饵料蛋白质对中华绒螯蟹仔蟹消化酶活性及胰蛋白酶mRNA丰度的影响

设计了蛋白质含世为45%、35%和25%的三种饵料,以鲜活饵料作对照,研究饵料蛋白质对中华绒螫蟹仔蟹(6±0.5g)消化酶活性的影响。分别于饲养后第10天、20天和40天时取其肝胰腺,测定胰蛋白酶和淀粉酶活性,结果表明:(1)肝胰腺胰蛋白酶活性在投喂鲜活饵料时,整个实验过程中无明显差异(P>0.05);三个实验饵料组蛋白质至第20天时对胰蛋白酶活性才产生显著影响,其中25%蛋白饵料组显著低于其它三个饵料组(P<0.05)。(2)投喂鲜活饵料的仔蟹肝胰腺中淀粉酶比活力在第10d时为49.39 U·mg-1,此后逐渐递减;比较三个蛋白饵料组淀粉酶活性,发现淀粉酶活性自第10天起即受饵料蛋白质的显著影响(P<0.05),至第20天时45%蛋白饵料组比活力为23.85 U·mg-1,较其它两个蛋白饵料组及对照组相比显著降低(P< 0.05),而第40天时对照组和25%蛋白饲料组的淀粉酶比活力显著高于45%和35%二个蛋白饵料组(P< 0.05)。(3)胰蛋白酶mRNA丰度以25%蛋白饵料组为最低,仅0.140,与35%蛋白饵料组较为接近(P> 0.05),而对照饵料组和45%蛋白饵料组的mRNA丰度分别为饲料3组的4.5倍和3.5倍,显著高于25%和35%两个蛋白饵料组(P<0.05)。结果提示仔蟹饵料蛋白质对肝胰腺胰蛋白酶具有显著促进作用,mRNA丰度的变化反映了饵料蛋白质水平导致胰蛋白酶活性的变化是由基?

干乳期能量摄入水平对围产期奶牛肝载脂蛋白B100mRNA丰度的影响

将年龄、胎次相同,年产奶量大于5000kg的围产期健康奶牛30头随机分为3组,每组10头。组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)减少20%日粮(能量摄入80%组),组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)日粮(能量摄入100%组),组饲喂中国奶牛饲养标准(2000)增加20%日粮(能量摄入120%组)。试验从产前28d开始至产后56d结束,产后各组奶牛均饲喂标准泌乳日粮。采用内对照RT-PCR方法,检测了干乳期摄入不同能量的围产期奶牛肝脏活体组织载脂蛋白B100(apoB100)mRNA丰度。结果表明,apoB100mRNA相对表达量,产前至产后、组均呈先升高后降低的趋势,组产后apoB100mRNA丰度降低了61.45%,组呈逐渐降低的趋势,各组均在产后28d达最低值(组,P<0.05;、组,P<0.01)。产前14d至产后1d,apoB100mRNA相对表达量组高于组,组高于组,组间差异极显著(P<0.01);产后28d,组高于、组(P<0.05)。由此可见,围产期奶牛能量摄入水平对肝脏载脂蛋白B100mRNA丰度有显著影响。

INS、GLN和LP对体外培养牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度的影响

为了阐明胰岛素(INS)、胰高血糖素(GLN)和瘦蛋白(LP)对牛脂肪细胞内激素敏感酯酶(HSL)、LP的mRNA表达的调控作用,本试验采用体外原代培养牛脂肪细胞的培养液中添加不同浓度的胰岛素(0、5、10、20、50、100 mmol/L)、胰高血糖素(0、25、100、200、5001、000pg/mL)和瘦蛋白(0、2.5、5、10、501、00 ng/mL),培养12 h后,应用建立的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测牛脂肪细胞内HSL、LP的mRNA丰度。结果表明:胰岛素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用,对LP的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用。胰高血糖素对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达呈现剂量依赖性促进作用,对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达无作用。瘦蛋白对牛脂肪细胞内HSL的mRNA表达先呈现剂量依赖性促进作用,后呈现抑制作用。但对牛脂肪细胞内LP的mRNA表达呈现剂量依赖性抑制作用。

