尿沉渣中钙信号相关mRNA作为IgA肾病足细胞损伤无创性指标的研究

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是目前最常见的原发性慢性肾小球疾病,5%~25%的IgAN患者10年内进展为终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD),需行肾脏替代治疗^([1])。近年来,足细胞在IgAN中,致病作用受到更多关注,足细胞损伤与蛋白尿及IgAN病情进展正相关^([2])。

动物mRNA疫苗生产厂房布局与工艺设计要点探究

mRNA疫苗技术具备研发周期短、安全性优良、生产技术通用性强的特点,但由于mRNA疫苗的特殊工艺,传统的生物制品厂房设计已不能完全满足其制备要求。科学合理的厂房工艺设计是确保mRNA疫苗产能与质量的主要条件,因此,如何设计既符合工艺要求又满足兽药GMP的动物mRNA疫苗生产厂房成为摆在我们面前急需探究的课题。鉴于不同国家在能源结构、环保要求、设计理念等方面存在差异,在借鉴欧美已有的mRNA疫苗规模化生产设施和我国人用mRNA疫苗厂房设计的基础上,提出了符合我国兽药GMP规范的mRNA疫苗厂房生产设施、工艺关键点和设计方案,以期为国内动物mRNA疫苗车间建设提供参考。

参芪复方对糖尿病GK大鼠肝脏组织mRNA、lncRNA表达谱的影响

目的应用全转录组测序与实时聚合酶链锁反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术,探索参芪复方调控糖尿病GK大鼠肝脏信使RNA(messenger RNA,mRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱的机制研究。方法采用高脂高糖饲料建立2型糖尿病模型,将GK大鼠随机分为模型组、参芪复方组和西药组。另将10只Wistar大鼠设为空白组,予普通饲料喂养。参芪复方组大鼠予参芪复方浸膏灌胃,西药组予西格列汀混悬液灌胃,模型组及空白组灌服生理盐水。干预12周,每周检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)。运用HE染色法观察大鼠肝脏组织病理形态,在空白组、模型组和参芪复方组中每组随机选取4只大鼠进行全转录组测序,构建mRNA、lncRNA差异表达谱,分析差异基因生物学功能,并进行RT-qPCR验证。结果与空白组相比,糖尿病GK大鼠FBG显著升高(P<0.05),模型组大鼠肝脏可见肝细胞排列紊乱,边界模糊,出现弥漫空泡状改变,呈中度脂肪变性,伴见炎性浸润、弥漫水肿;与模型组相比,参芪复方组大鼠FBG在12周时明显降低(P<0.05),肝脏组织排列较整齐,脂质沉积、细胞水肿及炎细胞浸润明显减轻。全转录组结果显示,与空白组相比,模型组大鼠mRNA、lncRNA表达谱存在显著差异,决定了糖尿病大鼠生理病理上的差异表现。参芪复方可广泛调控mRNA、lncRNA的差异表达,富集分析显示参芪复方通过调控多条内分泌系统及代谢过程相关信号通路改善糖尿病,包括胰岛素分泌、非酒精性脂肪性肝病、胆固醇代谢、鞘脂代谢、胰岛素抵抗等信号通路。RT-qPCR结果显示,基因Irf1、Trim30、Tmcc3、Insig1与转录组结果一致,转录组准确性较高。结论参芪复方发挥调节血糖及改善肝脏脂质沉积、水肿的作用,可能与广泛调控mRNA、lncRNA的差异表达有关。

假尿苷修饰体外转录mRNA在翻译过程中发生的+1核糖体框架移码

为应对世界范围内的COVID-19疫情,假尿苷(Ψ)修饰的体外转录mRNA(Ψ-IVT-mRNA)被授权应用于SARS-Cov-2 mRNA疫苗。最近,Ψ-IVT-mRNA被发现在翻译蛋白质时发生核糖体“滞顿”,导致+1核糖体移码,在体外和体内翻译出异常的蛋白质。在接种SARS-Cov-2 mRNA疫苗的人群,这种异常蛋白可能激发脱靶T细胞反应或抗体反应或产生其它意想不到的副作用。这一发现对研制有效“安全”的mRNA疫苗/药物有“警示”和指导意义。

TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变诊断价值的meta分析

目的系统评价液基薄层细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)联合人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值。方法计算机检索CNKI、维普数据库(VIP)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、The Cochrane Library、Embase、Science数据库中关于TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测诊断子宫颈癌前早期病变的相关文献,检索时限均为建库至2023年1月。由2位评价员按纳入标准和排除标准各自筛选文献、提取资料和评价质量后,应用RevMan 5.3、Stata 15.0、Meta-Disc 1.4统计软件分析TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对子宫颈癌前早期病变的诊断价值,计算诊断敏感性的Spearman相关系数验证阈值效应,进行异质性检验;计算合并敏感性、特异性、阳性似然比和阴性似然比、诊断比值比、SROC曲线下面积。结果共纳入15篇文献,合计6620例患者。Meta分析显示,合并敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比均不存在明显异质性(I^(2)=31.6%、14.2%、10.9%、16.7%、17.2%,P=0.1162、0.2947、0.3311、0.2663、0.2610),采用固定效应模型进行统计分析,其结果分别为0.95(95%CI:0.94~0.96)、0.87(95%CI:0.86~0.88)、6.86(95%CI:6.26~7.51)、0.06(95%CI:0.05~0.07)、113.23(95%CI:86.44~148.31)。SROC曲线下面积为0.9414。结论TCT联合HPV E6/E7 mRNA检测对诊断子宫颈癌前早期病变有重要价值。

p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变诊断中的价值研究

目的:探讨p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测在宫颈病变诊断中的价值。方法:选择2021年4月至2023年2月我院收治的605例高危型HPV阳性患者为研究对象,所有患者入院后均进行阴道镜检查与病理活检,取患者细胞学样本分别进行p16/Ki-67双染检测、HPVE6/E7mRNA检测。比较两种方法单独检查与联合检测对宫颈病变阳性检出率的差异;比较三种检查方法对宫颈病变诊断效能的差异。结果:联合检测检出CIN1~3阳性率均高于p16/Ki-67双标记、HPVE6/E7mRNA检测(P<0.05);三种检测方式的浸润癌阳性检出率比较无明显差异(P>0.05)。Kappa检验分析结果显示,p16/Ki-67双标记与HPVE6/E7mRNA检查结果与病理诊断结果具有较好的一致性(Kappa值=0.719,P<0.05);联合检测结果与病理诊断结果具有高度的一致性(Kappa值=0.894,P<0.05)。联合检测对宫颈病变的诊断灵敏度、特异性与准确率高于p16/Ki-67双标记与HPVE6/E7mRNA检查(P<0.05)。结论:p16Ki-67双染与HPVE6/E7mRNA联合检测可准确检出宫颈病变程度,对宫颈病变疾病类型的鉴别可提供充足可靠的数据支持,联合检查的诊断效能较好,对患者后续相关治疗开展有积极指导意义。

mRNA药物的结构和临床应用

mRNA凭借其有效性、安全性和易大规模生产等特点,在预防急性传染病方面显示出巨大的潜力。mRNA代表了一个新兴的精准医学领域,几种针对传染病和癌症等疗法的mRNA在体内和体外都显示出良好效果。mRNA稳定性好、免疫原性高、不受受体主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)型别的限制,且mRNA理论上可实现不同目的蛋白的体内表达,这使得开发mRNA药物更具灵活性,可用于预防和治疗多种难治性或遗传性疾病。介绍了mRNA的一级结构和高级结构,综述了mRNA药物的临床应用进展,以期帮助理解mRNA的药物功能和临床应用,为mRNA药物的发展提供方向。

