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MS-PCR法检测血管紧张素原基因M235T多态性 被引量:2
1
作者 耿茜 杨笛 +1 位作者 张寄南 马文珠 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期251-253,共3页
目的 建立新型突变基因分离聚合酶链反应 (MS PCR)法检测血管紧张素原 (AgT)基因M 2 35T多态性 ,以正确评估其与家族性原发性高血压的关系。方法 建立PCR RFLP和MS PCR法最佳实验体系 ,验证敏感性及特异性。结果  ( 1)PCR RFLP体系... 目的 建立新型突变基因分离聚合酶链反应 (MS PCR)法检测血管紧张素原 (AgT)基因M 2 35T多态性 ,以正确评估其与家族性原发性高血压的关系。方法 建立PCR RFLP和MS PCR法最佳实验体系 ,验证敏感性及特异性。结果  ( 1)PCR RFLP体系中 ,随内切酶量和消化时间的增加 ,消化反应越彻底 ,以 0 0 75 μg基因组DNA扩增产物、30UnitTth111 Ⅰ酶消化 3小时为最佳反应体系。 ( 2 )MS PCR法一次扩增即可确定AgT基因型。 ( 3) 10个标本以PCR RFLP法检测者基因型均为MT ,而MS PCR法仅 1例为MT型 ,余 9例均为TT型 ( 90 % )。结论 传统的PCR RFLP可能因消化不彻底而造成结果判断的误差 ;MS PCR以其高敏感性和特异性成为检测基因多态性的快速、简便。 展开更多
关键词 ms-pcr 血管紧张素原 基因多态性 M235T多态性 原发性高血压 基因诊断
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用两步MS-PCR结合ELISA检测HIV-1逆转录酶基因的耐药性突变 被引量:2
2
作者 何红秋 程绍辉 +2 位作者 刘斌 陈慰祖 王存新 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期42-46,共5页
高效抗逆转录病毒治疗法(HAART)的推广使用有效地抑制了HIV-1病毒的传播和艾滋病(AIDS)的发病率、死亡率。近年来,HIV-1逆转录酶基因突变所导致的耐药性已成为HAART治疗失败的主要原因,耐药性突变的检测对于指导病人用药以及新药开发具... 高效抗逆转录病毒治疗法(HAART)的推广使用有效地抑制了HIV-1病毒的传播和艾滋病(AIDS)的发病率、死亡率。近年来,HIV-1逆转录酶基因突变所导致的耐药性已成为HAART治疗失败的主要原因,耐药性突变的检测对于指导病人用药以及新药开发具有重要意义。发展了一种检测HIV-1逆转录酶基因耐药性突变的新方法。采用两步MS-PCR方法检测HIV-1B亚型野生型和耐药突变型逆转录酶基因突变,检测点包括M41L、K70R、K103N、Y181C和T215,并在两步MS-PCR基础上,设计比野生型引物长的突变型引物,结合微孔板杂交ELISA呈色技术检测各点突变。结果显示,简化的两步MS-PCR能保持灵敏度和特异性高的优点,ELISA的阳性结果与阴性结果的比值(P/N)达到要求,两步MS-PCR结合ELISA方法灵敏度高,操作简单、结果直观、成本低、相对耗时短且能进行高通量检测,使其无论在HIV-1耐药性突变及其它的点突变检测中都具有较好的临床应用前景。 展开更多
关键词 两步ms-pcr ELISA HIV-1 逆转录酶基因 耐药性
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霍乱弧菌核酸标准物质定值方法:ICP-MS法和数字PCR法 被引量:4
3
作者 梁文 李妍 +5 位作者 许丽 李兰英 闻艳丽 杨雪 罗超 刘刚 《化学试剂》 CAS 北大核心 2018年第12期1179-1182,共4页
霍乱弧菌是人类霍乱的病原体,霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行,主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水,死亡率甚高,属于国际检疫传染病。霍乱弧菌定量检测质粒标准物质,霍乱弧菌的外膜蛋白编码基因omp ... 霍乱弧菌是人类霍乱的病原体,霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行,主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水,死亡率甚高,属于国际检疫传染病。霍乱弧菌定量检测质粒标准物质,霍乱弧菌的外膜蛋白编码基因omp W为靶基因,可作为霍乱弧菌核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒中的阳性物质替代物。构建霍乱弧菌质粒DNA标准样品,采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)方法和数字PCR两种方法定值,最终定值结果为(79. 2±5. 2) ng/μL,可为霍乱弧菌核酸检测的量值准确性、可比性和有效性提供保障。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 ICP-ms 数字pcr
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MS-PCR法评估家族性原发性高血压病人血管紧张素原基因M235T多态性 被引量:1
4
