UPLC-MS/MS法测定比格犬血浆中6-巯基嘌呤含量不确定度评定

目的评定用超高效液相质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定比格犬中血浆6-巯基嘌呤(6-MP)的不确定度。方法分析用UPLC-MS/MS测定比格犬血浆6-MP浓度中不确定度的来源并进行合成。结果比格犬血浆中6-MP低浓度(15 ng·mL^(-1))和高浓度(375 ng·mL^(-1))的扩展不确定度分别为1.04 ng·mL^(-1)和30.14 ng·mL^(-1)(P=95%,k=2)。结论UPLC-MS/MS法测定比格犬血浆中6-MP浓度的不确定度,在低浓度时主要由曲线拟合、回收率及基质效应引入,高浓度时主要来源于回收率、曲线拟合和生物样本配置。

12C^(6+)辐射对菊苣根黄酮类物质及抗氧化活性的影响

为探究12C^(6+)辐射对菊苣中黄酮类物质及抗氧化活性的影响,以菊苣根为试验材料,测定不同12C^(6+)辐射剂量下总黄酮含量及抗氧化活性。利用超高效液相色谱-电喷雾串联四级杆质谱仪(UPLC-ESI-MS/MS),对总黄酮含量显著增加的20、40 Gy辐射组与对照组中黄酮类物质进行靶向代谢组学分析。结果表明,10~40 Gy12C^(6+)辐射均提高了菊苣根总黄酮含量,其中20、40 Gy辐射组含量提升最显著;鉴定出5类11种黄酮类代谢物,橙皮素、氯化矢车菊素-3-O-芸香糖苷是响应12C^(6+)辐射致菊苣根总黄酮含量升高的关键差异代谢物,12C^(6+)辐射影响了紫云英苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、木犀草素和橙皮素的合成。类黄酮生物合成途径(ko00941)、黄酮和黄酮醇的生物合成途径(ko00944)富集显著。20、40 Gy剂量辐射提高了菊苣根黄酮提取液的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS+)自由基清除能力及铁离子还原能力(FRAP),显著增强了其抗氧化活性。综上,20、40 Gy剂量的12C^(6+)辐射能提高菊苣根中总黄酮含量,改变菊苣根中黄酮类物质种类及含量,并增强其抗氧化活性。本研究结果为进一步研究菊苣辐射诱变育种提供了理论依据。

液相色谱-串联质谱法测定豆芽中6 -苄基腺嘌呤 残留量的不确定度

评定液相色谱-串联质谱法检测豆芽中6-苄基腺嘌呤残留量的不确定度,建立不确定度数学评估模型。通过对测量过程中的不确定来源进行分析,计算出不确定度分量、相对合成不确定度,得出不确定度报告。结果表明,影响测定结果不确定度的主要因素有标准溶液的配制和拟合标准曲线求得样品浓度,以及前处理及标准品储备液、混合标准中间液的配置,还有仪器本身带来的不确定度。在实际检测过程中,控制标准溶液的配置过程,增加标准曲线的测定次数,对仪器进行定期校准,提高仪器的稳定性和灵敏度,使检测结果更加可靠。

基于HPLC-Q-Exactive-MS技术的蒙药壮西六味散化学成分解析

目的 基于高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)对壮西六味散化学成分进行快速分析和鉴定。方法 采用Shim-pack GIST C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.35 mL/min,柱温为35℃,进样量为10μL,质谱采用电喷雾离子源,正、负离子扫描,扫描范围为m/z 110~1 200。结果 结合质谱数据和文献信息,在壮西六味散中鉴别出65个成分,包括16个生物碱类成分、11个黄酮类成分、14个有机酸类成分、6个色酮类成分、7个倍半萜类成分、4个脂肪酸类成分、3个氨基酸类成分、2个鞣质类成分、1个酚酸类成分、1个苯丙素类成分。结论 HPLC-Q-Exactive-MS法能快速鉴别壮西六味散中的化学成分,为壮西六味散的药效物质研究奠定基础。

