甘蓝型油菜隐性核不育两用系S45AB中与MS2Bnap基因同源片段的克隆及序列分析

以甘蓝型油菜隐性核不育两用系 S4 5 AB的可育株和不育株为材料 ,提取减数分裂期与单核期的花粉 m RNA,反转录合成 c DNA,并以其为模板扩增花粉特异基因 MS2 Bnap。结果减数分裂期能扩出产物 ,而单核期无任何产物。将减数分裂期的扩增产物克隆、测序。同源性分析表明 :在 S4 5 AB上克隆的 MS2 Bnap基因与 Gene Bank公布的拟南芥控制核育性基因 MS2和已报道的甘蓝型油菜的 MS2 Bnap基因的同源性分别为 88%和 99%。可育株 S4 5 B与不育株S4 5 A在 MS2 Bnap基因序列上有 4处碱基存在差异 ,其中 3处为同义突变 ,编码氨基酸未发生变化 :1处为错义突变 ,可育株为 AAA,不育株为 AGA。其三联体密码对应的氨基酸也发生了变化 ,AAA编码赖氨酸 ,AGA编码精氨酸。该变化可能与 S4 5

利用交错延伸剪接PCR技术扩增油菜花粉育性基因MS2 Bnap全长cDNA序列

交错延伸剪接PCR是一种用于分子进化研究的DNA改组技术。本实验利用其原理 ,将已获得的油菜花粉育性基因MS2Bnap有部分序列重叠的三段PCR产物作为模板进行扩增 ,获得了花粉育性基因MS2Bnap的全长cD NA序列。