作者 耿茜 杨笛 +1 位作者 张寄南 马文珠 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2001年第4期336-339,共4页
本文采用新型高敏感、特异的MS PCR法对中国苏皖地区 94例具高血压家族史和 36例无家族史者检测血管紧张素原M2 35T基因型。具有高血压家族史的原发性高血压病人 (FH组 )、具家族史的非高血压者 (FNH组 )、无家族史的正常对照 (N组 )和... 本文采用新型高敏感、特异的MS PCR法对中国苏皖地区 94例具高血压家族史和 36例无家族史者检测血管紧张素原M2 35T基因型。具有高血压家族史的原发性高血压病人 (FH组 )、具家族史的非高血压者 (FNH组 )、无家族史的正常对照 (N组 )和无家族史的高血压病人 (NFH组 )血管紧张素原 (Angiotensinogen ,AGT)基因TT型 /T等位基因频率分别为 0 5 81/ 0 77、0 5 6 3/ 0 77、0 346 / 0 5 8和 0 4/ 0 5 5。有家族史者T等位基因频率远高于无家族史者。小样本研究认为中国苏皖地区人群原发性高血压的发病与AGTM2 35T基因多态性密切相关 ,T等位基因具更高的发病风险。各组间年龄分析结果显示AGTM2 展开更多
关键词 ms-pcr 家族性原发性高血压 血管紧张素原基因多态性 pcr-RFLP
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Gc亚型检测的复合MS-PCR法及其应用 被引量:1
5
作者 钱水 刘超 +2 位作者 黄代新 杨荣芝 杨庆恩 《中国法医学杂志》 CSCD 2005年第3期154-157,共4页
目的探讨建立Gc亚型检测的复合MS-PCR法及其应用价值。方法根据Gc基因中的2处点突变,设计2对片段相差5bp的等位基因特异性引物和1条公共引物进行复合MS-PCR,分析Gc多态性,并调查武汉地区218例汉族无关个体Gc多态性和鉴定10例亲子关系。... 目的探讨建立Gc亚型检测的复合MS-PCR法及其应用价值。方法根据Gc基因中的2处点突变,设计2对片段相差5bp的等位基因特异性引物和1条公共引物进行复合MS-PCR,分析Gc多态性,并调查武汉地区218例汉族无关个体Gc多态性和鉴定10例亲子关系。结果复合MS-PCR检测的Gc基因型,与AmpliTypePM试剂盒的分型结果一致;武汉地区汉族人群Gc基因的3个常见等位基因Gc1F、Gc1S、Gc2的基因频率分别为0.4816、0.2592、0.2592,观察杂合度(Hobs)、期望杂合度(Hexp)、多态性信息含量(PIC)、个人识别能力(DP)、非父排除率(PE)分别为0.6193、0.6359、0.6253、0.7974、0.3480,基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡;真三联体和非真三联体亲子鉴定各5例,前者不排除父子关系,与常规STR分型一致,后者经Gc-MS-PCR分型排除2例。结论建立复合MS-PCR法检测Gc亚型在法医物证鉴定中有实用价值。 展开更多
关键词 法医物证学 型特异成分 复合mspcr 遗传多态性 亲子鉴定
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PCR-MS HPV检测联合TCT在社区宫颈癌筛查中的应用 被引量:1
6
作者 张琪 赵华 黄望珍 《齐齐哈尔医学院学报》 2015年第12期1810-1811,共2页
目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)基因检测联合宫颈薄层液基细胞学(TCT)在社区宫颈癌筛查中的临床病理意义。方法收集2013年10—12月社区宫颈癌筛查病人资料,以同期本院门诊病人作为对照组,进行两者TCT及宫颈活检结果的统计与比较。结果社... 目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)基因检测联合宫颈薄层液基细胞学(TCT)在社区宫颈癌筛查中的临床病理意义。方法收集2013年10—12月社区宫颈癌筛查病人资料,以同期本院门诊病人作为对照组,进行两者TCT及宫颈活检结果的统计与比较。结果社区宫颈癌筛查中HPV阳性患者的TCT及宫颈活检阳性检出率明显高于同期本院门诊病人,具有统计学意义。结论 PCR-MS HPV检测具有准确、快速、经济等优点,作为初筛方法,适合在大规模人群的宫颈癌筛查中推广。 展开更多
关键词 人乳头状病毒(HPV) 聚合酶链反应及飞行时间质谱技术(pcr-ms) 薄层液基细胞学(TCT) 病理活检
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洋葱Ms位点多重PCR标记的开发与优化
7
作者 王振宝 霍雨猛 +7 位作者 刘冰江 缪军 杨妍妍 高莉敏 孔素萍 程斐 陈宁 吴雄 《山东农业科学》 2014年第9期7-11,共5页
以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6... 以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6μL、DNA模板1μL(约50 ng)、10μmol/L引物各1μL、5 U/μL rTaq聚合酶0.6μL、用灭菌双蒸水补齐至25μL;反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,65.4℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。优化后的体系和程序可以检测到清晰的目的条带,通过一次PCR反应即可鉴定Ms位点的3种基因型(MsMs、Msms、msms),操作简单,稳定性好。 展开更多
