耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因检测及耐药性分析

目的了解本院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）SCCmec基因的分布特点及耐药性。方法采用VITEK-2全自动微生物分析系统检测2010-2011年从患者分离的MRSA的耐药性，利用PCR方法检测SCCmec基因。结果分离株中mecA基因携带率为97．2％，对万古霉素、利奈唑胺敏感，对喹努普汀／达福普汀和利福平的耐药率小于20％，对左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素和复方新诺明、克林霉素耐药率均大于70％。SCCmec基因共有4种类型（I～Ⅳ型），Ⅱ型17株（23．6％），Ⅲ型48株（66．7％），1V型3株（4．2％）。结论本院分离的MRSA的型别以SCCmecⅢ型为主，MRSA对抗茵药物呈现多重耐药现象。

牛源金黄色葡萄球菌耐药性及甲氧西林敏感和耐甲氧西林菌株演化相关性研究

为研究牛源金黄色葡萄球菌耐药性以及甲氧西林敏感(MSSA)和耐甲氧西林(MRSA)菌携带的耐药基因、MRSA的SCCmec基因型,揭示牛源MSSA与MRSA之间的演化相关性和MRSA起源和扩散途径,对2009年以来中国五省区不同牛场分离的54株金黄色葡萄球菌进行了药敏试验。对确定的12株MSSA和MRSA进行了耐药基因检测、SCCmec基因型分型和多位点测序分型(MLST)研究。54株菌的药敏结果显示,对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素的耐药菌株分别为88.8%、81.5%、88.9%、90.7%、92.6%、94.4%、79.6%、63.0%和70.4%。其中,对所测10种抗生素完全耐药的占5.6%,对5种以上耐药的占85.2%,6株(11.1%)对头孢西丁耐药。12株MSSA和MRSA菌株的药敏和耐药基因检测结果显示,3株MRSA对10种抗生素耐药;6株MSSA菌中,新疆分离株对2～4种抗生素耐药,其它省区分离株对7种以上抗菌素耐药。12株MSSA和MRSA菌均检出ermC和tetK基因;6株MRSA中均检出aac(6′)/aph(2″)基因,5株检出tetM基因,4株检出aph(3′)-Ⅲ基因;6株MSSA均未检出aac(6′)/aph(2″)和aph(3′)-Ⅲ,4株检出tetM基因。用多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型显示,5株为SCCmec IV,1株未能分型;12株菌的MLST分型发现,所有菌株分为ST50、ST965、ST6、ST97和ST9序列型。经eBURST v3分析,MRSA分布在CC7、CC4、CC21和CC9四个克隆复合群(CCs)中,MSSA分布在CC7和CC32克隆复合群中。以上研究表明,我国牛源金黄色葡萄球菌不仅耐药严重,且表现多重耐药;MRSA基因型以SCCmec IV为主。对牛源SCCmec IV型MRSA与同型人源MRSA的耐药谱分析发现有较大差异,推测位于质粒或转座子上的耐药基因可能插入到金黄色葡萄球菌基因组中,导致耐药基因在不同菌株间传播。根据ST97中有MSSA和MRSA以及牛源MRSA与人源MRSA的MLST比较,确认我国牛源MRSA是在抗生素的选择压力下由来源于不同克隆复合群的MSSA获得SCCmecIV而产生,推测同一克隆株MRSA的扩散并不是MRSA大范围出现的主要原因。

MRSA SCCmecⅢ型ccr基因在抗生素压力下的差异表达

目的分析不同种类、不同浓度抗生素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)染色体mec盒(SCCmec)Ⅲ型ccr基因表达的影响。方法将临床分离株MRSA 62分别在不含抗生素及含有氨苄西林、替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺的培养基中培养,每种抗生素分别设立20μg/ml(高),2μg/ml(中)和0.2μg/ml(低)3种浓度。提取细菌总RNA,采用Real-time PCR检测MRSA ccrA、ccrB、ccrC基因表达水平。结果在中等浓度的氨苄西林中MRSA 62ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。高浓度的万古霉素可杀死细菌,而低浓度万古霉素能诱导ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。高浓度的替考拉宁能杀死细菌,而中等浓度时诱导ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。中等浓度利奈唑胺ccrA、ccrB、ccrC基因高表达。结论不同种类及浓度抗生素压力对MRSA SCCmecⅢ型ccr基因表达水平的影响不同,ccr基因的表达直接影响到耐药基因的整合与剪切表达水平,这可能是MRSA SCCmecⅢ型对抗生素耐药的机制之一。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型研究与耐药基因检测

