冠心病患者Visfatin mRNA基因表达及相关因素的研究

目的:探讨Visfatin(内脏素)基因在冠心病腹部皮下及大网膜的脂肪组织中表达情况及相关因素的分析,从而为冠心病防治提供一种新的、切实可行的新方法。方法:根据既往冠心病的病史的不同,将100例胆石症择期手术患者分为冠心病组50例,对照组50例。用RT-PCR方法检测两组的大网膜与皮下脂肪组织Visfatin mRNA的表达水平,并测定空腹胰岛素(FINS)、血脂和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等指标。结果:①冠心病组血清Visfatin浓度高于对照组;②冠心病组者腹部皮下和网膜脂肪组织中的Visfatin表达高于对照组;结论:Visfatin在冠心病中表达明显增高,可能是冠心病发病独立危险因素。

桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡及Bax mRNA基因表达的影响

目的:探讨中药桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡的作用及机理。方法:将MRL小鼠分为空白组、强的松组和桂枝组,检测MRL小鼠心室肌组织凋亡细胞,计算心肌细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测心肌细胞凋亡基因Bax mRNA表达,观察桂枝对MRL小鼠心肌细胞凋亡的影响。结果:桂枝能够调控心肌细胞凋亡基因Bax mRNA表达,即抑制Bax mRNA表达,明显抑制心肌细胞凋亡(心肌细胞凋亡指数显著下降)。其疗效明显优于空白组(P<0.01),有显著性差异,与强的松组疗效相当(P>0.05)。结论:桂枝可能通过调控凋亡基因而抑制心肌细胞凋亡,从而延缓或部分逆转MRL心肌损害的发生、发展。

急性心肌梗死患者内脏素mRNA基因表达及临床相关性的研究

目的:探讨急性心肌梗死患者内脏素基因在脂肪组织中表达情况,以及内脏素m RNA基因表达与患者临床相关性研究,为急性心肌梗死患者防治提供新的方法。方法:根据临床诊断标准将80例急性心肌梗死患者作为急性心肌梗死组,将100例正常人作为对照组。用RT-PCR方法检测内脏素m RNA的水平和基因的表达水平,并同时收集比较两组的临床检查数据指标。结果:急性心肌梗死患者组的血清内脏素浓度及脂肪组织中的内脏素m RNA基因表达均高于对照组(P<0.05)。急性心肌梗死患者脂肪组织的m RNA的表达量与WHR、胆固醇、甘油三酯均呈正相关性(P<0.05)。急性心肌梗死患者内脏素的量与机体临床的甘油三酯、胆固醇、LDL-C均呈正相关性(P<0.05)。结论:急性心肌梗死患者中内脏素基因与浓度表达增高,可能是急性心肌梗死的一个独立危险因素。

脑胶质瘤细胞polβ基因突变及其与Fas、p53基因mRNA水平表达的研究

目的研究脑胶质瘤细胞中DNA聚合酶β(polβ)基因突变及其与Fas、p53基因mRNA水平表达的关系。方法应用RNA提取、逆转录、PCR扩增、基因克隆及DNA序列分析法,对22例脑胶质瘤、7例良性脑肿瘤及1例肺部转移性鳞状细胞癌标本中的polβ基因进行检测;半定量分析法对脑胶质瘤和良性脑肿瘤标本及其周围正常脑组织中的polβ、Fas、p53基因进行mRNA水平检测及对比。结果30例脑肿瘤标本中,polβ基因突变7例,其中胶质瘤6例,突变率为27.3%(6/22),肺部转移性鳞状细胞癌1例。2例polβ基因二级结构图有明显变异。脑胶质瘤组织中均存在polβ和Fas基因mRNA水平高表达及p53基因低表达,有显著性差异(P<0.01),良性脑肿瘤与正常脑组织p53基因表达无显著性差异(P>0.05);各种脑肿瘤中polβ与Fas基因表达具有正相关性,而polβ、Fas与p53基因表达呈负相关性。结论脑胶质瘤细胞存在polβ基因突变,其突变率为27.3%。脑胶质瘤组织中均存在polβ和Fas基因mRNA水平高表达及p53基因低表达,提示脑胶质瘤的发生和发展可能与polβ基因突变有关,且恶性程度越高,突变越明显;另外,p53基因低表达及polβ、Fas基因高表达可能与脑胶质瘤的发生发展及恶性程度相关。