Myogenin mRNA丰度在金华猪和长白猪背最长肌中的表达

运用半定量RT-PCR方法对不同生长阶段金华猪和长白猪背最长肌中肌细胞生成素(Myogenin,MyoG)基因mRNA的表达丰度进行测定,分析与肌肉沉积的关系。结果表明:在2种猪35、80、125日龄均可检测到MyoG mRNA,金华猪背最长肌中MyoG基因的表达随着年龄和胴体瘦肉率的增加而增加,并且MyoG基因表达与胴体瘦肉率呈正比;而长白猪背最长肌中MyoG基因的表达恰好相反。除35日龄以外品种间无显著差异。

神经内分泌因子对体外培养肝细胞ApoB100 mRNA丰度的影响

目的分析神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白对体外培养肝细胞ApoB100 mRNA丰度的影响,以阐明其在奶牛肝极低密度脂蛋白(VLDL)组装与转运中的调控作用。方法在体外培养的肝细胞培养液中分别添加胰岛素、胰高血糖素和廋蛋白,应用实时荧光定量PCR法检测神经内分泌因子对体外培养肝细胞中载脂蛋白B100(ApoB100)mRNA丰度的影响。结果随着细胞培养液中胰岛素和瘦蛋白浓度的增加,肝细胞中ApoB100 mRNA的水平逐渐降低;而随着培养液中胰高血糖素浓度的升高,ApoB100 mRNA水平呈先升高后降低的趋势。结论神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白通过影响ApoB100 mRNA的表达水平来调控肝细胞中VLDL的组装与转运。

金华猪与长白猪脂肪组织中HSL mRNA丰度的差异研究

运用半定量RT-PCR法对不同生长阶段的金华猪和长白猪背部脂肪组织中激素敏感脂肪酸酶(HSL)基因mRNA的表达丰度进行测定。结果表明:两品种在35、80和125日龄时均检测到了HSL mRNA,两品种猪背部脂肪组织中HSL基因的表达随日龄增加无显著性变化。金华猪HSL mRNA丰度在80日龄时比长白猪低24.24%(P<0.05);在35、125日龄时,两品种间无显著性差异。

RHIGF-Ⅰ对体外单层培养的肝细胞PEPCK mRNA丰度的影响

根据牛肝细胞中持家基因表达的恒定性,选用β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测外源性添加不同质量浓度的重组人胰岛素样生长因子(RHIGF-Ⅰ)对体外培养牛肝细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达水平的变化情况。选用体外培养的犊牛单层肝细胞为实验模型,当细胞贴壁后在无血清培养液中添加RHIGF-Ⅰ,其终质量浓度分别为0、5、10、15、20、30、40、50、60、100、150μg/L,待添加8h后,提取总RNA,反转录,用相同的模板扩增PEPCK基因及β内参,再比较各梯度目的基因与内参的灰度。结果表明,随着添加RHIGF-Ⅰ质量浓度的升高,PEPCK mRNA表达呈下降趋势,且均低于对照组。

人正常肝、新生儿肝、肝癌及癌旁肝组织内C／EBPmRNA丰度分析

ｃ／ＥＢＰ（ＣＣＡＡＴ／ＥｎｈａｎｃｅｒＢｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎ）是一种热稳定蛋白，作为肝细胞核富含的转录调控因子，在促进和维持肝细胞分化状态中担负重要功能，本文通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测３例正常肝组织，１例新生儿肝组织，１０例肝癌及８例癌旁肝组织中Ｃ／ＥＢＰｍＲＮＡ丰度，结果显示在正常肝、新生儿肝及癌旁肝组织中均有表达，在多数癌组织中的表达明显减弱。瘤旁肝组织和肝癌组织中的表达相差显著（Ｐ＜０．０５）．以上结果进一步提示Ｃ／ＥＢＰ在维持肝细胞分化状态中起重要作用，并可能和肝癌的发生存在一定关系。