关键词 洋葱 雄性不育 ms位点 多重pcr标记
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基于定向PCR和UPLC-MS技术分析放线菌中的产物 被引量:1
8
作者 万国庆 杨志钧 +3 位作者 饶敏 陈代杰 戈梅 倪孟祥 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期24-27,31,共5页
目的从放线菌中发现聚酮类或大环内酯环类化合物。方法采用定向PCR方法从放线菌中筛选含Ⅰ型PKS基因,然后利用UPLC-MS技术分析该菌株发酵产物。结果从40株放线菌中获得了18株PCR阳性菌株,进一步的UPLC-MS/MS分析,从菌株HCCB11494发现了7... 目的从放线菌中发现聚酮类或大环内酯环类化合物。方法采用定向PCR方法从放线菌中筛选含Ⅰ型PKS基因,然后利用UPLC-MS技术分析该菌株发酵产物。结果从40株放线菌中获得了18株PCR阳性菌株,进一步的UPLC-MS/MS分析,从菌株HCCB11494发现了7个macrotetrolides类抗生素;该菌株的种属初步鉴定为小链霉菌。结论采用PKS I基因定向筛选结合UPLC-MS分析可从放线菌中筛选得到大环内酯化合物。 展开更多
关键词 定向pcr UPLC-ms ms I型PKS Macrotetrolides GYRB
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ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS进行K-ras基因分型 被引量:1
9
作者 刘忠臣 郑薇薇 李庆阁 《中国肿瘤》 CAS 2005年第4期256-260,共5页
[目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用A... [目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型。[结果]在相同的扩增条件下,采用ARMS实时PCR方法,第一个位点的野生型和突变型的ΔCt值至少为,但第8二个位点野生型和突变型的ΔCt值仅为1~2左右。第二个位点改用MALDI鄄TOF-MS分型方法,采用一条公用引物和dATP,ddTTP,ddCTP和ddGTP的混和物,12密码子第二位点基因分型可以准确检测。[结论]ARMS实时PCR方法分析速度快,操作简便,但它需要合适的反应条件及高质量模板。MALDI-TOF-MS分型方法虽然步骤较多,但准确度高,反应体系稳定并具有高通量潜力。 展开更多
关键词 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 扩增阻碍突变系统方法 实时pcr 基因分型 K-RAS基因 基因突变
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鉴别MS-H疫苗株和MS野毒株的MAMA-PCR检测方法的建立与初步应用
10
作者 李玉燕 巩新民 +6 位作者 祝永华 张霞 彭晓艳 王海兰 曲秀娟 郭龙宗 崔治中 《家禽科学》 2020年第2期22-26,共5页
根据Kreizinger Z等[1]已发表的研究,依据obg基因第367位和629位的核苷酸转换,我们建立了依托琼脂糖凝胶电泳(常规PCR)的错配扩增突变分析(MAMA)方法以区分ts+MS-H疫苗株、ts-MS-H再分离株以及MS野毒株。本研究对本实验室保存的客户送检... 根据Kreizinger Z等[1]已发表的研究,依据obg基因第367位和629位的核苷酸转换,我们建立了依托琼脂糖凝胶电泳(常规PCR)的错配扩增突变分析(MAMA)方法以区分ts+MS-H疫苗株、ts-MS-H再分离株以及MS野毒株。本研究对本实验室保存的客户送检的MS分离株的阳性病料,以及日常场区送检咽喉拭子MS通用引物检测的阳性样品进行MAMA-PCR扩增,用以比对各分离株目的片段的差别,建立MS-H疫苗株与MS野毒株的鉴别方法,这将为临床鸡群MS感染状态的评估提供参考依据,也为MS的净化和防控提供技术指导。 展开更多
关键词 ms 咽喉拭子 MAMA-pcr
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甲基化PCR作为白血病微量残留病检测方法的探索 被引量:4
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作者 赵瑜 李红华 +6 位作者 薄剑 靖彧 王书红 王全顺 窦立萍 孙敬芬 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期455-458,共4页