气相色谱-串联质谱法测定尼龙6树脂及其成型品中己内酰胺残留量

提出了气相色谱-串联质谱法测定尼龙6树脂及其成型品中己内酰胺残留量的方法。样品经冷冻研磨仪粉碎后用甲醇超声提取,吹氮浓缩至1.0 mL后通过DB-WAX色谱柱分离,串联质谱测定。己内酰胺的质量浓度在0.005~5.0 mg·L^(-1)范围内与其峰面积呈线性范关系;方法的检出限(3S/N)为0.002 mg·kg^(-1)。在空白样品的基体中加入3个浓度水平的己内酰胺标准溶液做回收试验,测得回收率的平均值为88.8%~101%,测定值的相对标准偏差(n=6)为3.2%~7.0%。

GC-MS法测定蔬菜中3,5,6-三氯-2羟基吡啶

建立蔬菜中毒死蜱代谢物3,5,6-三氯-2羟基吡啶(3,5,6-trichloro-2-pyridinol,TCP)的气相色谱-质谱检测方法。样品经丙酮提取,正己烷去除杂质,二氯甲烷反萃取,过无水硫酸钠去除水分,浓缩后乙酸乙酯溶解,再用N-(特丁基二甲基硅烷基)-N-甲基三氟乙酰胺(MTBSTFA)衍生,正己烷定容,经气相色谱-质谱检测,外标法定量。方法的检出限为8.3μg/kg,加标回收率为70.4%～107.6%,RSD为4.3%～8.7%。在5～500μg/L的范围内线性范围良好,相关系数大于0.99。该方法通用性强,灵敏度高,可用于蔬菜中TCP的检测。

顶空固相微萃取联合气相色谱-质谱检测葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚

利用响应面法优化采用顶空固相微萃取联合气相色谱-质谱技术检测葡萄酒中2,4,6-三氯苯甲醚(2,4,6-trichloroanisole,TCA)。对萃取头进行了选择,并优化固相微萃取参数:样品体积、萃取温度、平衡时间和萃取时间等对TCA萃取效果的影响。结果表明,用聚二甲基硅氧烷/二乙烯基苯(65 μm)萃取头进行TCA萃取的最佳条件:样品9.8 mL、2 g NaCl、33℃平衡10 min、萃取90 min进行气相色谱-质谱分析,以TCA-d_5为内标物进行定量。该方法的相关系数R^2为0.999 9,重复性的相对标准偏差为1.03%,加标回收率范围在95.7%~106.1%之间,检出限和定量限分别为0.3 ng/L和1 ng/L。检测7种市售葡萄酒产品的TCA含量在0~7.6 ng/L之间,干白葡萄酒中TCA含量低于干红葡萄酒。该方法操作简单、可靠,适用于葡萄酒中TCA的测定。

超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法测定血液与尿液中赛拉嗪及代谢产物2,6-二甲基苯胺

建立了一种超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱同时测定血液和尿液中赛拉嗪及2,6-二甲基苯胺的分析方法。样品经乙酸乙酯-正己烷（1∶1,体积比）提取,C18色谱柱分离,电喷雾正电离条件下进行全离子扫描模式检测。借助分析软件,通过对化合物离子精确质荷比、同位素轮廓丰度、特征二级质谱以及保留时间的比对,对目标物进行验证。方法的回收率为72.5%～87.8%,相对标准偏差为6.8%～9.7%。赛拉嗪在血液和尿液中的检出限分别为0.2,0.1μg/L,定量下限分别为0.6,0.3μg/L;2,6-二甲基苯胺在血液和尿液中的检出限分别为0.5,0.3μg/L,定量下限分别为1.5,1.0μg/L。方法快速、灵敏度高、重现性好,适用于中毒人体的血液和尿液中赛拉嗪及2,6-二甲基苯胺的检测。