mRNA差异显示技术克隆中国葡萄属野生种核糖体RNA基因

克隆功能基因是研究植物基因结构及功能的重要途径.利用mRNA差异显示技术,筛选获得了中国葡萄属野生种华东葡萄白河-35-1在人工接种白粉菌前后差异表达基因的cDNA片段V prdrf4.经N orthern杂交验证,该片段为正调控片段,B last检索表明与真核生物核糖体RNA基因的同源性高达90%以上,G enB ank登录号为CD 347664.

桂枝加减汤对MRL小鼠心肌细胞凋亡及Bax mRNA、Caspase 3 mRNA基因表达的影响

目的:探讨复方中药对MRL小鼠心肌细胞凋亡的作用及机理。方法:将MRL小鼠分为复方中药组、桂枝组、强的松组和空白对照组,检测MRL小鼠心肌组织凋亡细胞,计算心肌细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测心肌细胞凋亡基因Bax mRNA、Caspase 3 mRNA表达,观察复方中药(组成:丹参、桂枝、西洋参、冰片)对MRL小鼠心肌细胞凋亡的影响。结果:复方中药能抑制Bax mRNA、Caspase 3 mRNA表达,明显抑制心肌细胞凋亡(心肌细胞凋亡指数显著下降)。其疗效明显优于桂枝组和空白对照组(P<0.05),与强的松组疗效相当,P>0.05。结论:复方中药可能通过调控凋亡基因Bax mRNA、Caspase 3 mRNA表达而抑制心肌细胞凋亡,从而延缓或部分逆转MRL心肌损害的发生、发展。

饲粮硒对种公鸡睾丸中硒含量和硒蛋白酶基因mRNA表达的影响

本试验旨在研究饲粮硒对海兰褐种公鸡睾丸中硒含量和硒蛋白酶基因mRNA表达的影响。选取224只48周龄海兰褐种公鸡,随机分为7个处理,每个处理4个重复,每个重复8只。将亚硒酸钠(SS)和酵母硒(SY)2种硒源分别以3个硒水平(0.2、0.5和0.8 mg/kg)添加到海兰褐种公鸡基础饲粮中,对照组饲喂基础饲粮,进行为期35 d的饲养试验。结果表明:1)饲粮添加SS和SY均能显著提高种公鸡睾丸中硒含量(P<0.01),随着硒添加水平升高,睾丸硒含量也显著升高(P<0.01),且添加SY的组显著高于添加SS的组(P<0.01)。2)饲粮添加0.5 mg/kg SS及0.5和0.8 mg/kg SY可显著提高血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性(P<0.05)。3)各组碘化甲腺氨酸脱碘酶1(ID1)基因mRNA相对表达水平差异不显著(P>0.05);各试验组磷脂谷胱甘肽过氧化物酶(GPx4)基因mRNA相对表达水平均显著高于对照组(P<0.01),且0.8 mg/kg SY组显著高于0.2 mg/kg SY组(P<0.01);各试验组硫氧还蛋白还原酶2(TrxR2)基因mRNA相对表达水平均显著高于对照组(P<0.01),且2种硒源的0.8 mg/kg组均显著高于0.2 mg/kg组(P<0.05或P<0.01)。结果提示,饲粮中添加SY可增强海兰褐种公鸡抗氧化功能,添加0.8 mg/kg SY效果较好。

