO抑制MRL/lpr狼疮鼠T、B淋巴细胞活化同时上调NK细胞功能,减少体内自身抗体产生;但是对正常小鼠的抗体水平和细胞亚群并无明显影响。

TACI-Ig对MRL/lpr小鼠的治疗作用及其对小鼠肾组织JAK1-STAT1信号通路的影响

目的研究TACI-Ig对MRL/lpr小鼠的治疗作用以及TACI-Ig对狼疮性肾炎肾组织JAK1-STAT1信号通路活化的影响。方法将MRL/lpr红斑狼疮转基因小鼠随机分成6组,即模型组、TACI-Ig 3个剂量治疗组(3.75、7.5、15 mg.kg-1)组、强的松阳性对照组和IgG-Fc阴性对照组,另选用BALB/c小鼠作为正常对照组。除强的松组每日灌胃给药外,其余各组隔日皮下注射给药,共计8周,模型组和正常组给予生理盐水。观察TACI-Ig对MRL/lpr小鼠一般体征、损伤指数的影响,目测半定量尿蛋白试纸法检测动物的尿蛋白变化,HE染色法观察肾组织病理学改变情况,全自动生化分析仪检测血清中肌酐和尿素氮的水平,ELISA法检测血清中BLyS、IL-10和IFN-γ的水平,免疫组化法检测肾脏磷酸化的JAK1和STAT1的表达分布情况。结果 TACI-Ig(7.5、15mg.kg-1)皮下注射给药8周可明显降低模型小鼠的尿蛋白水平和损伤指数;有效改善肾小球系膜细胞增生和肾小球纤维化,明显减轻炎性细胞浸润;TACI-Ig给药可明显降低小鼠血清中的肌酐和尿素氮水平以及血清中BLyS、IL-10、IFN-γ等细胞因子水平。免疫组化结果显示模型组小鼠的肾脏磷酸化的JAK1和STAT1蛋白的表达明显升高,在肾小球、肾间质中呈强阳性表达,TACI-Ig给药后可使其表达明显降低。结论 TACI-Ig可明显改善MRL/lpr小鼠红斑狼疮样的临床表现和肾脏病理特征,降低血清中细胞因子和肾组织中磷酸化JAK1、STAT1蛋白的表达水平,这可能是TACI-Ig治疗狼疮性肾炎的机制之一。

纳米雄黄影响MRL/lpr小鼠B细胞表型和功能的初步研究

目的:探索纳米雄黄对MRL/lpr小鼠B细胞功能的影响。方法:分别用生理盐水,低、中、高剂量纳米雄黄混悬液各0.2 ml,给MRL/lpr小鼠灌胃12周后,处死各组小鼠,磁珠分选小鼠脾脏B细胞。CCK-8法检测B细胞增殖活力;流式细胞仪检测B细胞凋亡,Ca2+浓度及CD69、CD40的表达。结果:获得的B细胞纯度高达94%。雄黄不影响MRL/lpr小鼠脾脏B细胞的增殖,也不影响早期活化分子CD69的表达。但雄黄能促进MRL/lpr小鼠脾脏B凋亡,可升高其内Ca2+浓度,并可下调其表面共刺激分子CD40的表达。结论:雄黄能通过升高MRL/lpr小鼠B细胞内Ca2+浓度,促进其凋亡,减少其表面共刺激因子的表达,抑制其活化,从而减少自身抗体的产生,减轻MRL/lpr小鼠自身免疫损伤,减缓SLE病程。