本实验研究探讨以甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)作为白血病微量残留病(MRD)检测方法的可行性。将Id4基因呈完全甲基化的HL-60细胞和Id4基因呈完全非甲基化的Hek937细胞按不同比例混合,实验分为3组:A组为10%HL-60+9%Hek937,B组为1%HL... 本实验研究探讨以甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)作为白血病微量残留病(MRD)检测方法的可行性。将Id4基因呈完全甲基化的HL-60细胞和Id4基因呈完全非甲基化的Hek937细胞按不同比例混合,实验分为3组:A组为10%HL-60+9%Hek937,B组为1%HL-60+99%Hek937,C组为0.1%HL-60+99.9%Hek937。用MS-PCR方法检测不同白血病细胞比例下Id4基因甲基化情况。结果表明,HL-60细胞仅有155bp的Id4基因甲基化特异性扩增,呈Id4基因完全甲基化;Hek937细胞仅有156bp的Id4基因非甲基化特异性扩增,呈Id4基因完全非甲基化。A、B、C组同时有155bp的Id4基因甲基化和156bp的Id4基因非甲基化特异性扩增,显示Id4基因甲基化表达。结论:MS-PCR方法可从0.1%比例含量的白血病细胞样本中检测到Id4基因甲基化,加之Id4基因甲基化在不同类型白血病中差异不明显,因此用MS-PCR检测Id4基因甲基化状态可以作为一种检测各种类型白血病微量残留病的方法。 展开更多
关键词 白血病 微量残留病 Id4基因甲基化 mspcr
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PCR-核酸飞行时间质谱系统检测新型冠状病毒方法的建立及应用研究 被引量:12
12
作者 王俊 张栋 +4 位作者 陈晴晴 俞俊岭 杨奕 乔亮 孙永 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2020年第35期4430-4435,4442,共7页
背景新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限... 背景新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量。通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充。目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)原理,在Clin-ToFⅡ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱(PCR-TOF MS)系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值。方法2020年2—3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据。于2020年1—2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本80份(咽拭子样本55份、痰液样本25份)及健康人群样本20份(均为咽拭子样本)作为评估PCR-TOF MS系统效果的数据。建立PCR-TOF MS系统试验体系步骤,包括PCR扩增、虾碱性磷酸酶(SAP)消化、单碱基延伸和质谱检测;并基于阳性质粒优化模版量,根据186份样本检测质谱峰的信噪比(SNP)确定该方法在SARS-CoV-2检测时的判读标准。对80份疑似SARS-CoV-2样本和20份健康人群样本进行检测分析,并与实时荧光定量PCR法进行对比。结果通过对PCR-TOF MS模板条件的优化,模版量6μl时,扩增产物可获得典型的质谱峰图。建立的PCR-TOF MS反应体系可以对SARS-CoV-2核酸的开放读码框1ab(ORF1ab)基因和核壳蛋白(N)基因进行有效扩增检测。本研究PCR-TOF MS方法对临床疑似病例样本的检出率为90.00%,高于实时荧光定量PCR法的75.00%,同时,结果显示,实时荧光定量PCR法检出中含有25.00%的可疑结果,而PCR-TOF MS则无可疑结果。对于痰液和咽拭子两种样本的检出率,PCR-TOF MS法分别为100.00%和85.45%,高于荧光定量PCR法的64.00%和43.64%。阴性样本两种方法均未检出。结论通过PCR技术与飞行时间质谱技术的结合,使得检测SARS-CoV-2目标片段指数级扩大,从而提高样本的检测灵敏度。MALDI-TOF MS技术通过对离子分子量的检测分析,具有较高的准确性和特异性,同时证实了痰液样本优于咽拭子样本。该方法可作为实时荧光定量PCR法的补充和协同,在一定程度上有利于弥补假阴性的问题,从而降低临床漏诊率,提高检测效率,为疫情的研判缩短时间。 展开更多
关键词 新型冠状病毒肺炎 新型冠状病毒 pcr-飞行质谱系统 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 核酸检测
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GC-MS和HELP法分析药对陈皮-青皮与其单味药挥发油成分 被引量:10
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作者 徐小娜 蒋军辉 +1 位作者 王永生 杨慧仙 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1277-1281,共5页
采用水蒸气蒸馏法提取药对陈皮-青皮与其单味药的挥发油成分,利用气相色谱-质谱法(GC-MS)和化学计量学多元分辨方法——直观推导式演进特征投影法(HELP),同时结合程序升温保留指数(PTRI)进行挥发油成分定性定量分析。分别在陈皮、青皮... 采用水蒸气蒸馏法提取药对陈皮-青皮与其单味药的挥发油成分,利用气相色谱-质谱法(GC-MS)和化学计量学多元分辨方法——直观推导式演进特征投影法(HELP),同时结合程序升温保留指数(PTRI)进行挥发油成分定性定量分析。分别在陈皮、青皮和药对陈皮-青皮的挥发油中鉴定出27、27和23个成分,定性组分含量分别占三者挥发油总含量的93.64%、96.45%和85.28%,共有化合物19种;主要化学成分为D-柠檬烯、γ-萜品烯、芳樟醇和α-法呢烯。 展开更多
