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酶联免疫吸附试验间接抗体夹心检测SARS-CoV抗原方法的建立和应用 被引量:7
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作者 丘立文 汤汉文 +5 位作者 王亚娣 廖金娥 郝卫 温坤 何秀敏 车小燕 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期277-281,共5页
目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb)和多克隆抗体建立SARSCoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法用于SARSCoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARSCoVN蛋白免疫BALB/c小鼠和新... 目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb)和多克隆抗体建立SARSCoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法用于SARSCoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARSCoVN蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备mAb和多克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用单克隆抗体与兔多克隆抗体进行配对试验,建立抗原捕获抗体夹心ELISA法测定SARSCoVN抗原。结果获得9株特异性针对SARSCoVN蛋白的mAb和高效价的兔多克隆抗体,通过高亲和力的mAb与兔多抗的配对试验,筛选出3株单抗N1E8、N8E1和N10E4混合作为捕获抗体,与兔多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG组合作为测定抗体,建立了抗体夹心ELISA法,测定重组SARSCoVN蛋白最高灵敏度为50pg/ml,特异性达99.86%,测定420份血清学确诊的SARS患者血清,其中发病1-10天阳性检出率为90.1%,11-20天检出率为23%,21天以上均为阴性,与其他呼吸道病毒和冠状病毒无交叉反应。结论获得特异性好、亲和力高的单克隆抗体和高效价的兔多克隆抗体,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的SARSCoV抗原的ELISA捕捉法,可应用于SARS早期诊断、溯源及流行病学研究。 展开更多
关键词 免疫吸附试验(ELISA) 冠状病毒(SARS-coV) 夹心ELISA法 SARS-cOV感染 严重急性呼吸综合征 多克隆抗体 BALB/c小鼠 ELISA间接 ELISA捕捉法 单克隆抗体 原方 检测 捕获抗体 新西兰大白兔 辣根过氧化物 SARS患者 流行病学研究
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2型鸭疫里氏杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量:12
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作者 程龙飞 施少华 +4 位作者 傅光华 李文杨 彭春香 黄瑜 陈溥言 《福建农业学报》 CAS 2006年第2期131-134,共4页
以2型鸭疫里氏杆菌裂解物作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功地建立了检测鸭血清中2型鸭疫里氏杆菌抗体的间接EL1SA方法。经检测表明该方法特异性强,敏感性比常规的试管凝集试验高320倍。... 以2型鸭疫里氏杆菌裂解物作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗鸭IgG抗体为第二抗体,以TMB为显色剂,成功地建立了检测鸭血清中2型鸭疫里氏杆菌抗体的间接EL1SA方法。经检测表明该方法特异性强,敏感性比常规的试管凝集试验高320倍。以该方法对免疫2型鸭疫里氏杆菌灭活油乳剂疫苗的试验鸭进行抗体水平的跟踪测定,发现试验鸭于免疫后7d开始产生抗体,28d达到最高峰,然后开始下降,于免疫后56d其抗体水平仍高于免疫后14d的水平。 展开更多
关键词 2型鸭疫里氏杆菌 抗体检测 间接免疫吸附试验
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两种方法检测血清抗磷脂酶A2受体抗体在膜性肾病中的应用分析 被引量:5
3
作者 方玲 顾向明 +2 位作者 周泽红 林淼雄 齐晓云 《检验医学与临床》 CAS 2017年第15期2196-2198,共3页
目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测血清抗磷脂酶A2受体抗体(抗PLA2R抗体)在膜性肾病(MN)中的阳性率,分析两种方法在MN的诊断效能,为临床MN的诊治提供特异度更高的实验指标。方法选取该院肾内科就诊行肾病理活... 目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测血清抗磷脂酶A2受体抗体(抗PLA2R抗体)在膜性肾病(MN)中的阳性率,分析两种方法在MN的诊断效能,为临床MN的诊治提供特异度更高的实验指标。方法选取该院肾内科就诊行肾病理活检并确诊的MN患者31例,对照组50例包括该院住院自身免疫性疾病及肾病综合征、肾功能不全患者38例及健康体检者共12例,收集血清同时进行以上两种方法检测,分析两种方法在MN中的诊断效能,并分析其对MN的诊断一致性。结果 MN组中,ELISA法及IIF法检测结果均为阳性17例,两种方法分别显示阳性和阴性各1例,两种方法同时阴性12例,两种方法检测阳性率为58.06%(18/31);对照组50例均为阴性,阳性率为0.00%(0/50)。两种方法检测抗PLA2R抗体阳性率在MN组和对照组间比较,差异有统计学意义(χ~2=37.32,P<0.05)。两种方法诊断MN的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率指标依次为58.06%(18/31),100.00%(50/50),100.00%(18/18),79.37%(50/63),83.95%(68/81);两种方法单独检验与联合检验对MN的诊断性能比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA法在MN组及对照组中抗PLA2R抗体水平分别为45.42(2.00,760.40)及2.00(2.00,3.21)RU/mL,两组间抗体水平比较,差异有统计学意义(Z=-5.345,P<0.05)。结论 ELISA法及IIF法检测血清抗PLA2R抗体在MN诊断中具有较高的特异度与准确率,可作为MN诊断,尤其是特发性MN及无法行肾活检患者的必要和特异性血清学检测指标。 展开更多
关键词 肾小球肾炎 膜性肾病 抗磷脂A2受体抗体 免疫吸附试验 间接免疫荧光法