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的葡萄球菌盒染色体(SCCmec)基因型分布特点和耐药基因的携带状况。方法采用多重聚合酶链反应(PCR)对医院分离的125株MRSA进行SCCmec基因型分型,普通PCR对其中的50株MRSA进行6种耐药基因扩增。结果检测的125株MRSA中124株SCCmec基因型为Ⅲ型,1株不能分型,6种耐药基因的阳性率分别为aac(6′)/aph(2″)98%、aph(3′)Ⅲ基因46%t、etM基因72%、erm基因86%,未扩增出TEM和ant(4′、4″)基因。结论引起感染的MRSA的基因型基本为SCCmecⅢ型,SC-CmecⅢ型的MRSA对氨基糖苷类、红霉素类、四环素类耐药基因有较高的携带率,多重PCR法可以有效的用于大批量临床分离的MRSA的SCCmec分型研究。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子流行病学研究

目的研究某院临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分子流行病学特点,为临床预防、MRSA流行监测,制定防治方案等提供科学依据。方法采用药敏纸片法和PCR技术对从住院患者、医务人员及环境分离的MRSA进行表型、基因型鉴定,检测其杀白细胞毒素(pvl)基因,并进一步对mecA基因阳性标本进行SCCmec基因分型。结果从1352份标本中分离出108株金黄色葡萄球菌,MRSA为54株,主要分离于烧伤科占77.78%;根据SCCmec基因分型结果,54株MRSA以Ⅲ型为主,占68.52%,pvl基因均为阴性。结论某院MRSA临床检出率与2008年监测的数据相仿,流行情况以Ⅲ型SCCmec基因型为主,提示医院MRSA临床株与环境株之间MRSA可能具有同源性,临床必须采取严格措施加以控制。

金黄色葡萄球菌毒力基因检测及分子分型研究

目的：研究湖北省黄州区人民医院于2011—2013年分离的488株金黄色葡萄球菌的分子生物学特征及毒力基因分布情况。方法采用琼脂稀释法测定苯唑西林和头孢西丁对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（ minimum inhibitory concentration ，MIC）， PCR方法进行SCCmec分型（ staphy-lococcal cassette chromosome mec）和多位点序列分析（multilocus-sequence typing， MLST），多重PCR方法检测31个常见的毒力基因。结果488株金黄色葡萄球菌中共检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）227株，检出率为46．5％，227株MRSA 中 SCCmecⅢ型居多，占81．5％；其次为Ⅳ型，占10．1％。 MRSA菌株中，主要的克隆型为CC（clonal complex）8，占81．1％，其次为CC59和CC5，分别占4．8％和3．1％，261株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）中，主要克隆型为CC1，占34．1％，其次为CC398、CC121和CC59，分别占21．8％、14．9％和13．0％。109株MSSA（48．2％）同时携带≥15个毒力基因，明显高于MRSA菌株（28．2％，P＝0．002），肠毒素基因（sed、sej和ser）的分布与CC8和CC5密切相关，表皮剥脱素基因（ eta， etb）和lukED基因仅在CC1中检测到，与其他CCs相比，CC1和CC59克隆中pvl基因检出率更高（P＜0．05）。结论本地区MRSA的流行率为46．5％，与全国平均水平基本一致，MRSA菌株主要流行克隆为ST239-MRSA-SCCmecⅢ型，占79．3％，医疗卫生部门应采取有效措施控制MRSA的传播。 MSSA菌株毒力基因检出率明显高于MRSA，并且不同的CCs克隆呈现不同的毒力基因谱，表明毒力基因的携带与遗传背景有关。