大豆干旱胁迫下miRNA与mRNA荧光定量PCR内参基因的筛选

【目的】通过分析大豆中候选内参基因的稳定性,筛选大豆干旱胁迫处理条件下适合成熟miRNA、前体miRNA及靶基因mRNA荧光定量PCR的内参基因。【方法】以干旱胁迫处理后的大豆根和叶片为材料,选择了5个成熟miRNAs和5个传统的看家基因作为候选内参基因,利用GeNorm和NormFinder程序对10个候选内参基因的稳定性进行评价。【结果】在干旱胁迫下,大豆根、叶片中,成熟miRNA定量最合适的单个内参基因分别为miR156a、miR167a,最合适的内参基因组合分别为miR1520d与miR156a、miR1520d与miR167a。前体miRNA和靶基因mRNA定量最合适的单个内参基因分别为Fbox、Act11,最合适的内参基因组合分别为Act11与Fbox、Act11与EF1A。【结论】筛选出大豆干旱胁迫条件下成熟miRNA、前体miRNA及其对应靶基因mRNA的荧光定量PCR的内参基因,最稳定内参基因数目为2个。

高碳水化合物日粮对异育银鲫血浆皮质醇含量和HSP70基因mRNA表达的影响

为了探讨高碳水化合物饲料是否会引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的应激反应,选用体质量为(35.60±1.11)g的异育银鲫168尾,随机分成2组,一组设为对照组(NS),投喂碳水化合物水平为35%的日粮;另一组设为高碳水化合物实验组(HS),投喂碳水化合物水平为50%的日粮,每组3个重复。在控温的循环水系统中饲养35 d和70 d后,测定异育银鲫血浆皮质醇激素含量及其肝、心脏、脾、肾中HSP70基因mRNA的表达量。结果显示,高碳水化合物实验组35 d时血浆皮质醇激素与对照组相比较显著升高(P<0.05),肝和心脏HSP70基因mRNA表达较对照组明显增强(P<0.05);70 d时血浆皮质醇激素含量升高,且70 d时高碳水化合物组肝、心脏、脾和肾HSP70基因mRNA表达与对照组相比全部增强。各组饲养70 d后,饥饿24 h后重新投喂的0 h、6 h、12 h、24 h、48 h,高碳水化合物实验组(HS)皮质醇含量在6 h、48 h显著高于对照组(P<0.05),在6 h、12 h、48 h肝HSP70基因mRNA表达与对照组相比均增强(P<0.05),说明异育银鲫对50%碳水化合物含量的饲料的耐受性比较差,鱼体产生了应激反应。结果说明,当异育银鲫血清皮质醇激素含量升高时,其肝中HSP70基因mRNA的表达量却降低,反之亦然。本研究旨在为水生动物营养应激及营养免疫的相关研究提供新的思路,为开辟鱼类应激的营养调节提供科学依据。

蛇床子素对大鼠成骨细胞中OPG和RANKL基因mRNA表达的影响

目的 观察蛇床子素(OST)对体外培养的大鼠成骨细胞中OPG中RANKL基因表达的影响。方法 新生SD大鼠颅骨成骨细胞培养,设空白对照组和用不同浓度蛇床子素培养液(10-7,10-6,10-5mol／L)培养处理的大鼠成骨细胞为实验组,未经处理的细胞为空白对照组,分别提取48 h和7 d的细胞总mRNA,用RT-PCR技术分析OPG／RANKL的mRNA表达情况进行半定量比较。结果48h两基因都已有表达,相对空白对照组,OST上调OPG mRNA的表达(P<0.05),但对RANKL的表达无显著影响,OPG／RANKL比值变大;7 d时OPG和RANKL表达都有增加,OST上调OPG的表达(P<0.01),OST在10-5mol／L下调RANKL的表达(P<0.05),OPG／RANKL比值增大。结论OST可以增加大鼠成骨细胞OPG的表达,同时轻微抑制RANKL的表达,早期对RANKL的表达影响不大。