关键词 药对 陈皮-青皮 气相色谱-质谱 直观推导式演进特征投影法 挥发油 程序升温保留指数
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Detection of Genetically Modified Crops by Combination of Multiplex PCR and Low-density DNA Microarray 被引量:15
14
作者 PING-PING ZHOU JIAN-ZHONG ZHANG +1 位作者 YUAN-HAI YOU YONG-NING WU 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2008年第1期53-62,共10页
Objective To develop a technique for simultaneous detection of various target genes in Roundup Ready soybean by combining multiplex PCR and low-density DNA microarray. Methods Two sets of the multiplex PCR system were... Objective To develop a technique for simultaneous detection of various target genes in Roundup Ready soybean by combining multiplex PCR and low-density DNA microarray. Methods Two sets of the multiplex PCR system were used to amplify the target genes in genetically modified (GM) soybean. Seventeen capture probes (PCR products) and 17 pairs of corresponding primers were designed according to the genetic characteristics of Rroundup Ready soybean (GTS40-3-2), maize (MonS10, Nk603, GA21), canola (T45, MS1/RF1), and rice (SCK) in many identified GM crops. All of the probes were categorized and identified as species-specific probes. One negative probe and one positive control probe were used to assess the efficiency of all reactions, and therefore eliminate any false positive and negative results. After multiplex PCR reaction, amplicons were adulterated with Cy5-dUTP and hybridized with DNA microarray. The array was then scanned to display the specific hybridization signals of target genes. The assay was applied to the analysis of sample of certified transgenic soybean (Roundup Ready GTS40-3-2) and canola (MS1/RF1). Results A combination technique of multiplex PCR and DNA microarray was successfully developed to identify multi-target genes in Roundup Ready soybean and MS 1/RF1 canola with a great specificity and reliability. Reliable identification of genetic characteristics of Roundup Ready of GM soybean from genetically modified crops was achieved at 0.5% transgenic events, indicating a high sensitivity. Conclusion A combination technique of multiplex PCR and low-density DNA microarray can reliably detect and identify the genetically modified crops. 展开更多