不同日龄白羽王鸽胸肌中lncRNA和mRNA功能分析

【目的】分析不同日龄乳鸽胸肌发育的差异长链非编码RNA(lncRNA)和mRNA,确定影响乳鸽生长发育的关键候选基因,探究乳鸽生长发育的分子机制,为促进乳鸽生长发育的研究提供理论基础。【方法】乳鸽于1(D1)、7(D7)、14(D14)和25(D25)日龄分别称重,随后在D7和D25时进行屠宰,利用RNA-Seq技术对所选日龄白羽王鸽胸肌的lncRNA进行测序并预测其靶基因,构建lncRNA-mRNA互作网络,对筛选的差异表达lncRNA进行GO功能和KEGG通路富集分析,并利用实时荧光定量PCR验证测序结果的可靠性。【结果】乳鸽于7~14日龄日增重最快,25日龄乳鸽体重到达上市日龄。从构建的6个文库中共获得56421个lncRNAs和30208个mRNAs,其中2335个lncRNAs差异表达,靶向1553个mRNAs。lncRNA-mRNA调控网络显示,lncRNA与mRNA间存在相互调控。GO与KEGG分析结果显示,差异基因与GTpase活性等相关,差异lncRNAs及其靶基因主要富集在MAPK信号通路、骨骼肌组织发育、TGF-β信号通路、Notch信号通路等信号通路,关键lncRNAs可能通过这些信号通路调控乳鸽胸肌发育。其中LTCONS_00012834、LTCONS_00032767、LTCONS_00045211和LTCONS_00002003分别靶向XIRP 1、PITX 3、BMPR 1 B、MYLK 4基因,发挥关键作用。实时荧光定量结果与高通量测序结果趋势一致,说明测序数据的可靠性。【结论】本研究共获得了2335个差异表达lncRNAs和1553个mRNAs,4个差异表达lncRNAs:LTCONS_00032767、LTCONS_00012834、LTCONS_00002003、LTCONS_00045211分别靶向与骨骼肌发育相关基因PITX 3、XIRP 1、MYLK 4和BMPR 1 B,且这些基因受到多个lncRNA的调控。结果为阐明乳鸽胸肌生长发育的分子机制以及白羽王鸽的分子选育提供了理论基础。

预防传染病mRNA疫苗原材料、原液质控要点分析

目的:梳理归纳预防传染病mRNA疫苗原材料和原液质控要点,为我国此类产品质量控制提供参考。方法:通过梳理世界卫生组织及相关标准和审评机构关于预防传染病mRNA疫苗原材料、原液质控指导文件,以及相关监管指南和文献,总结归纳预防传染病mRNA疫苗原材料和原液关键质量控制属性及相关要求。结果与结论:作为新型生物制品,mRNA疫苗核酸结构和脂质体包裹制剂的特性决定了该类疫苗质控特点,序列和完整性、含量及纯度、加帽率和包封率是mRNA疫苗特有的、决定有效性和安全性的关键质量参数。从原材料和原液制备阶段就建立多个与mRNA特性相关的质控要点及其检测方法,将有助于保障预防传染病mRNA疫苗安全有效、质量可控。

前列腺癌激肽释放酶3 mRNA表达与前列腺癌病理特征的相关性

目的:探究前列腺癌激肽释放酶3(klk3)mRNA表达与前列腺癌病理特征的相关性。方法:选取39例前列腺增生患者(良性组)、57例无家族遗传史的前列腺癌患者(非家族遗传组)、29例家族遗传性前列腺癌患者(家族遗传组)为研究对象。分析klk3 mRNA表达与前列腺癌临床病理特征的关系。结果:家族遗传组外周血klk3 mRNA水平高于非家族遗传组、良性组(P<0.05)。外周血klk3 mRNA水平诊断家族性前列腺癌的曲线下面积(AUC)为0.843,灵敏度为62.07%,特异度为96.49%。Logistic回归显示,外周血klk3 mRNA水平为家族性前列腺癌发生的危险因素(P<0.05)。Gleason评分8~10分患者的外周血klk3 mRNA水平高于Gleason评分7分、6分患者,肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期患者的外周血klk3 mRNA水平高于Ⅰ~Ⅱ期患者,Psa水平>20 ng/mL患者的外周血klk3 mRNA水平高于Psa水平10~20 ng/mL及<10 ng/mL患者(P<0.05)。结论:klk3基因mRNA表达对家族遗传性前列腺癌具有诊断价值,且与Gleason评分、肿瘤分期等病理特征有关。