胃癌组织中p16基因mRNA和蛋白的表达及其与生物学行为的关系

目的 研究 p16基因在胃癌组织中的表达及其与胃癌生物学行为的关系。 方法 采用免疫组化和原位杂交方法检测 10例正常胃粘膜、30例胃癌组织中 p16基因mRNA和蛋白的表达 ,并结合其临床资料进行分析。结果 p16基因mRNA和蛋白阳性表达率 ,在正常胃粘膜均为90 % ,而胃癌分别为 43 33%和 36 6 7%。胃癌组与正常对照组间差异均有显著意义 (P <0 0 5 ) ,p16基因mRNA和蛋白与胃癌分化程度、淋巴结转移与否、远处转移与否呈一定的相关性。结论 p16基因与胃癌发生有关 ,其表达产物检测可能有助于胃癌预后的判断。

TGF-β对成骨细胞增殖、分化及OPG基因mRNA表达的影响

目的 观察不同剂量TGF-β对成骨细胞增殖、分化及OPGmRNA基因表达的影响,明确其作用机理。方法 取新生24h内的Wistar大鼠颅盖骨分离成骨细胞,在TGF-β为Oμg/L、1μg/L、10μg/L、100μg/L的浓度中培养。对细胞的生长及钙结节的形成观察其生长状态,经MTT法测定细胞增殖,细胞分化由碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平测定得到。用RT-PCR技术测定TGF-β对成骨细胞OPC基因mRNA表达的影响。结果 成骨细胞在7d可铺满瓶壁,30d可形成钙结节,TGF-β可促进成骨细胞的增殖、ALP和OCN的分泌,以TGF-β为1μg/L时作用明显。TGF-β可促进OPG基因的表达在为1μg/L时作用明显。结论 1μg/L可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化,促进成骨细胞OPG基因mRNA的表达。TGF-β可能通过影响OPG而调节成骨细胞、破骨细胞的平衡,使骨重建。

可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸对静脉桥c-myc基因mRNA表达的影响

目的选择c-myc为靶基因,在兔颈总动脉颈外静脉移植模型中采用可溶性支架将反义c-myc寡核苷酸转染静脉桥,旨在从核酸mRNA水平明确c-myc基因在静脉桥再狭窄机制中的作用。方法新西兰大耳白兔随机分成5组,每组10只动物。①空白对照组;②单纯可溶性支架组;③正义寡核苷酸可溶性支架组;④反义寡核苷酸可溶性支架组;⑤不匹配寡核苷酸可溶性支架组。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型,合成c-myc寡核苷酸,处理可溶性支架,依组别不同,在静脉移植时静脉桥管腔内分别置入:①空白对照;②单纯可溶性支架;③反义寡核苷酸可溶性支架;④正义寡核苷酸可溶性支架;⑤不匹配寡核苷酸可溶性支架;于颈外静脉移植后7天、28天和90天取出静脉桥。采用原位杂交及NorthernBlot,半定量及定量地检测各组静脉桥中c-myc基因mRNA表达水平。结果原位杂交:同时间段反义寡核苷酸组细胞胞浆与胞核内c-myc基因mRNA的表达明显降低,其他各组静脉桥c-myc基因mRNA强烈表达,斑点杂交及Northern杂交印迹扫描数值显示7天、28天、90天空白对照组、空白支架组、正义组、错配组RNA的表达显著强于同时间点的反义寡核苷酸组RNA表达水平,而同时间点除外反义寡核苷酸可溶性支架组的其他各组之间无差异。结论可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸可显著抑制移植物内c-myc基因的表达。

蜂胶黄酮对衰老小鼠胸腺bcl-2、bax基因mRNA表达的影响

目的:研究蜂胶黄酮对D-半乳糖致衰老小鼠胸腺bcl-2、bax基因mRNA表达的影响,探讨蜂胶黄酮的抗衰老机制。方法:用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,以蜂胶黄酮治疗,RT-PCR法观察小鼠胸腺bcl-2、bax基因mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组bcl-2基因表达降低,bax基因表达升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组bcl-2基因表达升高,bax基因表达降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:蜂胶黄酮能增加衰老小鼠bcl-2基因表达,降低bax基因表达,具有抗衰老作用。