关键词 Genetically modified organisms Low-density DNA microarray Multiplex pcr Roundup Ready soybean ms 1/RF1 canola
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微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的测定方法比较研究 被引量:2
15
作者 姜芹 孙冰清 +4 位作者 张妤 吴雨珊 顾欣 张文刚 黄士新 《饲料研究》 CAS 北大核心 2023年第13期122-125,共4页
试验旨在建立快速准确测定微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的方法,分别对不同计数培养基和菌株鉴定方法进行比较,并开展实际样品测定。结果显示,丁酸梭菌在亚硫酸铁琼脂、TSC琼脂和TSN琼脂中均可生长,但亚硫酸铁琼脂培养基的计数结果最高;... 试验旨在建立快速准确测定微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的方法,分别对不同计数培养基和菌株鉴定方法进行比较,并开展实际样品测定。结果显示,丁酸梭菌在亚硫酸铁琼脂、TSC琼脂和TSN琼脂中均可生长,但亚硫酸铁琼脂培养基的计数结果最高;微量生化鉴定管、16S rRNA扩增测序、荧光定量PCR及基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-TOF MS)均能鉴定丁酸梭菌,但荧光定量PCR方法最快速、准确、适用范围广;2批次市售样品分别含丁酸梭菌9.1×10^(8)、1.2×10^(9)CFU/g,典型菌落荧光定量PCR鉴定结果阳性。研究表明,亚硫酸铁琼脂培养基平板计数法结合荧光定量PCR可对微生物饲料添加剂中的丁酸梭菌进行快速有效的测定。 展开更多
关键词 丁酸梭菌 活菌计数 生化鉴定 荧光定量pcr 基质辅助激光解析电离质谱
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鉴别滑液囊支原体MS-Y田间株与MS-H疫苗株多重PCR方法的建立
16
作者 张立根 李娜 +3 位作者 赵妍 黄宝钦 罗忠宝 吴异健 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期34-42,共9页
为了建立一种快速准确鉴别滑液囊支原体MS-Y分离株和活疫苗MS-H的方法,根据滑液囊支原体ppm和deoD基因的2个碱基突变位点序列,运用错配扩增突变分析(MAMA)PCR方法,设计了2对特异性引物和1对通用引物,用于扩增目的基因,通过优化反应条件... 为了建立一种快速准确鉴别滑液囊支原体MS-Y分离株和活疫苗MS-H的方法,根据滑液囊支原体ppm和deoD基因的2个碱基突变位点序列,运用错配扩增突变分析(MAMA)PCR方法,设计了2对特异性引物和1对通用引物,用于扩增目的基因,通过优化反应条件,建立一种能同时鉴别出MS-Y和MS-H的多重PCR检测方法,并检测了该方法的特异性和敏感性。结果显示,利用特异性引物的多重PCR方法能同时鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和滑液囊支原体MS-Y分离株的DNA,分别扩增出相应的特异目的条带,检测MS-H株的最低敏感度为4.21×10^(5)copies/μL,检测MS-Y株的最低敏感度为6.47×10^(5)copies/μL;而利用通用引物对检测滑液囊支原体DNA的最低浓度为2.18×10^(3)copies/μL,检测MS-H DNA的浓度下限均为1×10^(5)CCU/mL,检测MS-Y DNA的最低浓度为1×10^(3)CCU/mL。本研究建立了一种能同时快速鉴别滑液囊支原体MS-H活疫苗株和MS-Y分离株的多重PCR方法。 展开更多
关键词 滑液囊支原体 ms-H 多重pcr
原文传递
一株发酵乳糖不产气大肠埃希氏菌的分离与鉴定 被引量:1
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作者 刘腊兰 刘子音 +2 位作者 卓一鸣 彭纳 吴后吕 《湖南农业科学》 2023年第2期7-11,共5页
为了准确鉴定1株分离自餐饮具的大肠埃希氏菌非典型菌株(发酵乳糖不产气),通过传统分离培养、常规生化试验、微生物鉴定、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、多重聚合酶链式反应(multi-PCR)的方法对该菌株进行联合鉴定... 为了准确鉴定1株分离自餐饮具的大肠埃希氏菌非典型菌株(发酵乳糖不产气),通过传统分离培养、常规生化试验、微生物鉴定、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、多重聚合酶链式反应(multi-PCR)的方法对该菌株进行联合鉴定。结果表明:该菌株乳糖发酵试验及伊红美蓝琼脂(EMB)平板上的菌落形态均有别于典型大肠埃希氏菌,但微生物鉴定、MALDI-TOF MS、多重PCR鉴定结果与标准菌株一致,均显示为大肠埃希氏菌。这说明常规方法检验非典型大肠埃希氏菌有误判风险,建议检验者遇初发酵培养物变浑浊时转接EMB琼脂平板,并辅以微生物自动鉴定仪器或分子生物学方法对可疑菌落进行鉴定,以确保检验结果的准确性。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 多重聚合酶链式反应