解毒祛瘀滋阴药对MRL／lpr小鼠外周血淋巴细胞凋亡及Caspase表达的影响

目的:探讨解毒祛瘀滋阴中药对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞凋亡及其Caspase2、Caspase3蛋白的影响。方法:80只MRL/lpr小鼠随机分为:模型组:20只,灌胃生理盐水;中药组:20只,灌胃解毒祛瘀滋肾中药煎剂;西药组:20只,灌胃强的松混悬液;中西药组:20只,中西药分别灌胃;正常组:昆明小鼠选用20只,生理盐水灌胃,均每日1次,每次0.5mL。连续饲养用药12周后取血,以梯度离心法分离提纯外周血淋巴细胞(PBLC),培养48h,流式细胞仪检测凋亡率;另Western blot法检测PBLC Caspase2及Caspase3的蛋白表达。结果:正常组、中药组、西药组和中西药组PBLC0和48h凋亡率高于模型组,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。0h西药组、正常组与中西药组的凋亡率无明显差异(P>0.05),但中药组和模型组与中西药组比较,差异有显著性(P<0.05);48h西药组与中西药组的凋亡率有明显差异(P<0.05),中药组和模型组与中西药组比较,差异有显著性(P<0.01);Caspase-2蛋白水平由高到低依次为:中西药组>西药组>中药组>正常组>模型组;Caspase-3蛋白水平被激活的由高到低依次为:西药组>中西药组>中药组>正常组>模型组。结论:解毒祛瘀滋阴药对MRL/lpr小鼠的PBLC凋亡率及Caspase2、Caspase3蛋白表达均有影响,能协同糖皮质激素对PLBC凋亡障碍起调整作用。

系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠的免疫作用机制

目的探讨不同月龄系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠免疫作用机制,为其发病机制的研究提供依据。方法本研究随机选取SPF级3月龄、4月龄、5月龄及6月龄MRL/lpr雌性小鼠各10只,以及SPF级3月龄野生型C57雌性小鼠10只,测定脏器质量计算脏器系数、运用ELISA方法检测血清抗双链DNA抗体(dsDNA)、脾组织白介素IL-2、IL-4、IL-17和肿瘤坏死因子TNF-α,运用流式细胞技术检测脾淋巴细胞CD3细胞含量和CD4/CD8细胞比率。结果与3月龄野生型C57小鼠相比,3~6月龄MRL/lpr小鼠脾脏系数、血液中dsDNA抗体浓度、IL-2和TNF-α浓度均显著升高(P<0.05);白介素IL-4浓度差异无显著性(P>0.05);与3月龄MRL/lpr小鼠比较,5、6月龄的MRL/lpr小鼠血液中IL-17浓度显著降低(P<0.05或P<0.01);其余各项指标MRL/lpr小鼠不同月龄间差异无显著性。与3月龄C57小鼠相比,6月龄MRL/lpr小鼠脾淋巴细胞CD3浓度显著降低(P<0.01),随着月龄增大,MRL/lpr小鼠的CD3和D4/CD8比率都有下降趋势,但差异无显著性。结论在本实验条件下,各指标变化均显示3月龄红斑狼疮MRL/lpr小鼠出现免疫损伤,并且损伤程度随小鼠月龄的增长呈一定的递增趋势。

3味解毒中药单用或不同组合对MRL/lpr小鼠分泌活性因子表达的影响

目的探讨解毒祛瘀滋肾方中3味解毒中药单用或不同组合对MRL/lpr小鼠血清及肾组织调节正常T细胞表达和分泌活性因子(regulated on activation normal T cell expressed and secreated,RANTES)表达的影响。方法 54只MRL/lpr小鼠随机分成9组,每组6只,分别以青蒿、蛇舌草、升麻、青蒿蛇舌草、青蒿升麻、蛇舌草升麻、青蒿蛇舌草升麻煎剂、泼尼松混悬液、生理盐水灌胃,12周后取血及肾脏,以ELISA法及RT-PCR法分别检测血清和肾组织中RANTES的表达。结果治疗12周末,泼尼松组的RANTES表达水平均显著下降;青蒿、升麻对RANTES表达水平的抑制作用不明显,蛇舌草、青蒿联合蛇舌草、青蒿联合升麻、蛇舌草联合升麻虽均有一定的抑制作用,但均不如青蒿联合蛇舌草及升麻的抑制作用明显。结论青蒿、蛇舌草、升麻三药联用能抑制RANTES的表达。