超高效液相色谱-串联质谱法测定6-巯基嘌呤血浆药物浓度方法的建立与评价

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测人血浆中6-巯基嘌呤(6-MP)的浓度,为临床制定个体化给药方案提供基础。方法使用Waters公司超高效液相色谱(I-Class)-质谱(TQ-S)联用仪,以Waters ACQUITY BEH HILIC(2.1 mm×50 mm,1.7μm)为色谱柱,pH 3.0,0.02 mol/L醋酸铵缓冲液(含0.3%HCOOH)-乙腈(20∶80)为流动相,流速0.4mL/min,以6-硫鸟嘌呤(6-TG)为内标,乙腈沉淀蛋白,取4μL上清液进样分析。采用电喷雾离子源,以多反应监测方式进行正离子扫描,用于定量分析的离子对分别为m/z153.03→119.1(6-MP)和m/z 168.06→134.13(6-TG)。结果 6-MP血浆浓度在0.5~2 000ng/mL内线性关系良好(r=0.998 9),定量下限为0.125ng/mL。日内、日间RSD<6%,方法回收率89%~104%(RSD<6%),提取回收率>95%(RSD<8%)。血浆中6-MP在室温避光保存6h,冻融3次和-20℃保存15d的RSD分别为<4.66%、4.74%和5.11%。结论该方法操作简单、快速、灵敏度高、稳定性强,适用于血浆中6-MP药物浓度监测。

豆芽中6-苄基腺嘌呤残留测量的不确定度评定

应用固相萃取-高效液相-串联质谱(SPE-HPLC-MS/MS)建立6-苄基腺嘌呤(6-BA)在豆芽中残留的检测方法,并根据所建立的数学模型评定该方法测量不确定度的各分量。样品用0.1%乙酸乙腈提取,经Oasis MCX固相小柱净化,液相色谱-串联质谱测定,外标法定量。结果显示,豆芽样品中6-BA的含量为0.160 mg/kg时,其扩展不确定度为0.011 mg/kg(k=2),测定结果的表示式为(0.160±0.011)%,k=2。结果表明,测定结果的不确定度主要来源于回收率、标准溶液的配制及采用最小二乘法拟合标准工作曲线求得样品浓度过程。

甘松对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及成分分析

目的通过比较甘松不同提取物对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,筛选活性部位并进行成分分析。方法采用体外细胞培养法,建立6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞帕金森模型。MTT法检测甘松不同提取部位对6-OHDA诱导损伤的SH-SY5Y细胞活力的影响,计算抑制率;进一步观察细胞形态明确活性提取部位对细胞生长的影响。采用GC-MS技术对该部位进行化学成分分析。结果甘松石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及乙醇部位均能抑制6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞损伤,提高细胞存活率,其中石油醚部位的保护作用最强,从该部位中分离鉴定出22个成分,主要为倍半萜类化合物。结论甘松不同提取部位对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤均有一定保护作用,其中石油醚部位活性较强,主要成分为倍半萜类化合物。

6-烷氧基乙氧/硫基-6-氧/硫-双苯并[1,3,2]-二氧磷杂八环的合成与波谱特征

通过双(3,5-二氯-2-羟基-苯基)甲烷(1)分别与POCl3或PSCl3在三乙胺存在下关环,再与单烷氧基乙醇钠作用,得到了新化合物5或6;以1与P4S10及三乙胺关环的产物4与烷氧基溴乙烷反应得到了7.测试了5,6和7的1H,13C和31PNMR及MS数据,并讨论了其特征.观察到了磷与C1H(C11H)或C3H(C9H)与P的5JPH偶合常数(约为0.9Hz).在1与POCl3关环产物与单甲氧基乙醇反应的产物中,分离到了一个副产物8并确定了它的化学结构.1与POCl3按3∶2的物质的量比在三乙胺存在下反应,得到收率75%的8.

