模拟机与机组现场联合实战演练(MS-T)培训课程的开发与改进

本文从描述“模拟机与机组现场联合实战演练(以下简称 MS-T)”课程的开发背景和目的出发,重点阐述了该课程的组织方式和特点,并概括性地总结了该课程开设以来所起的作用及其开发效果。

基于P&T-GC/MS指纹图谱技术的烟用香精质量控制评价方法

利用P&T-GC/MS指纹图谱技术,结合夹角余弦相似度、峰匹配及多元T^(2)控制图,对烟用香精的质量稳定性进行综合评价,结果表明:P&T最优的前处理条件为吹扫时间14 min,吹扫温度40℃,解析温度200℃,在该条件下测得烟用香精中各挥发性成分特征色谱峰的RSD为1.36%~6.98%,说明该方法精密度良好;指纹图谱结合夹角余弦相似度、峰匹配分析及多元T^(2)控制图,可快速识别组分发生变化的烟用香精样品,及时发现样品的错混、质量浓度改变等问题,有效监控烟用香精的质量稳定性,并有助于进一步分析化学组分发生变化的根本原因。

应用于原代T细胞酪氨酸磷酸化蛋白质组的高灵敏度分析方法

酪氨酸磷酸化在T细胞的信号转导过程中发挥着重要的作用,然而其丰度较低,鉴定困难。生物组织样本中分离获得的原代T细胞数量较少,培养和扩增的难度较大,因而常使用永生化细胞系来研究T细胞的酪氨酸磷酸化介导的信号转导过程,这通常会导致获得与原代T细胞相差较大的结论。因此,本研究发展了一种解析原代T细胞酪氨酸磷酸化修饰信号的高灵敏度的蛋白质组学方法。首先,针对原代T细胞数量有限的问题,本研究优化了一套从小鼠脾脏中分离、活化和扩增T细胞的完整流程,第4天时T细胞数量扩增到7倍以上;其次,针对酪氨酸磷酸化修饰丰度较低、不易被质谱检测的难题,本研究利用SH2超亲体(SH2-superbinder)亲和富集和固定化钛离子亲和色谱(Ti^(4+)-IMAC)技术对抗CD3和抗CD28单克隆抗体共刺激条件下的原代T细胞多肽样品进行了酪氨酸磷酸化多肽富集,并结合纳升液相色谱-串联质谱(nanoLC-MS/MS)进行解析。最终成功从1 mg蛋白质中鉴定到282个酪氨酸磷酸化位点,其中包含T细胞受体膜蛋白CD3胞内区的免疫受体酪氨酸激活序列(ITAM)上的多个酪氨酸磷酸化位点,以及信号转导相关蛋白ZAP70、LAT、VAV1等的重要位点信息。综上,本研究发展了一套深度解析原代T细胞中的酪氨酸磷酸化修饰的高灵敏度蛋白质组学分析流程,有望应用于绘制更接近生理状态下的信号转导网络。

电子制冷型冷阱预浓缩测定大气挥发性有机物的实验室方法研究

通过对电子制冷预浓缩捕集管温度、采样流量、脱水管温度等条件的优化,建立罐采样-电子制冷型冷阱预浓缩/GC-MS同时测定大气中101种挥发性有机物(VOCs)的实验室分析方法。评估优化后的方法性能:101种VOCs组分平均相对响应因子≤14.3%,相关系数>0.995,方法检出限为0.001~0.016 nmol/mol,近90%的组分实际样品加标回收率在76.1%~105%之间,低、中、高浓度测定结果的相对标准偏差(RSD)分别为1.1%~20.7%、0.1%~13.3%、0.2%~5.3%,加湿标气测定结果的相对误差在±10%内。用电子制冷型预浓缩和深冷型预浓缩仪分别测定同一批样品,配对样品t检验的结果显示,两种方法测定结果没有显著性差异。