不同分化时期牛脂肪细胞抵抗素mRNA丰度变化

选取犊牛大网膜脂肪组织,进行牛前脂肪细胞的单层贴壁培养,在细胞接种4、6、8、10、12、14、16d分别提取细胞总RNA,进行RT-PCR反应,以β-actin为定量内参照,对抵抗素mRNA的丰度进行定量分析,观察在犊牛前脂肪细胞向脂肪细胞分化过程中抵抗素mRNA的表达规律。结果表明:在犊牛前脂肪细胞分化4～12d,抵抗素mRNA丰度逐渐降低,而分化成熟后14～16d有所回升。

丙酸钠对肥育猪肝脏HMG-CoA还原酶活性和mRNA丰度的影响

将 96头体重约 4 5 .4kg的杜长加肥育猪分成 4组 ,分别饲喂添加 0 ,0 .5 % ,1.0 %和 1.5 %丙酸钠的饲粮 4 5d ,每组设三个重复 ,每个重复 8头。结果表明 :(1)添加 1.0 %和 1.5 %丙酸钠使血清中总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇显著降低 ,使高密度脂蛋白胆固醇 /低密度脂蛋白胆固醇的比率显著提高 ,添加 1.5 %丙酸钠使血清中极低密度脂蛋白胆固醇显著降低 ;(2 )添加 1.0 %和 1.5 %丙酸钠使肝脏中 β 羟基 β 甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG CoA)还原酶活性和mRNA丰度显著降低。结果提示 :丙酸钠可以降低肝脏HMG CoA还原酶mRNA丰度和酶活性 ,有效地降低肝脏胆固醇的合成 ,从而改善肥育猪胆固醇代谢。

应用半定量RT-PCR方法测定围产期奶牛肝PEPCK-C mRNA的丰度

建立了奶牛肝PEPCK-CmRNA丰度的半定量RT-PCR检测方法，其优化的PCR反应条件（25pL）为：57C退火、2．4mmol／L Mg^2＋、26～28个循环数、cDNA不小于2．6mg／L、2：1的PEPCK-C／β-actin引物比。同时，应用该方法检测了围产期奶牛肝中PEPCK-CmRNA丰度，结果显示：产前低血糖奶牛肝PEPCK-C mRNA丰度显著低于对照组，但是产后却高于对照组。围产期奶牛血糖水平与肝PEPCK-C mRNA丰度之间的相关系数，对照组为0．68（P=0．14），低血糖组为0．82（P=0．047）。因此，围产期奶牛肝PEPCK-CmRNA丰度对奶牛血糖浓度具有调节作用，低血糖奶牛表现得更为明显。

生糖底物和神经内分泌因子对新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA表达水平的影响

在原代单层培养的新生犊牛肝细胞培养液中分别加入不同浓度丙酸钠、丙酮酸钠、胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白,培养12 h后,应用半定量RT-PCR方法检测体外培养的肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度。结果显示,随着丙酸钠、丙酮酸钠浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度均先升高后下降(P<0.01);随胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白浓度的升高,肝细胞PEPCK-C mRNA的丰度分别剂量依赖性地降低、升高(P<0.01)和无显著变化。表明,丙酸钠、丙酮酸钠能通过上调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而促进肝糖异生代谢,但上调作用是有限的;胰岛素能通过下调体外培养的新生犊牛肝细胞PEPCK-C mRNA的表达而抑制肝糖异生代谢,且下调作用呈剂量依赖性;胰高血糖素与胰岛素作用刚好相反;瘦蛋白未起直接的调节作用。