亚低温对大鼠迟发性脑血管痉挛降钙素基因相关肽mRNA表达变化的影响

目的探讨亚低温防治蛛网膜下腔出血(SAH)脑血管痉挛(CVS)的作用机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为对照组和亚低温组,两组分别于注血前及注血后30 min及2、3、71、4 d应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组动物脑基底节区降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA的表达。结果对照组SAH后2、3d脑基底节区CGRP mRNA表达较注血前及注血后30 min明显降低(P<0.01),7 d时仍降低(P<0.01),14 d时趋于正常(P>0.05)。亚低温组具有相同的变化趋势,且注血后30 min及2、3、7 d时CGRP mRNA的表达均较对照组增高(P<0.05,P<0.01)。结论亚低温可能通过促进CGRP mRNA表达上调而达到防治SAH后CVS的作用。

环孢素对心脏移植大鼠外周血淋巴细胞多基因mRNA表达的影响

目的 对大鼠心脏移植前后不同时间点外周血淋巴细胞mRNA差异表达的研究,探讨环孢素对免疫排斥反应过程中基因表达的影响.方法 心脏移植前后以15 mg·kg-1·d-1环孢素灌胃的大鼠,分别在移植前、移植后24,72 h,7,10,12 d取血,提取总RNA,用mRNA差异显示法找出差异表达条带,克隆测序,用灰度扫描法计算差异表达基因的比密度。结果 对照组移植心脏存活率于移植后的10 d内降至为0%,而此阶段环孢素组的移植心脏存活率始终保持在50％.移植后第10天,对照组与凋亡信号传导和线粒体蛋白构象重构与蛋白转运相关基因Ribosomal—12S和S25,MHC—Ⅲ(Hst-70)的表达水平显著高于移植前,与移植心脏存活率最低点同步.其2,3-bisphosphoglycerate和gig18基因表达水平的变化无统计学意义。环孢素组与细胞凋亡有关的gig18和Thbsl,以及T细胞受体(TCR)等基因的表达水平于移植后10 d内持续低于移植前,2,3-bisphosphoglycerate基因的表达水平于移植后24 h降低,只有钠通道β-1基因的表达水平于移植后10 d内高于移植前。结论 环孢素可负调心脏移植后大鼠外周血淋巴细胞凋亡相关基因gig18和Thbsl,正调钠通道基因的转录。

IL-1α、Bax、Bcl-2等基因mRNA在帕金森病小鼠模型中的表达

目的 :探讨细胞因子IL 1α和IL 10与凋亡相关基因Bcl 2家族中Bax和Bcl 2在 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶(MPTP)致C5 7BL6J小鼠帕金森病模型中黑质和纹状体内的表达意义及关系。方法 :利用RT PCR的方法检测对照组 (NS组 )C5 7BL6J小鼠及皮下注射MPTP后第 6天C5 7BL6J小鼠的左右侧脑内黑质、纹状体、下丘脑内的IL 1α ,IL 10 ,Bax和Bcl 2的mRNA的表达。结果 :与对照组相比 ,IL 1αmRNA在帕金森小鼠模型纹状体内表达显著增加 ;除对照组 1只外 ,对照组和MPTP组均未检测到IL 10mRNA的表达 ;BaxmRNA和Bcl 2mRNA在黑质内的表达均显著低于对照组。结论 :黑质和纹状体在MPTP所致的小鼠帕金森病中受累 ,表现为有不同基因的消长。促进炎症发生的细胞因子IL

野生型斑马鱼胚胎中hoxd3基因mRNA的表达谱

目的:为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况。方法:提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基因片段,将得到的hoxd3基因片段和pCS2+质粒经EcoR I、Xba I双酶切后插入pCS2+质粒中,挑选阳性克隆,通过双酶切、菌落PCR以及测序鉴定;将pCS2+-hoxd3重组子经EcoR I酶切线性化,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记hoxd3基因的反义mRNA探针。用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了pCS2+-hoxd3重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测hoxd3基因的表达,发现在Tuebingen野生型斑马鱼24 hpf-72 hpf胚胎的中脑后脑交界处以及后脑中可以观察到hoxd3基因的表达。结论:hoxd3基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统高表达,未发现在血管生成区域的表达。