AlkB同源蛋白5去除前mRNA加工因子6的mRNA甲基化修饰调控肝细胞癌的细胞增殖

目的探讨AlkB同源蛋白5(AlkBhomolog5,ALKBH5)在肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的细胞增殖中的作用。方法通过癌症基因组图谱数据库分析ALKBH5和前mRNA加工因子6(pre-mRNA processing factor 6,PRPF6)在HCC组织中的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的mRNA和蛋白表达水平。荧光原位杂交确定ALKBH5和PRPF6在HCC细胞系(Huh7和Hep3B)中的亚细胞定位。在免疫沉淀复合物中检测PRPF6的N6-甲基腺苷甲基化水平。通过过表达和敲低基因表达的方法,将Huh7细胞和Hep3B细胞分别进行转染,分组为sh-NC组(阴性对照转染细胞)、sh-ALKBH5实验组(ALKBH5干扰序列转染细胞)、sh-ALKBH5+ex-PRPF6实验组(ALKBH5干扰序列转染+PRPF6 pcDNA 3.1过表达质粒转染细胞),并采用CCK-8和染色增殖试验检测各组细胞的增殖情况。裸鼠异种移植瘤实验验证ALKBH5和PRPF6在体内的生物学功能。蛋白质印迹法检测各组细胞中AKT/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果HCC细胞中ALKBH5的表达上调,可以去除PRPF6的甲基化修饰。体外和体内实验结果显示,ALKBH5可通过调节PRPF6的表达参与HCC细胞的恶性增殖。此外,敲低ALKBH5会抑制丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化,而PRPF6的过表达则有助于AKT和mTOR的磷酸化。结论ALKBH5能促进HCC细胞的增殖,相关机制是通过ALKBH5/PRPF6/AKT/mTOR轴实现的。

mRNA治疗用纳米载体研究新进展

mRNA是一种单链核糖核酸,由一条DNA转录而成,携带蛋白质合成的编码信息,进一步转录并加工成功能蛋白。在基因工程的协同下,合成的mRNA在结构上类似于天然mRNA,使患者能够在自己的身体中产生治疗性蛋白质,从而达到预防或治疗疾病的目的。mRNA治疗避免了其遗传物质整合宿主基因组的风险,也不需要进入细胞核进行转染,它甚至可以在不分裂的细胞中表达。因此,基于mRNA的基因疗法成为极具潜力的临床治疗手段。高效、安全地递送mRNA是其临床应用的两个主要制约因素。目前虽然已有很多报道通过修饰mRNA的结构来提高其稳定性和耐受性,但mRNA的递送效果仍然有待提高。近年来,纳米生物技术取得的重大进展为mRNA纳米载体开发提供了技术支撑。纳米载体能够克服递送过程中的生理障碍,使mRNA到达目标部位。本文介绍了纳米给药系统的设计原则和研究热点。重点聚焦新兴纳米载体在mRNA传递中发挥的作用以及在递送功能研究方面的最新进展;最后,对mRNA的纳米载体递送技术发展前景进行了展望。

真核生物mRNA应激状态下的帽-非依赖性翻译

在真核生物中,mRNA翻译过程包括起始、延伸和终止。其中,翻译的起始阶段最为重要且复杂,它决定了mRNA能否被有效翻译成蛋白质。根据翻译起始机制的不同,真核生物mRNA翻译可以分为传统的帽-依赖性翻译和替代机制帽-非依赖性翻译。当外部环境的刺激或细胞自身的改变使细胞处于应激状态时,传统的帽-依赖性翻译被抑制或下调,替代机制帽-非依赖性翻译得以启动,以保证翻译的顺利进行。真核生物在应激状态下为了维持蛋白质合成的需求,采用多种翻译起始机制来实现帽-非依赖性翻译。其中较常见的是IRES(internal ribosome entry site)、m6A修饰和CITE(cap-independent translation enhancer)所启动的翻译。这些机制允许核糖体在mRNA的特殊区域内部进行启动,而不依赖于传统的m7G帽结构。通过这些机制,真核生物可以在应激状态下仍然进行蛋白质合成,以满足细胞的需要。本文在总结传统帽-依赖性翻译研究进展基础上,着重介绍IRES、m6A和CITE所启动的帽-非依赖性翻译,为更好地探索细胞应激状态下的翻译机制提供参考,为未来的翻译研究和应用提供更多的思路。