解毒祛瘀滋阴方对强的松治疗的MRL/lpr狼疮鼠肺、脾、腹腔巨噬细胞TLR4信号通路的影响

[目的]观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠巨噬细胞TLR4信号通路的影响。[方法]MRL/lpr狼疮鼠分为模型组、强的松组、解毒祛瘀滋阴方组(以下简称:中药组)以及强的松加中药组(以下简称:中西药结合组),分别以生理盐水、强的松、解毒祛瘀滋阴方中药和强的松加解毒祛瘀滋阴方中药灌胃4周,收集肺、腹腔、脾脏巨噬细胞,RT-PCR检测相关基因的表达。[结果]经强的松治疗后狼疮鼠肺巨噬细胞TLR4 mRNA和脾巨噬细胞TLR4蛋白都显著升高(P<0.05),而中西药结合组则可以显著降低升高的脾巨噬细胞TLR4蛋白水平(P<0.05)。强的松还可以显著降低肺、腹腔巨噬细胞MyD88、IFN-α、iNOS mRNA等TLR4下游分子的表达(P<0.05),而中西药结合组可以显著升高已经降低的肺巨噬细胞MyD88 m RNA的表达(P<0.05)。[结论]MRL/lpr狼疮鼠应用糖皮质激素后,巨噬细胞TLR4信号通路发生改变,解毒祛瘀滋阴方中药可以降低糖皮质激素造成的TLR4蛋白的异常表达。

脂肪间充质干细胞对MRL/lpr小鼠的治疗效果及对脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响

目的:探讨移植脂肪间充质干细胞(adipose tissue derived stem cells,ADSCs)对MRL/lpr小鼠的治疗作用及对MRL/lpr小鼠脾脏Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:15只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠采用随机数字表法分为ADSCs治疗组(ADSCs组)、对照组(control组)和环磷酰胺治疗组(cyclophosphamide,CTX组),每组5只。ADSCs组经尾静脉注射ADSCs,每次注射的细胞数为1×106/150μL,每周1次,共注射8次;control组经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液,每周1次,共注射8次;CTX组经尾静脉注射环磷酰胺,剂量为15 mg/kg(体重),每周1次,连用2次,休息2周后重复,共注射4次。留取治疗前和治疗后尿液检测24 h尿蛋白浓度。治疗8周后,处死MRL/Ipr小鼠,以流式细胞仪分析脾细胞Th17/Treg细胞比例变化。结果:(1)24 h尿蛋白浓度变化:治疗前,3组小鼠的24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P>0.05);治疗4周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组,差异有统计学意义[(5.02±1.61)g/L vs.(7.10±1.63)g/L、(4.90±0.71)g/L vs.(7.10±1.63)g/L,P<0.05],而且治疗时间越长,效果越明显,治疗8周后,ADSCs组和CTX组24 h尿蛋白浓度显著低于control组[(2.24±0.73)g/L vs.(10.36±1.64)g/L、(3.80±1.45)g/L vs.(10.36±1.64)g/L,P<0.01];ADSCs组和CTX组之间24 h尿蛋白浓度差异无统计学意义(P>0.05)。(2)脾脏Treg细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Treg细胞占CD4+T细胞的百分率高于control组,3组分别为13.62%±1.87%、14.14%±1.29%、0.71%±1.23%,但组间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)脾脏Th17细胞占CD4+T细胞的百分率:ADSCs组和CTX组脾淋巴细胞中Th17细胞占CD4+T细胞的百分率显著低于control组,3组分别为1.43%±0.20%、1.63%±0.65%、6.37%±1.64%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:移植ADSCs能够减少MRL/lpr小鼠尿蛋白浓度,治疗时间越长,效果越显著。ADSCs能够降低MRL/lpr小鼠脾脏Th17细胞水平,提高Treg细胞水平,负向调节Th17/Treg细胞平衡,进而发挥抗炎和免疫调节的作用。