吹扫捕集/气相色谱-质谱法测定水中34种挥发性有机物的研究

本研究建立了吹扫捕集/气相色谱-质谱法测定水中挥发性有机物(VOCs)的方法,该方法能够同时测定包括乙醛、丙烯醛、丙烯腈、松节油、吡啶等《地表水环境质量标准》中的难点项目及新污染物名录中的萘、1,2-二氯丙烷等34种VOCs。方法检出限为0.4~2.9μg/L,相对标准偏差为1.6%~9.4%,加标回收率为83.9%~114%。该方法具有精密度高、准确性好、操作简便、适用范围广等优点,大大提高了检测效率,为环境水质检测提供参考。

农产品与饲料中T-2毒素免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱检测技术研究

利用T-2毒素单克隆抗体2G7和CNBr活化的Sepharose 4B研制出T-2免疫亲和柱，考察了T-2免疫亲和柱的最佳应用条件。利用免疫亲和柱，建立了农产品与饲料中T-2毒素免疫亲和柱净化/液相色谱-串联质谱（ IAC/LC-MS/MS）确证性检测技术，并考察该方法的准确度和精密度。结果表明，T-2毒素在0.5-500.0 ng/g范围内线性关系良好，相关系数为0.9997，检出限为0.05 ng/g，定量下限为0.17 ng/g。大米、玉米、饲料样品在T-2毒素10，50，100 ng/g的加标水平下，回收率为92.9％-109.7％，相对标准偏差为2.1％-8.3％。对市售36份农产品与饲料样品进行测定，检测结果的相对标准偏差均小于10.0％。

吹扫捕集气相色谱质谱法测定土壤中挥发性有机物

建立了吹扫捕集气相色谱质谱法同时测定土壤中卤代烃类、苯系物类、氯代苯类等二十多种挥发性有机物。使用模拟土壤和实际土壤样品优化了吹扫时间、吹扫温度等参数；采用内标法绘制了校正曲线，各目标化合物5个浓度水平的响应因子的相对标准偏差均小于20％，相关系数均大于0．999；测定了方法检出限，采用2g土壤，各目标化舍物方法检出限界于0．02～1．00μg／kg；对两种总有机碳含量的实际土壤样品进行了加标回收实验，回收率范围64％-123％。

玉米T型细胞质雄性不育系与相应保持系线粒体蛋白质组中的差异蛋白

利用固相pH3-10梯度双向凝胶电泳,对玉米T型细胞质雄性不育系(T-CMS)及其相应保持系叶片(苗期、拔节期、孕穗期),胚轴,胚根和花药(花粉母细胞减数分裂期、花粉粒小孢子单一双核期)线粒体蛋白质组中的差异蛋白进行分析。PDQuest 2D图像软件分析表明,苗期和拔节期叶片约有150个蛋白质斑点,胚轴和胚根中可识别出150个线粒体蛋白质斑点,花药中约有100个斑点。利用MALDI-TOF-MS方法,运用MASCOT软件于NCBI进行数据查询,对T-CMS与相应保持系中存在的差异蛋白进行归属鉴定,在T-CMS中存在,保持系中缺失的线粒体蛋白质有:r40c1 protein(胚轴中),mature anther-specific protein,DNA-directed RNA polymerase 23kD subunit,hex- okinaseⅡ和T-CMS中缺失而在保持系中存在的有:glutathione S-transferase,putative protein。其中T-CMS与相应保持系间,线粒体蛋白质组呈现出差异的组织有胚轴、胚根和小孢子单-双核期的花药。叶片的不同发育时期线粒体蛋白质组呈现明显变化,但T-CMS与保持系间没有差异。在小孢子单-双核期(花粉败育期)的花药中,T-CMS与保持系间线粒体蛋白质组出现明显差异,线粒体蛋白质组出现变异的时期与花粉败育时期相一致。