基于络病理论探究lncRNA-miRNA-mRNA调控网络中医药防治特发性肺纤维化

特发性肺纤维化(IPF)是一种致命的间质性肺疾病。最近的研究已经确定IPF中失调的上皮细胞、间充质、免疫和内皮细胞之间与非编码RNA存在着某种联系。文章总结lncRNA、miRNA和mRNA之间的相互影响,通过“ceRNA”机制,形成了lncRNA-miRNA-mRNA调控网络,并在肺纤维化中作用显著。近年来,随着络病理论的不断发展,作者基于肺络构效理论,探析在IPF进程中“肺虚络瘀”与lncRNA-miRNA-mRNA调控网络的相关性,并为IPF的发病机制和治疗提供新的理论。

mRNA肿瘤疫苗:研究进展及临床应用前景

免疫疗法为肿瘤治疗提供了有效的辅助作用,其中信使RNA(messenger RNA,mRNA)肿瘤疫苗有着较好的肿瘤免疫激活作用,为肿瘤辅助治疗提供了一个潜在的应用前景。mRNA疫苗能够激活或者增强人体免疫系统特异性识别抗原的能力,从而实现抗肿瘤作用。相比较于其他疫苗平台,mRNA肿瘤疫苗具有安全、不被整合、负载多种抗原等特点。肿瘤的不同突变类型导致了肿瘤治疗存在一定的个体差异性,肿瘤抗原的选择就显得尤为重要。同时,mRNA修饰可以增强mRNA的稳定性及翻译效率。这些因素都影响着mRNA疫苗的抗肿瘤效应。目前多种个体化mRNA肿瘤疫苗在临床试验中表现出较好的安全性及免疫原性。因此,通过本综述能更好的了解mRNA肿瘤疫苗的作用以及开发个性化肿瘤疫苗的临床价值,并且联合现有的治疗方式能为肿瘤辅助治疗提供更为有效的治疗方案。

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

SRPK2调控前体mRNA选择性剪接在酒精性肝病脂质代谢中的机制研究进展

酒精性肝病是长期大量饮酒导致的主要疾病之一,有可能进展为肝硬化甚至肝癌。脂质代谢紊乱在酒精性肝病的发展中扮演着重要的角色。国内外研究尚未完全揭示酒精性肝病中脂质代谢紊乱机制。已有研究证实,SRPK2调控的前体信使RNA选择性剪接在酒精性肝病脂质代谢紊乱中发挥关键作用。本文就国内外文献进行综述,包括酒精性肝病中典型的脂质代谢紊乱机制以及选择性剪接的新机制,旨在为推动酒精性肝病的预防和治疗提供理论参考。