MS-302三道测量分析系统的应用及HI-6在离体膈神经-膈肌上抗梭曼的作用机制探讨

目的探讨抗神经毒化合物HI-6在离体膈神经-膈肌上抗梭曼的作用机制。方法采用MS-302三道测量分析系统,观察大鼠离体膈神经-膈肌的收缩功能,同时,测定膈肌乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,观察药物对膈肌AChE活性的直接影响。结果(1)采用MS-302三道测量分析系统对膈神经-膈肌标本强直收缩曲线下的面积进行测量,较为直接地反映了膈神经-膈肌标本的生理功能,结果精确。(2)HI-6 10和100μmol/L对正常膈神经-膈肌收缩功能影响不明显,1 mmol/L对正常膈神经-膈肌收缩功能有抑制作用。HI-6 10μmol/L预防和治疗给药时,对梭曼抑制的标本收缩功能既没有保护作用也没有拮抗作用;100μmol/L给药有一定的保护和拮抗作用;剂量增加到1 mmol/L时,保护作用和拮抗作用都明显增强,且保护作用在30 min内最佳。(3)预先给予HI-6不能减弱梭曼对大鼠离体膈肌AChE的抑制,梭曼中毒后给予HI-6对梭曼抑制的膈肌AChE活性无显著影响。结论HI-6对梭曼抑制的离体膈神经-膈肌收缩功能的恢复可能是直接生理对抗作用,在本实验条件下未见膈肌酶活力有明显的恢复。

2,4-二甲基-6-叔丁基苯酚中杂质成分的分离与检测

通过气质联用方法,对2,4-二甲基-6-叔丁基苯酚中的杂质进行分离和检测,经过库检索和人工解析发现:杂质主要包括2,4-二甲基苯酚、1-(叔丁基硫)-4-甲基苯、2-叔丁基-(邻、间、对)-甲基苯酚、2-叔丁基-5-甲基苯甲醚等4种化合物。

UPLC-MS/MS法检测禾谷镰刀菌中6-磷酸海藻糖和海藻糖的色谱柱选择

选择6-磷酸海藻糖(T6P)和海藻糖(Tre)在超高效液相色谱UPLC分离中的最佳色谱柱。对T6P和Tre在C_(18)柱、Kinetex Hilic柱、T3柱、Luna■NH2柱、Cogent diamond Hydride柱和BEH Amide柱6种色谱柱中的色谱行为进行对比研究。结果表明,T6P和Tre在Luna■NH2柱和T3柱中分离效果较好,分别建立Luna■NH2柱和T3柱的UPLC-MS/MS检测方法,其检出限分别为1.25~5.10μg/L和12.75~15.62μg/L,定量限分别为3.75~15.60μg/L和38.25~52.03μg/L,回收率分别为71.5%~85.7%和82.8%~95.6%,相对标准差分别为3.8%~8.5%和2.7%~3.3%,Luna■NH2柱的灵敏度高,T3色谱柱的回收率高、稳定性好。2种色谱柱均满足禾谷镰刀菌中T6P和Tre同时检测的要求。

MALDI-TOF MS对难溶聚芳酰胺PA6T的分析表征

选用五种样品试剂三氟乙酸、四氢呋喃、甲酸、乙腈、60%乙腈/5%三氟乙酸和两种不同的制样方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)表征难溶性聚合物聚对苯二甲酸己二酰胺(PA6T)的结构和分子量。发现以60%乙腈/5%三氟乙酸为样品试剂所得谱图的分子质量范围和信噪比最大,且溶剂法一步点样优于无溶剂法制样。获得了离子液体中合成产物PA6T的链结构,表明其主链为线性,未发现环状聚合物的存在,存在三种端基结构聚合体:两端均为氨基或羧基、或一端为氨基另一端为羧基。采用MALDI-TOFMS和SEC两种方法对比测量了PA6T的平均分子量和分子量分布指数,表明MALDI-OF MS测得的平均分子量低于SEC法,分子量分布指数也低于SEC法,这是由于MS处理数据时忽略了低分子量部分,且高分子量部分因难以离子化而无法得到引起的。对于难溶的聚芳酰胺类聚合物的结构和分子量及其分布表征,MALDI-TOF MS仍不失为一个好方法。