GC-O-MS法鉴定黑巧克力中关键香气物质

采用同时蒸馏萃取法(SDE)和吹扫捕集法(P&T)对醇浓黑巧克力中挥发性物质进行提取。利用气相色谱-嗅闻-质谱联用的方法对其中的挥发性性物质定性分析,共鉴定出52种物质,包括醛类、烯醛类、吡嗪类、醇类、酯类、酮类、呋喃类、酸类等物质,其中吡嗪类物质的种类最多,其次为醛类物质。通过香气提取物稀释分析(AEDA)和动态顶空稀释分析(DHDA),确定关键的香气物质(log3FD≥4/FD值≥125)共有10种,分别为醛4种(2-甲基丙醛、3-甲基丁醛、2-甲基丁醛、苯乙醛),吡嗪4种(乙基吡嗪、2,3-二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪),酯1种(苯甲酸异戊酯),吡咯1种(2-乙酰基-1-吡咯啉)。其中巧克力香气特征主要表现为黑巧克力香、爆米花味、烤香、水果香、咖啡香、坚果香等。

吹扫捕集/气相色谱/质谱法测定水体中54种常见挥发性有机物的研究

运用吹扫捕集/气相色谱/质谱(P&T/GC/MS)法对水体中54种常见的挥发性有机物(VOCs)进行了测定。结果表明,VOCs的色谱分离情况较好,平均加标回收率为88.5%～117.0%,相对标准偏差为0.71%～8.50%,准确度和精密度均符合有关分析测试的要求;方法检出限为0.10～0.61μg/L,远低于《地表水环境质量标准》(GB3838—2002)、《生活饮用水卫生标准》(GB3838—2002)及国外相关标准的限值;54种VOCs的线性范围不同,低沸点的VOCs线性范围较宽,高沸点的VOCs的线性范围较窄,因此在分析VOCs样品配制标准工作曲线时,应注意不同沸点VOCs的线性范围。

气相色谱-质谱法和模式识别技术用于雷公藤和昆明山海棠的分类鉴定

在样品色谱分离较完全的条件下,依据一定原则,将样品的成分质谱叠加,形成总质谱。用总质谱表征每一样本,并以总质谱的质量信道编码作指标。经Shannon信息理论特征选取,采用模式识别方法对雷公藤去皮根和根皮进行了分类,并对同属植物昆明山海棠作了定性预报。模式识别方法是SIMCA和LDA法,总预示率均为100.0%。结果表明:雷公藤去皮根心和根皮差异明显,可分为两类;昆明山海棠和雷公藤亲缘关系密切,被划为同类。本法灵敏、快速,不仅为联用技术中信息的综合应用,而且为从化学本质上研究中药质量提供了依据。

紫丁香挥发油的化学成分研究

目的分析比较紫丁香果和紫丁香叶挥发油的化学成分。方法采用水蒸气蒸馏的方法提取挥发油,利用毛细管气相色谱-质谱(GC-MS)和化学计量学以及双柱色谱保留指数(HP-5MS和DB-35MS)的方法对各个色谱峰定性,并用色谱峰面积归一法和直观式推导演进特征投影法(HELP)法获得各化合物的质量分数。结果共鉴定出119种化合物,从紫丁香果和紫丁香叶挥发油中分别鉴定出81和77种化合物,其中共有化合物38种。利用色谱峰面积归一法和HELP法分辨获得的纯色谱峰面积来对各个色谱峰定量,以HP-5MS柱为准,所鉴定的化合物分别占紫丁香果、叶挥发油总量的98.04%和78.82%。结论采用GC-MS和色谱保留指数相结合的方法,对黑龙江产紫丁香果与紫丁香叶挥发油的分析结果表明,辅以化学计量学方法和双柱色谱保留指数定性比单用GC-MS定性结果更加快速可靠,定量也更准确。