通用流感mRNA候选疫苗的构建及免疫效果评价

目的构建通用流感mRNA疫苗并全面评价其免疫保护效果。方法优化流感病毒株A/California/04/2009的血凝素(hemagglutinin,HA)、核蛋白(nucleoprotein,NP)和基质蛋白2胞外区(matrix protein 2 ectodomain,M2e)抗原序列,并将HA、NP和3个串联的M2e(3M2e)分别克隆至pcDNA3.1载体,通过线性化、体外转录、酶学法加帽、酶促加尾合成mRNA,命名为mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e。3种mRNA分别转染293T细胞后,通过免疫荧光实验鉴定蛋白的表达。利用脂质纳米颗粒分别包裹mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e并测量其粒径和电位。再将3种mRNA等体积混合制备成Comb-mRNA疫苗。将28只6周雌性Balb/c小鼠(体质量为18~22 g)按简单随机分组法分为2组:LNP组(n=14)和Comb-mRNA组(n=14)。通过血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)、微量中和(microneutralization,MN)实验评价流感mRNA疫苗诱导小鼠产生的血清抗体滴度;通过流式细胞术评价Comb-mRNA疫苗诱导的细胞免疫反应。采用5LD_(50)野生型H1N1流感病毒株感染小鼠评价Comb-mRNA疫苗的免疫保护效果。结果成功构建mRNA-HA、mRNA-NP和mRNA-3M2e,且3种mRNA均能在293T细胞表达。脂质纳米颗粒包裹mRNA平均粒径为(119.53±6.5)nm,平均电位为(-8.23±1.3)mV。与LNP组比较,Comb-mRNA组疫苗的HI几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)达179.6,MN的GMT达201.6,同时诱导IFNγ+CD4+/CD8+T细胞比例升高。Comb-mRNA组在加强免疫后2周能够提供对5LD_(50)野生流感H1N1亚型病毒的保护。结论通用流感疫苗候选疫苗Comb-mRNA能够诱导小鼠免疫反应并保护小鼠免受病毒感染。

KRT18与mRNA及长链非编码RNA互作调控椎间盘髓核细胞损伤的机制

背景:椎间盘中差异表达的RNA结合蛋白在椎间盘退变中发挥着关键作用,其中RNA结合蛋白KRT18水平的降低与椎间盘退行性病变相关,但其在椎间盘髓核细胞中的具体作用尚未完全确定。目的:探讨KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合互作对椎间盘髓核细胞的影响及机制。方法:对因腰部骨折或椎间盘退行性病变而接受椎间融合术的患者进行人体髓核组织取样获得正常髓核细胞和退变髓核细胞,并进行iRIP-seq、功能富集分析以及DNA微阵列分析,随后根据分析结果在髓核细胞中敲低KRT18,通过蛋白免疫印迹及qRt-PCR在蛋白和RNA水平检测相关基因水平的表达。结果与结论:通过iRIP-seq分析发现GUAAUC和AGCCUC序列中存在大量的KRT18结合位点,表明KRT18可参与调控RNA的转录、翻译、稳定性或在细胞信号传导途径中发挥作用。其能够与成熟的mRNA稳定结合,其中表达较高的基因包括CRLF1及IGFBP4等,同时与其结合的长链非编码RNA的峰值基因包括SNHG25、SNHG12、NEAT1、USP32、EIF4A2和CDH4,这些基因多涉及细胞凋亡、炎症等多种生物过程,并且能介导细胞外基质代谢的相关通路,KRT18能够调控它们的稳定性、转运、翻译、剪接等多个方面的功能,进而影响基因的表达和细胞功能。实验结果验证了在髓核细胞中敲低KRT18,细胞外基质代谢水平被抑制出现失衡,导致体外椎间盘退变。该研究首次从KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合的角度探讨其调控机制,并推测了KRT18在椎间盘退变发病机制中的潜在功能,为今后KRT18关键功能的研究奠定了基础。

禽腺病毒血清4型感染的LMH细胞mRNA表达谱分析

禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的禽肝炎-心包积液综合征已严重危害我国养禽业的发展,迫切需要深入了解FAdV-4的致病机制并制定有效的防控方案。论文旨在利用高通量测序技术分析禽腺病毒血清4型感染鸡肝癌(Leghorn male hepatocellular,LMH)细胞后差异表达的mRNA,以探究mRNA在FAdV-4感染过程中的作用及其调控机制。结果显示,与对照组相比,FAdV-4感染48 h共筛选到2604个上调的差异表达基因,2883个下调的差异表达基因。其中,GNB3、NECTIN4、SFRP4、FABP2、PLPP3、GALR1L和MBL 2等基因之前并没有被报道过与FAdV-4感染相关。通过GO和KEGG分析得知,差异表达基因主要富集在从细胞表面位点和信号受体结合至细胞周期调节、MAPK信号通路、细胞黏附分子作用等;其中,显著下调的差异基因还富集到多种代谢途径中,提示病毒感染会影响宿主细胞的代谢水平。本研究为深入解析FAdV-4感染宿主细胞的致病机制提供了相关的理论基础及科学依据。