MRL/lpr狼疮小鼠和C57小鼠血常规、主要脏器系数的测定与比较

目的测定C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠在4月龄、5月龄和6月龄的血常规值和脏器系数。方法用MEK-7222K全自动血液分析仪检测C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠血常规值。结果血常规检测方面,C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠相比,中性粒细胞百分率(NE%)、红细胞计数(RBC)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均血红蛋白(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)在不同月龄的数值差异极显著(P<0.01);其中9个检测比较项目差异不显著(P>0.05)。脏器系数方面,C57小鼠的心脏系数、肾脏系数显著高于同月龄的MRL/lpr转基因小鼠(P<0.01);MRL/lpr转基因小鼠的肝脏系数显著高于同月龄的C57小鼠(P<0.01);其他比较项目差异不显著(P>0.05)。结论 C57小鼠与MRL/lpr转基因小鼠在同月龄的部分血常规数据和脏器系数差异显著。

青蒿鳖甲汤加减及糖皮质激素对MRL/lpr狼疮鼠体重的影响

目的:观察青蒿鳖甲汤加减以及糖皮质激素对MRL/lpr小鼠体重的影响。方法:将32只8-10周龄的雌性MRL/lpr小鼠随机分为中药组、激素组、联合用药(青蒿鳖甲汤加减+糖皮质激素)组、安慰剂组,每组8只,另取雌性C57BL/6小鼠8只为正常对照组;中药组予青蒿鳖甲汤加减浓缩药液灌胃,激素组予醋酸泼尼松片水溶液灌胃,联合用药组同时予青蒿鳖甲汤加减和糖皮质激素,安慰剂组和正常对照组予生理盐水灌胃,给药7周。每周测量并记录小鼠的体重,进行统计分析。结果:各组小鼠用药前与用药后体重的比较,差异均有统计学意义(P<0.01);各组小鼠用药前后体重增量(△Weight)比较,差异均有统计学意义(P<0.01);组间多重比较,安慰剂组、激素组△Weight均低于正常对照组(P<0.05),中药组、联合用药组与正常对照组△Weight比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:糖皮质激素治疗疾病早期MRL/lpr小鼠可能对其体重增长有不利影响,合用青蒿鳖甲汤加减可能减缓这种影响。

三氧化二砷对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响(英文)

目的研究三氧化二砷(As2O3)对MRL/lpr小鼠免疫功能和肾脏组织病理变化的影响。方法45只MRL/lpr狼疮小鼠ip给予环磷酰胺50 mg·kg-1(每周1次)和As2O30.8 mg·kg-1,每天1次,共2个月。用ELISA法检测血清抗双链DNA(dsDNA)抗体、干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)浓度;用流式细胞术测定脾CD3+,CD19+,CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞亚群的百分比;用PAS染色法观察肾组织病理变化;用免疫荧光方法检测肾组织IgG和补体C3的表达。结果与给药前比较,给药2个月后,正常对照组血清抗dsDNA抗体水平升高,由给药前1.18±0.26升高至1.80±0.26(P<0.01),As2O3和环磷酰胺组该抗体水平明显降低,分别由给药前1.14±0.58和1.09±0.22降低至0.92±0.06和0.67±0.14(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较:①As2O3和环磷酰胺组血清抗ds-DNA抗体、IFN-γ和IL-12浓度明显降低(P<0.05),环磷酰胺组抗ds-DNA抗体比As2O3组显著降低(P<0.01);②As2O3组CD3+,CD3+CD4+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01),环磷酰胺组CD3+,CD3+CD8+和CD19+细胞百分率明显降低(P<0.01);As2O3组CD3+CD4+细胞百分率明显降低(P<0.01);③As2O3和环磷酰胺组小鼠肾小球细胞计数和活动度积分明显降低(P<0.05,P<0.01),As2O3和环磷酰胺组无显著差异;④As2O3和环磷酰胺组肾IgG表达明显降低(P<0.05),补体C3表达无明显差异,As2O3和环磷酰胺组之间无显著性差异。结论As2O3能降低MRL/lpr狼疮小鼠血清抗ds-DNA抗体水平,抑制T,B和Th细胞活化和增殖,降低血清IFN-γ和IL-12水平,从而缓解狼疮肾炎的病理变化。