调节NAC转录因子对玉米铁含量的生物强化作用

铁缺乏症在发展中国家的人群中仍然普遍存在。为了解决这一问题,育种专家们一直在尝试培育产量高、籽粒铁含量高的玉米品种。研究人员进行了一项全基因组关联研究,鉴定了一个调节玉米籽粒铁浓度的基因Zm‐NAC78(NAM/ATAF/CUC结构域转录因子78)。通过使用在ZmNAC78启动子中插入或缺失(indel)42个碱基对而开发出的分子标记,培育出了籽粒铁含量高、产量高的玉米品种。ZmNAC78表达富集于籽粒胚乳基底转移层,且ZmNAC78蛋白直接调控铁转运蛋白mRNA丰度。本研究结果为培育富含铁的玉米品种提供了新途径。

患脂肪肝奶牛的代谢、内分泌和组织基因表达特征

【目的】旨在阐明患脂肪肝奶牛体内代谢、内分泌以及肝和脂肪中3个基因表达的变化。【方法】分别对10头患脂肪肝奶牛和10头健康奶牛进行血液指标和肝脂含量的检测,利用半定量RT-PCR检测奶牛肝PEPCK-CmRNA的丰度,应用实时荧光定量PCR检测脂肪LpmRNA和HSLmRNA的丰度。【结果】①脂肪肝奶牛血糖浓度显著降低(P<0.01),血浆NEFA和BHBA的浓度显著升高(P<0.01),肝脂(约41.98%左右)和血清AST活性显著增加(P<0.01),血清γ-GT、TBI、CHE显著升高(P<0.05);②脂肪肝奶牛Ins浓度、Ins/Gn明显升高(P<0.05),肝PEPCK-C和脂肪HSLmRNA表达水平显著降低(P<0.05);③脂肪LpmRNA表达水平和血浆Lp、NPY浓度显著下降(P<0.05)。【结论】患脂肪肝奶牛存在严重的能量代谢障碍和明显的肝功障碍,体内Ins与Gn、Lp与NPY之间失调,肝PEPCK-C和脂肪HSL、Lp的基因表达减弱,是病牛能量代谢障碍发生的重要机制。

用条件性RNAi敲低技术降低FGFR2在小鼠软骨细胞中表达水平的研究

目的:把条件性FGFR2敲低小鼠FGFR2-RNAi和在软骨细胞特异表达Cre重组蛋白的转基因小鼠Coll2a-Cre交配,得到双基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre,观察能否用条件性RNAi敲低的方法在小鼠软骨组织中降低FGFR2的表达,为进一步研究小鼠软骨中FGFR2表达降低对软骨发育的影响提供初步基础。方法:运用RT-PCR技术来比较小鼠软骨中FGFR2mRNA丰度的变化。结果:在双基因小鼠FGFR2RNAi;Coll2a-Cre软骨中FGFR2mRNA丰度同对照型相比表现为下降。结论:双基因FGFR2RNAi;Coll2a-Cre小鼠比同组对照小鼠软骨中FGFR2mRNA丰度要低,提示可用条件性RNAi敲低技术降低FGFR2在软骨中的表达,从而进一步观察软骨的发育情况。

新生仔猪脂肪组织中α-酸性糖蛋白调节细胞因子的基因表达

背景猪脂肪组织表达α-酸性糖蛋白（ORM1），该蛋白质具有抗炎和免疫调节作用。过去有研究表明，在体外猪脂肪组织中，ORM1可以降低胰岛素刺激对机体葡萄糖代谢的影响。该研究旨在探讨仔猪断奶前，皮下脂肪中ORM1的表达丰度，并确定是否ORM1可以调节炎性因子的mRNA丰度（炎性因子有助于猪皮下脂肪组织培养基对胰岛素的耐受性）。

利奈唑胺所致高乳酸血症对线粒体蛋白合成的可逆性抑制

利用外周血单核细胞和线粒体质量及蛋白合成平衡（细胞色素C氧化酶[COX]活性、COX—Ⅱ亚单位表达，COX-ⅡmRNA丰度和线粒体DNA[mtDNA]含量）和全部线粒体功能（线粒体膜电位和完整细胞的氧化能力）对线粒体进行研究。