Ms4a6d 基因敲除对雌性小鼠生育力的影响

目的探究巨噬细胞表面特异分子跨膜4域亚家族A成员6D(membrane-spanning 4-domains subfamily A member 6D,Ms4a6d)基因敲除对雌性小鼠生育力的影响。方法构建Ms4a6d基因敲除小鼠,以各周龄纯合Ms4a6d基因敲除(Ms4a6d^(-/-))小鼠为实验组;采用qPCR、琼脂糖凝胶法鉴定小鼠基因型;运用HE染色、免疫荧光、ELISA等方法检测血清抗缪勒管激素(anti-müllerian hormone,AMH)和雌性Ms4a6d^(-/-)小鼠卵巢中巨噬细胞数量及各级卵泡构成变化;通过生育力实验比较成年Ms4a6d^(-/-)雌鼠妊娠率及平均产仔数变化。结果与同周龄野生型(Ms4a6d+/+)雌鼠比较,2周龄和4周龄的Ms4a6d^(-/-)雌鼠卵巢组织中巨噬细胞显著减少(P<0.01);8周龄时2组卵巢巨噬细胞差异无统计学意义;8周龄Ms4a6d^(-/-)雌鼠卵巢系数显著降低(P<0.01);8周龄时卵巢组织中原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡数量显著减少(P<0.05),各年龄段Ms4a6d^(-/-)雌鼠血清中AMH显著降低(P<0.05)。成年Ms4a6d^(-/-)雌鼠的平均妊娠率为56%,每胎产仔数为(4.1±1.1)只,均显著低于同龄野生型雌鼠的妊娠率(89%)和每胎产仔数[(6.3±1.2)只]。结论Ms4a6d基因敲除导致青春期前雌鼠卵巢组织中巨噬细胞数量减少,抑制其生长卵泡发育,最终表现为成年雌鼠卵巢储备减少,生育力降低。

MS4A6D通过激活NLRP3炎性小体促进卡拉胶诱导的小鼠足垫肿胀

目的研究巨噬细胞特异性表达的4次跨膜蛋白MS4A6D(membrane-spanning 4-domain subfamily A(MS4A)superfamily protein 6D)对卡拉胶(carrageenan,CGN)诱导的小鼠足垫肿胀的影响及其可能的机制。方法以雄性SPF级野生型(WT)小鼠及各种基因敲除(Ms4a6d^(-/-)、Nlrp3^(-/-)、Casp-1^(-/-)及IlR1^(-/-))小鼠为研究对象,采用一次性足下注射100μl 1%CGN(w/v)+20μl CaCl_(2)(50 mmol/L)的方法建立小鼠足垫肿胀模型;对比观察WT及各基因敲除小鼠的足垫肿胀严重程度;利用H&E染色对足垫肉组织进行病理学分析并采用免疫荧光检测足垫组织中巨噬细胞的浸润情况;采用Western blot对比分析组织NLRP3、IL-1β及IL-18的蛋白表达水平。结果1)在1%CGN+CaCl_(2)(50 mmol/L)的联合注射可显著促进小鼠的足垫肿胀,然而Ms4a6d^(-/-)小鼠的足垫肿胀程度显著低于WT小鼠(P<0.05);2)H&E染色可见WT模型组小鼠足垫发生明显的组织损伤和炎症浸润,并伴有坏死病灶,而Ms4a6d^(-/-)小鼠的足垫其水肿程度减轻、炎症浸润显著减轻,CD68+巨噬细胞浸润明显减少;3)WT模型组足垫组织中成熟的Caspase-1酶及IL-1β的表达显著高于Ms4a6d^(-/-)组;4)与WT对照小鼠相比,卡拉胶诱导的Nlrp3^(-/-)、Casp-1^(-/-)及IlR1^(-/-)小鼠其足垫肿胀程度显著减轻(P<0.05)。结论MS4A6D通过促进巨噬细胞NLRP3炎性小体的激活并诱导IL-1β及炎症因子的释放而加剧CGN诱导的小鼠足垫肿胀,表明MS4A6D促进急性炎症进展。

跨膜4域亚家族成员6D基因敲除致雄性小鼠生育力降低实验研究

目的:探讨跨膜4域亚家族成员6D(Ms4a6d)基因敲除对雄性小鼠生育力的影响。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)鉴定小鼠基因型,将Ms4a6d^(-/-)雄鼠和野生型C57小鼠分别与同龄野生型雌鼠合笼交配,统计各组雌鼠怀孕产仔情况,收集睾丸组织,称重并计算器官指数,评估附睾尾精子数量、运动参数等变化情况,通过形态学分析和HE染色评估小鼠睾丸组织形态学变化,采用免疫荧光染色分析睾丸巨噬细胞变化。结果:Ms4a6d^(-/-)雄鼠子代数目显著低于WT雄鼠(P<0.05);Ms4a6d^(-/-)雄鼠睾丸体积及质量均减少(均P<0.05);Ms4a6d^(-/-)雄鼠附睾尾精子浓度下降(P<0.05),各项运动参数未见统计学差异(P>0.05);睾丸组织切片HE染色结果显示Ms4a6d^(-/-)雄鼠睾丸曲细精管直径及管腔厚度均明显减少,支持细胞、精原细胞、初级精母细胞及精子细胞均减少;免疫荧光结果显示Ms4a6d^(-/-)雄鼠睾丸巨噬细胞受到影响。结论:Ms4a6d基因敲除干扰了雄性小鼠睾丸的发育,并造成生精小管直径减少、厚度变薄,附睾尾部精子数量显著下降,从而使成年雄鼠的生育力显著下降。