青蒿-鳖甲药对配伍对MRL/lpr狼疮小鼠IL-6、IFN-γ分泌及狼疮性肾炎病理改变的影响

目的:观察青蒿-鳖甲药对对MRL/lpr狼疮模型小鼠相关免疫指标及狼疮性肾炎(lupus nephri-tis,LN)病理改变的影响,探索青蒿-鳖甲药对对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的治疗机理。方法:采用ELISA方法检测小鼠血清中的IL-6、IFN-γ含量,对肾脏组织进行HE常规染色及PAS、Masson特殊染色。结果:灌胃青篙-鳖甲药对水煎液后,低、高剂量组MRL/lpr小鼠血清中的IL-6水平显著低于正常对照组(P<0.05或P<0.01);高剂量组血清中的IFN-γ水平与模型组相比,显著下降(P<0.05);高剂量组肾脏组织HE、PAS、Masson染色病理改变差异显著。结论:青蒿-鳖甲药对能抑制MRL/lpr小鼠血清中IL-6的生成,减少小鼠血清中IFN-γ的分泌,能明显改善小鼠狼疮性肾炎的病理状态。

槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮肾小鼠Th17细胞的影响及机制研究

目的探讨槐杞黄颗粒对MRL/Lpr狼疮肾小鼠Th17细胞的影响以及相关机制。方法正常饲养C57BL/6小鼠8只为空白对照组,8~10周龄MRL/Lpr狼疮小鼠24只,随机分为模型组、槐杞黄颗粒治疗组和地塞米松治疗组,每组8只。MRL/Lpr狼疮小鼠12周龄左右开始发病,分别给予槐杞黄颗粒或地塞米松治疗,检测各组处理前后24h尿蛋白定量,血清TGF-β、IL-17含量,肾脏RORC mRNA表达水平。结果与模型组比较,地塞米松组和槐杞黄组小鼠治疗后尿蛋白含量明显下降[(245.87±47.25)mg/L、(333.18±22.19)mg/L比(474.69±48.76)mg/L,P<0.05];与空白组比较,地塞米松组、槐杞黄组TGF-β和IL-17均升高[TGF-β:(262.69±23.53)ng/L、(352.05±26.77)ng/L比(166.12±36.44)ng/L,P<0.01;IL-17:(265.25±44.29)pg/mL、(317.33±46.83)pg/mL比(172.03±45.21)pg/mL,P<0.05,P<0.01];与模型组比较,地塞米松组、槐杞黄组TGF-β和IL-17明显降低[TGF-β:(262.69±23.53)ng/L、(352.05±26.77)ng/L比(593.84±35.02)ng/L,P<0.01;IL-17:(265.25±44.29)pg/mL、(317.33±46.83)pg/mL比(602.13±58.30)pg/mL,P<0.01];与空白组比较,模型组肾脏Th17细胞比例和细胞数、RORC mRNA表达量显著上升[Th17比例:(8.62±0.77)%比(0.05±0.02)%,P<0.01;Th17细胞数:(8.62±0.77)104/mL比(0.05±0.02)104/mL,P<0.01;RORC mRNA:(11.08±0.89)比(1.00±0.05),P<0.01];与模型组比较,地塞米松组、槐杞黄组肾脏Th17细胞比例和细胞数、RORC mRNA表达显著下降[Th17比例:(0.15±0.04)%、(4.06±0.43)%比(8.62±0.77)%,P<0.01;Th17细胞数:(0.15±0.04)104/mL、(4.06±0.43)104/mL比(8.62±0.77)104/mL,P<0.01;RORC mRNA:(3.67±0.39)、(5.53±0.49)比(11.08±0.89),P<0.01]。结论槐杞黄颗粒能减少狼疮肾小鼠尿蛋白排出,调节Th17细胞分化,其机制可能与下调RORCmRNA表达有关。