多发性硬化患者外周血CD4^＋CD25^＋ T细胞变化及其机制探讨

目的探讨多发性硬化(MS)患者外周血CD4+CD25+T细胞数量及叉头样转录因子(FOXP3)表达水平与MS病情的关系。方法选择温州地区MS患者44例(男12例、女32例),均按Poser诊断标准诊断,结合头颅MRI增强扫描排除合并其他神经系统和免疫系统疾病,并统一行EDSS评分;对照组43例(男13例、女30例)为健康查体者。具体方法:流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T细胞数量;免疫磁珠法分离CD4+CD25+T细胞;RT-PCR法检测CD4+CD25+T细胞FOXP3 mRNA表达并进行半定量分析。结果MS患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量与对照组比较无明显变化(P>0.05);活化的效应性T细胞数量增加(P<0.05)且活动期增加更为显著(P<0.01)。同一个体疾病活动期外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量较非活动期减少(P<0.05)。MS患者外周血中CD4+CD25+T细胞的FOXP3 mRNA表达降低(P<0.05),且活动期降低更明显(P<0.01)。结论此组MS患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞抑制活性降低,FOXP3 mRNA表达减少,活化的效应性T细胞数量增加,且与MS疾病活动性有关。

降香檀叶挥发油成分的研究

应用气相色谱 质谱 计算机联用技术分离鉴定了降香檀叶挥发油中 2 1个化合物 ,占总量的 77 71% ,其主成分是 2 甲氧基 4 乙烯基苯酚 (2 1 73% ) ,n 棕榈酸 (13 97% )和苯酚 (6 6 9% )。与降香 (心材 )挥发油组成明显不同。

南秦岭勉略构造带高压基性麻粒岩变质作用及其锆石U-Pb年龄

勉县-略阳地区是勉略蛇绿构造混杂岩带的代表区段,本文在勉县北部徐家坪地区确定了主要矿物为Grt+Cpx+Pl和具有典型"白眼圈"反应结构的两类高压基性麻粒岩,分别对其进行细致的岩相学研究,并利用THERMOCALC3.33程序进行P-T视剖面图计算。一类高压基性麻粒岩的峰期矿物组合为Grt1+Cpx+Pl1+Qz,对应温压条件为T=800～860℃,P=12.4～14.6kbar,晚期退变质矿物组合为Grt2+Hbl+Pl2+Qz。另一类是具有典型"白眼圈"反应结构的高压基性麻粒岩,"白眼圈"结构中斜长石为富Na的钠-更长石,以此推断该高压基性麻粒岩早期矿物组合中含绿辉石,因此其变质峰期矿物组合可能为Grt1+Omp(?)+Qz或Grt1+Cpx(?)+Pl+Qz,对应温压条件分别为T=775～900℃,P>19.2kbar和T=750～850℃,P=16.5～19.8kbar;该岩石后期经历了以矿物组合Grt2+Opx+Hbl1+Pl1+Qz为代表的麻粒岩相及以Grt3+Hbl2+Pl2+Qz为代表的角闪岩相两期退变质作用。造成这两种高压基性麻粒岩峰期变质矿物组合及其温压条件存在差异的原因可能是岩石原始成分的不同。对高压基性麻粒岩及其中的浅色脉体分别进行了LA-ICP-MS锆石U-Pb年代学分析,得到高压基性麻粒岩214±11Ma的变质年龄及脉体215±5Ma的结晶时代,并结合锆石微量元素特征分析,认为214±11Ma的年龄值代表该高压基性麻粒岩角闪岩相的退变质时代,同时获得该高压基性麻粒岩原岩形成时代可能为477Ma。综合两件高压基性麻粒岩的P-T演化轨迹及变质时代,建立高压基性麻粒岩的P-T-t演化轨迹,据此反映秦岭造山带在印支期沿勉略构造带发生俯冲-碰撞造山过程。

人参皂苷Rd酸水解产物的RRLC-Q-TOFMS研究

利用高分离快速液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(RRLC-Q-TOF MS)联用技术对人参皂苷Rd酸水解产物进行了分析研究。通过化合物的保留时间、精确分子质量信息、串联质谱碎片信息,分析鉴定了7种Rd酸水解产物,分别为C-Y1、C-Y2、F2、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1和Rg5。串联质谱分析水解产物获得了原人参二醇苷元特征离子m/z459(20(S)-Rg3,20(R)-Rg3,F2),Δ20(21)或Δ20(22)位脱水原人参二醇型苷元特征离子m/z441(Rk1,Rg5),C-24、C-25位水合原人参二醇苷元特征离子m/z 477(C-Y1和C-Y2)。研究表明,人参皂苷Rd在酸性条件下发生化学转化,包括取代糖基的水解反应,Δ20(21)或Δ20(22)位脱水反应和C-24,C-25位水合加成反应。本实验可为研究人参在配位方面的化学物质基础提供方法参考。