LC-MS/MS法测定裸鼠肝脏中6'-羟基爵床定A的浓度

目的建立测定裸鼠肝组织中6'-羟基爵床定A浓度的LC-MS/MS法,并用于裸鼠的组织分布研究。方法色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18柱;流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速0.5 ml.min-1,柱温为室温。采用ESI源,以多反应监测方式分别监测离子对m/z 410.8→136.9(6'-羟基爵床定A)和m/z 386.1→122.0(内标丁螺环酮)。肝组织匀浆后采用蛋白沉淀法进行预处理。结果 6'-羟基爵床定A在裸鼠肝组织中的线性范围为1.0～2000ng.ml-1,日内精密度RSD小于8.61%;日间精密度RSD小于8.15%,回收率在89.3%～98.3%范围内。结论该方法简单、灵敏、准确,适用于裸鼠肝组织中6'-羟基爵床定A的浓度测定及其组织分布研究。

绿色木霉LTR-2的ATMT插入突变及5,6-二氢-6-戊基-2H-吡喃-2-酮高产菌株的筛选

通过土壤杆菌介导的T-DNA转化方法,利用土壤杆菌菌株携带的Ti质粒,对绿色木霉LTR-2进行插入突变,获得木霉LTR-2突变体共400株。以串珠镰孢菌为指示菌,采用抑菌圈方法,从中筛选吡喃酮高产突变体6株,PCR和探针杂交证实,T-DNA序列已经插入到木霉LTR-2基因组。经GC-MS分析发现,其中一株突变体T-54在PDA培养基上产生的吡喃酮含量较高,在分生孢子中的含量达到了2.62 mg/g,比出发菌株提高9倍。

尿中O6-乙酰吗啡的膜式固相萃取及GC/MS/SIM测定

建立尿中O6-乙酰吗啡的膜式固相萃取(disk SPE)以及GC/MS/SIM定量测定的方法.用SPEC.C18AR/MP3固相萃取柱萃取,以含2%(v/v)氨水的氯仿:丙醇(4:1)为洗脱液,对尿中的O6-乙酰吗啡进行提取.经BSTFA衍生化后再用GC/MS/SIM测定,O6-乙酰吗啡检出限可达0.004μg/mL;同一根萃取柱连续使用7次,没有出现堵塞和污染,回收率及RSD未见下降;用所建立的diskSPE方法对嫌疑尿样进行分析,与液-液萃取的结论一致.该方法适合于法医毒物分析.

不同产地鲜姜乙醇浸提物化学成分分析及6-姜酚含量的测定

[目的]分析比较不同产地鲜姜乙醇浸提物的化学成分并定量测定鲜姜中6-姜酚的含量。[方法]采用GC-MS分析不同产地鲜姜乙醇浸提物中的化学成分,采用HPLC法测定鲜姜中6-姜酚的含量。[结果]5个不同产地的鲜姜乙醇浸提物中分别鉴定出39、44、45、49、44种化合物,其主要成分为姜酚、姜烯酚类、姜酮酚类及姜油酮类等;由于产地不同,各产地鲜姜的乙醇浸提物组成成分及相对含量存在较大差异。姜酚类化合物在鲜姜中含量相对较高,约占总挥发油的30%左右。采用HPLC法测定鲜姜中6-姜酚的含量,结果显示,6-姜酚在0.024 8～0.124 mg/ml浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.996 6,n=5),平均加样回收率为99.20%,RSD为1.26%。[结论]GC-MS法能快速、简便、高效的检测鲜姜乙醇浸提物的化学成分,HPLC测定法简便可靠、重复性好,可用于鲜姜中6-姜酚的含量测定。