雷公藤内酯醇对MRL/lpr狼疮鼠血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平的影响

目的观察雷公藤内酯醇对MRL/lpr狼疮鼠外周血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平的影响。探讨雷公藤内酯醇治疗红斑狼疮的可能机制。方法选择30只MRL/lpr狼疮鼠和10只野生对照型MRL/MPJ小鼠,分为4组,狼疮鼠雷公藤内酯醇组、生理盐水组、未干预组、野生对照组,分别予以尾静脉注射雷公藤内酯醇(100μg/kg/d)和等量的生理盐水5d后24h后常规分离血清后,采用双抗体夹心法(ELISA)测定各组小鼠血清IL-2、IL-4、IFN-γ水平的变化。结果与野生对照型MRL/MPJ小鼠相比,MRL/lpr狼疮鼠血清中IFN-γ、IL-4含量升高(P<0.05,P<0.05),IL-2水平降低(P<0.05),经过雷公藤内酯醇治疗后,血清IFN-γ、IL-4水平降低(P<0.01,P<0.05),IL-2水平升高(P<0.01)。结论通过调节Th1/Th2细胞因子的失衡可能是雷公藤内酯醇治疗红斑狼疮的机制之一。

MRL/lpr鼠部分病理指标动态变化及SIGIRR表达与狼疮肾炎相关性研究

目的观察MRL/lpr鼠病理指标动态变化,研究MRL/lpr小鼠肾组织单个免疫球蛋白区白介1相关受体(single Ig IL-1-related receptor,SIGIRR)的表达是否随病理分级加剧而变化,以提示TLR4/NF-κB通路是否参与了狼疮肾炎(iupus nephritis,LN)的发生发展。方法对照组C57BL/6小鼠和模型组MRL/lpr小鼠各12只,分别检测12、15、18、21周龄时小鼠胸腺指数、脾指数、尿蛋白,血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、抗核抗体(antinuclear antibodies,ANA);对肾组织切片进行苏木素依红(hematoxylin and eosin,HE)和马松(Masson)染色,观察模型鼠狼疮肾炎发病情况,采用免疫印迹(western blot)和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法观察不同周龄小鼠肾脏SIGIRR的表达情况。结果 MRL/lpr小鼠12、15、18、21周龄时与同龄C57BL/6鼠相比其尿蛋白水平随周龄增加而升高,血清尿素氮以及抗核抗体和对照组相比无明显差异,HE、Masson染色显示模型鼠从12周开始即表现出肾小球肾炎,血管周围炎细胞浸润,之后逐渐间质纤维化,肾小球系膜和基底膜增厚,甚至出现肾小球纤维化和硬化。Western blot和IHC结果显示,21周龄时MRL/lpr小鼠肾组织SIGIRR蛋白表达增加,与同龄C57BL/6相比有显著性差异。结论 SIGIRR蛋白表达随MRL/lpr小鼠狼疮肾炎加重而增加,其可能与TLR4/NF-κB(Tolllike receptor 4/nuclear factor-kappa B,Toll样受体4/核因子κB)通路相关。

滋阴清热小复方对MRL/lpr狼疮鼠影响的实验研究

目的:观察滋阴清热小复方对MRL/lpr狼疮鼠的影响。方法:将40只MRL/lpr狼疮模型鼠随机分为4组,即模型对照组、滋阴狼疮方治疗组、强的松治疗组、滋阴清热复方+强的松治疗组,每组10只,分别给予生理盐水、中药滋阴清热复方、强的松悬液、滋阴清热复方+强的松悬液灌胃治疗10周。正常组:选用昆明种小鼠10只,生理盐水灌胃。均每日1次,每次0.5ml,连续用药饲养10周后,取血及肾脏标本。结果:与对照组相比,各治疗组动物死亡率、24h尿蛋白含量、血清抗-dsDNA水平、肾脏病理均有不同程度改善,以中西医结合治疗组最为明显。结论:中药滋阴清热复方及西药强的松对狼疮鼠模型均有良好的治疗作用,尤以中西医结合治疗效果最好。