多发性硬化患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞FOXP3 mRNA的表达及临床意义

目的探讨多发性硬化(MS)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量以及叉头样转录因子(FOXP3)表达水平及其临床意义。方法(1)按Poser诊断标准结合头颅MRI增强扫描,排除合并其他神经系统疾病和免疫系统疾病,选择临床确诊和临床可能的MS患者53例(男15例,女38例)。所有患者近期均未行特殊免疫治疗。以统一标准进行登记临床评价、扩展的残癌状态评分;以健康体检者作为对照组,共51例(男14例,女37例);(2)流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量的变化;(3)免疫磁珠分离出CD4+CD25+T细胞,RT-PCR法检测CD4+CD25+T细胞FOXP3 mRNA的表达,并进行半定量分析。结果(1)MS患者外周血中CD4+CD25high T细胞数量与正常组比较没有明显变化(P>0.05),但在活动期低于正常组,且差异有统计学意义(P<0.05);(2)同一个体在疾病活动期外周血中CD4+CD25 high T细胞数量较非活动期减少(P<0.05);(3)MS患者外周血中CD4+CD25+T细胞的FOXP3 mRNA表达降低(P<0.05),在活动期降低更明显(P<0.01)。结论(1)就总体而言MS患者外周血CD4+CD25 high T细胞数量变化不明显,但CD4+CD25 high T细胞抑制活性降低,FOXP3 mRNA表达减少且与MS疾病活动性有关;(2)就个体而言MS患者外周血中CD4+CD25 high T细胞数量与疾病的活动性有关。

气相色谱-质谱联用技术在饮用水源地挥发性有机特定项目中的应用

地表水环境质量标准(GB3838-2002)中规定的集中式生活饮用水地表水源地特定项目中有20多项属于挥发性有机污染物。研究用吹扫捕集气相色谱-质谱方法测定这些挥发性有机物特定项目,优化了色谱条件,采用内标法定量,增加了质量控制措施。实验结果表明,校准曲线线性良好,目标化合物加标回收率、检出限等指标均符合地表水环境质量标准的要求。

亚洲型和西方型多发性硬化多形式脑诱发电位的比较

目的:探讨亚洲型和西方型多发性硬化(multiplesclerosis,MS)多形式脑诱发电位的差异。方法:对19例亚洲型和24例西方型MS患者进行了视觉诱发电位(visualevokedresponse,VEP)、脑干听觉诱发电位(brain-stemauditorye-vokedpotential,BAEP)和躯体感觉诱发电位(somatosensoryevokedpo-tential,SEP)的综合研究,并对两者的临床特点进行了比较。结果:亚洲型多发性硬化发病年龄犤(35±12)岁犦明显高于西方型犤(27±11)岁犦(t=2.3378,P<0.05)。EDSS评分在亚洲型MS(5.3±2.3)也明显高于西方型(3.8±2.1)(t=2.2304,P<0.05)。亚洲型MS的VEP异常率(89%)显著高于西方型(54%)(χ2=4.7053,P<0.05),而BAEP异常率低(42%)显著低于西方型(71%)(χ2=70.4663,P<0.001)。结论:亚洲型和西方型是多发性硬化的两种不同的临床亚型。

H&T-GC-MS法快速测定苹果香气物质的优化研究

采用顶空捕集-气相色谱-质谱(H&T-GC-MS)法测定苹果中香气物质,通过对顶空捕集的平衡温度、平衡时间以及色谱柱的优化,优化结果为:顶空平衡温度50℃,平衡时间40 min,毛细管色谱柱Rtx-1(30 m×0. 25 mm×0.25μm)。试验结果显示,从泰安红富士中分离鉴定出49种香味物质,本方法简单、迅速,不添加有机溶剂,测定结果更真实地反映了其香气物质的组成,对其它水果也有一定的借鉴作用。