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LRP15基因启动子区甲基化与其表达的关系 被引量:5
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作者 徐周敏 于力 +6 位作者 楼方定 卢学春 窦立平 杨龙 陈焱 吕鸣 崔杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期188-191,共4页
为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化... 为了研究LRP15基因启动子区的甲基化状况及其与基因表达的关系,探讨LRP15基因的甲基化调控机 制,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测LRP15基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-杂 氮-2'-脱氧胞嘧啶(CdR)及去乙酰化酶抑制刑曲古抑菌素(TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋白乙酰化,观察启动 子区CpG岛甲基化与基因表达的关系。结果显示:白血病细胞系K562中LRP15基因启动子区呈高甲基化状态, 并抑制了该基因的表达。单独应用或联合TSA应用CdR均可去除该基因启动子区的高甲基化状态.并诱导该基 因的表达。这表明LRP15基因的表达受到启动子区甲基化的调控;该基因在K562细胞系中不表达与其启动子区 高甲基化及组蛋白去乙酰化密切相关。结论:甲基转移酶抑制剂与去乙酰化酶抑制剂在白血病治疗中可能具有一 定的价值。 展开更多
关键词 LRP15基因 启动子 甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应
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结核杆菌含信号肽的Mtb8.4真核表达质粒的构建及鉴定 被引量:5
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作者 李晖 任小华 +1 位作者 钟森 任红 《实用预防医学》 CAS 2004年第6期1084-1086,共3页
目的 对结核杆菌新抗原—带信号肽的Mtb8.4(MS)进行基因克隆 ,构建其真核表达质粒并加以鉴定。 方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从结核分枝杆菌H 3 7Rv株基因组中扩增出带信号肽的Mtb8.4(MS)目的基因 ,经HindⅢ和EcoRⅠ消化后 ,与 pcDNA... 目的 对结核杆菌新抗原—带信号肽的Mtb8.4(MS)进行基因克隆 ,构建其真核表达质粒并加以鉴定。 方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从结核分枝杆菌H 3 7Rv株基因组中扩增出带信号肽的Mtb8.4(MS)目的基因 ,经HindⅢ和EcoRⅠ消化后 ,与 pcDNA3 .1(+ )载体进行连接重组。  结果 pcDNA3 .1(+ ) -MS真核表达质粒构建完成后 ,用限制性内切酶消化、PCR及DNA测序等多种方法进行鉴定 ,证实其构建成功。 结论 pcDNA3 .1(+ ) -MS真核表达质粒的成功构建 ,为进一步研究该质粒的免疫保护效果 ,了解信号肽序列在MS蛋白表达和分泌过程中所起的作用及制备相应的结核病DNA疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 ms pcr 基因克隆
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肺癌患者PTEN基因启动子高甲基化的检测 被引量:4
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作者 余宗涛 高琼 +2 位作者 吕军 张吉才 袁亚莉 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第8期855-858,共4页
目的探讨肺癌患者组织、外周血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子异常基因化状况及其在肺癌诊断中的价值。方法用甲基化特异性PCR方法检测组织、血浆及BALF中的PTEN基因启动子区CpG岛甲基化。结果45例... 目的探讨肺癌患者组织、外周血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子异常基因化状况及其在肺癌诊断中的价值。方法用甲基化特异性PCR方法检测组织、血浆及BALF中的PTEN基因启动子区CpG岛甲基化。结果45例肺癌患者中,PTEN基因启动子异常甲基化率组织为26.67%(12/45)、血浆为15.56%(7/45),BALF为22.22%(10/45);而非肺癌组织、正常对照血浆、非肺癌患者BALF中未检出甲基化;血浆、BALF中甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.01)。结论血浆、BALF中PTEN基因异常甲基化改变的检测在肺癌的早期特异诊断等方面有一定的价值。 展开更多
关键词 肺癌 CPG岛甲基化 甲基化特异性聚合酶链反应 张力蛋白同源的磷酸酶基因
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