MRS2179对大鼠缺血性脑卒中后MMP-9表达及血脑屏障通透性的影响

目的:观察P2Y1受体抑制剂MRS2179对大鼠缺血性脑卒中后MMP-9表达及血脑屏障(BBB)通透性的影响。方法:45只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、MRS2179组各15只。假手术组及模型组经侧脑室注射5μL人工脑脊液(aCSF),MRS2179组侧脑室注射5μL MRS2179(2 nmol)。制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,假手术组不予缺血。缺血再灌注24 h后,应用干湿重法检测脑组织含水量;伊文思蓝染料(EB)溢出量定量检测BBB通透性改变;Western blot法检测MMP-9蛋白表达。结果:模型组、假手术组、MRS2179组的脑含水量分别为(81.72±0.23)%、(77.65±0.27)%、(79.92±0.24)%(n=6),模型组高于假手术组(P<0.01);MRS2179组较模型组有所下降(P<0.01),但仍高于假手术组(P<0.01)。模型组梗死侧脑组织血管外EB溢出量为(1737.60±67.46)ng/g,显著高于假手术组(324.18±63.35)ng/g(P<0.01);MRS2179组梗死侧脑组织血管外EB溢出量为(1165.15±93.26)ng/g,较模型组明显下降(P<0.01)(n=6)。假手术组、模型组、MRS2179再灌注24 h梗死边缘区脑组织中相对MMP-9蛋白含量分别为(0.52±0.05)、(1.69±0.08)、(0.99±0.10)(n=3),模型组与假手术组相比明显升高(P<0.01),MRS2179组与模型组比较显著下降(P<0.01)。结论:P2Y1R抑制剂MRS2179可能通过降低MMP-9表达,降低BBB通透性,减轻缺血性脑卒中后脑水肿程度。

益肾达络饮对MRS2179干预下实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的影响及机制

目的:从P2Y1受体探讨益肾达络饮治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的机制。方法:60只C57BL/6J雌性小鼠随机分成6组:空白组、模型组、P2Y1受体拮抗剂(MRS2179)组、中药组、MRS2179+中药组、激素组。除空白组外均制作EAE模型,每日记录各组小鼠的体质量与神经功能评分。造模第4天,MRS2179组与MRS2179+中药组腹腔注射MRS2179,造模第8天开始给予相应药物连续干预14 d取材。HE染色观察各组小鼠脑与脊髓的病理改变;ELISA测定各组小鼠血清中白介素(IL)-6、IL-17、IL-23、γ干扰素(IFN-γ)的浓度;Western Blot检测各组小鼠脑及脊髓中P2Y1、细胞外信号调节激酶(ERK)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)蛋白的表达变化。结果:益肾达络饮可以减缓EAE小鼠体质量下降,降低神经功能评分,缓解脑与脊髓中的炎性浸润。与空白组比较,模型组血清中IL-6、IL-17、IL-23、IFN-γ浓度显著升高,脑与脊髓中P2Y1、ERK、GFAP、PKA表达显著升高,GDNF、CREB、PKC表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。中药组明显逆转上述变化,MRS2179+中药组进一步逆转上述变化。结论:益肾达络饮的作用机制可能是通过影响中枢神经系统中的P2Y1受体活性,抑制神经炎症反应,抑制GFAP分泌,影响PKA/PKC平衡,促进GDNF的生成,从而抑制星形胶质细胞过度活化、缓解炎症、促进神经修复,缓解EAE的疾病状态。