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猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测方法的建立与初步应用 被引量:3
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作者 史利军 张锦秀 +1 位作者 任林柱 李刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期162-165,共4页
本研究利用原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为标准抗原蛋白建立PCV2抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶160,最佳封闭试剂为10%牛血清,... 本研究利用原核表达的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为标准抗原蛋白建立PCV2抗体检测方法,同时对建立的检测方法的相关条件进行了优化。通过优化确定抗原的最佳包被浓度为10μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶160,最佳封闭试剂为10%牛血清,二抗的使用浓度为1∶1000,血清及二抗的最佳反应条件为37℃孵育60 min,底物的最佳反应条件为37℃反应10 min,cutoff值为0.25。通过批内及批间重复性的评价,变异系数均小于0.1,表明本检测方法具有较高的可重复性。与标准的检测试剂盒相比,检测临床样本时,本检测方法与对照试剂盒检测结果符合率为91.7%。结果表明,建立的检测方法可用于临床PCV2抗体的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 核衣壳蛋白 间接免疫吸附试验
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大鼠细小病毒VP2原核表达及间接ELISA方法建立 被引量:3
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作者 霍娜 姚威 +3 位作者 于婉琪 魏晓锋 萧飒 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第6期53-57,共5页
本研究以大鼠细小病毒(Rat parvovirus,RPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测RPV抗体的间接ELISA方法。通过比对分析大鼠细小病毒不同毒株的VP2蛋白序列,我们筛选出了RPV株VP2蛋白上长度为378 bp的特异性成熟肽序列,随后构建了pET30... 本研究以大鼠细小病毒(Rat parvovirus,RPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测RPV抗体的间接ELISA方法。通过比对分析大鼠细小病毒不同毒株的VP2蛋白序列,我们筛选出了RPV株VP2蛋白上长度为378 bp的特异性成熟肽序列,随后构建了pET30a原核表达体系,借助His标签对重组表达产物进行纯化,以纯化鉴定后的表达产物为抗原,免疫Balb/c小鼠制备多抗血清并建立检测大鼠细小病毒血清抗体的间接VP2-ELISA方法。结果显示,抗原包被质量浓度为0.28μg/mL,阳性判定标准初步定为OD450≥0.5,与H-1株和KRV株的阳性血清存在一定的交叉反应,批内试验变异系数小于10%。本研究建立的RPV VP2-iELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于大鼠细小病毒感染的血清抗体检测。 展开更多
关键词 大鼠细小病毒 VP2 原核表达 间接免疫吸附试验
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以重组无乳链球菌GapC1-150作抗原的牛血清抗体间接ELISA检测方法建立 被引量:3
6
作者 刘硕 王欣 +7 位作者 李皖豫 马骏 范钊伟 王然 段旭阳 周玉龙 朱战波 崔玉东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2020年第6期83-88,102,共7页
为了检测奶牛乳腺炎无乳链球菌GapC1-150抗原相关疫苗免疫血清抗体,我们用重组蛋白GapC1-150作为包被抗原建立了间接ELISA牛血清抗体检测方法。通过方阵法确定包被抗原浓度和血清稀释度;通过对阴性牛血清和免疫牛血清的OD450值检测分析... 为了检测奶牛乳腺炎无乳链球菌GapC1-150抗原相关疫苗免疫血清抗体,我们用重组蛋白GapC1-150作为包被抗原建立了间接ELISA牛血清抗体检测方法。通过方阵法确定包被抗原浓度和血清稀释度;通过对阴性牛血清和免疫牛血清的OD450值检测分析确定cut-off值;通过与多种抗原免疫血清和病原感染血清进行检测确定该方法具有良好的特异性;通过对阳性和阴性血清倍比稀释检测确定该检测方法灵敏性较好,并对临床收集的牛血清样本进行了检测。以上结果表明,所建立的间接ELISA检测方法可用于GapC1-150抗原相关疫苗免疫血清抗体检测。 展开更多
关键词 无乳链球菌 甘油醛-3-磷酸脱氢c 间接免疫吸附试验 奶牛
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An ELISA Based on a Truncated Soluble ORF2 Protein for the Detection of PCV2 Antibodies in Domestic Pigs 被引量:4
7
作者 Shuang-hui YIN Shun-li YANG Hong TIAN Jin-yan WU You-jun SHANG Xue-peng CAI Xiang-tao LIU 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期191-198,共8页
Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) is an important swine disease that is closely associated with porcine circovirus type 2 (PCV2). The capsid protein (Cap protein) is a major structural protein that has... Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) is an important swine disease that is closely associated with porcine circovirus type 2 (PCV2). The capsid protein (Cap protein) is a major structural protein that has at least three immunoreactive regions, and it can be a suitable candidate antigen for detecting the specific antibodies of a PCV2 infection. In the present study, an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (TcELISA) based on a truncated soluble Cap protein produced in Escherichia coli (E.coli) was established and validated for the diagnostic PCV2 antibodies in swine. The TcELISA was validated by comparison with an indirect immunofluorescence assay (IIFA). The diagnostic sensitivity (DSN), specificity (DSP), and accuracy of the TcELISA were 88.6%, 90.7% and 89.4%, respectively. The agreement rate was 89.38% between results obtained with TcELISA and IIFA on 113 field sera. A cross-reactivity assay showed that the method was PCV2-specific by comparison with other sera of viral disease. Therefore ,the TcELISA will be helpful for the development of a reliable serology diagnostic test for large scale detection of PCV2 antibodies and for the evaluation of vaccine against PCV2 in swine. 展开更多
关键词 PcV2 结构蛋白 抗体检测 检测法 可溶性 ELISA 间接免疫吸附试验 家猪
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抗组蛋白H_(2)A抗体间接ELISA法的建立和临床初步应用 被引量:1
8
作者 王海永 徐敏 李晓军 《临床检验杂志》 CAS 2021年第10期744-747,共4页
目的建立检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H_(2)A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方法RT-PCR扩增H_(2)A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H_(2)A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H_(2)A重组... 目的建立检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H_(2)A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方法RT-PCR扩增H_(2)A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H_(2)A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H_(2)A重组蛋白建立检测人血清中抗H_(2)A抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测50例RA患者和50例健康人对照组血清抗H_(2)A抗体水平。结果表达的H_(2)A蛋白相对分子量约为15000,与预期大小相符,western blot结果表明组蛋白H_(2)A与抗H_(2)A抗体阳性血清具有良好的反应原性。经方法学评估,建立的ELISA法在特异性、可重复性方面均达到检测要求。RA组抗H_(2)A抗体水平高于健康人对照组(P<0.01)。当cut-off值设为0.494时,RA患者血清抗H_(2)A抗体的阳性率为84%(42/50),明显高于健康人对照组20%(10/50),差异具有统计学意义(χ^(2)=41.026,P<0.01)。结论成功建立了检测血清抗H_(2)A抗体的间接ELISA技术。RA患者血清中抗H_(2)A抗体水平明显高于健康人对照组。抗H_(2)A抗体在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 组蛋白H_(2)A 抗H_(2)A抗体 间接免疫吸附试验
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上海市规模化猪场猪圆环病毒2型血清学调查 被引量:2
9
作者 薛霞 孙泉云 +3 位作者 沈悦 鞠龚讷 李凯航 齐新永 《动物医学进展》 CSCD 2006年第8期102-104,共3页
为了解和掌握上海市PCV-2的感染情况,2003年-2005年对上海市猪群PCV-2的感染情况进行了血清学调查。用间接酶联免疫吸附试验,对上海市9个规模化猪场的768份血样进行了PCV-2抗体检测。被检猪场均有PCV-2抗体阳性,而且在2005年有明显增加... 为了解和掌握上海市PCV-2的感染情况,2003年-2005年对上海市猪群PCV-2的感染情况进行了血清学调查。用间接酶联免疫吸附试验,对上海市9个规模化猪场的768份血样进行了PCV-2抗体检测。被检猪场均有PCV-2抗体阳性,而且在2005年有明显增加的趋势。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 血清学调查 间接免疫吸附试验
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四种方法检测抗线粒体抗体M2亚型性能比较 被引量:1
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作者 岳燕 王玥文 +7 位作者 白婕 杨本善 何小魁 张明珍 郑宇淼 李宜桐 金文 刘向祎 《标记免疫分析与临床》 CAS 2021年第5期853-857,共5页
目的探讨抗线粒体抗体M2亚型不同检测方法的分析性能、相关性及其对原发性胆汁性胆管炎的诊断价值。方法选择2010年至2019年于北京同仁医院就诊的原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者106例作为PBC组,同期其他自身免疫病组患者120例,100例体检... 目的探讨抗线粒体抗体M2亚型不同检测方法的分析性能、相关性及其对原发性胆汁性胆管炎的诊断价值。方法选择2010年至2019年于北京同仁医院就诊的原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者106例作为PBC组,同期其他自身免疫病组患者120例,100例体检健康人作为正常对照组。用免疫印迹、间接免疫荧光、酶联免疫吸附试验和胶体金4种方法分别测定三组的抗线粒体抗体M2亚型水平,比较不同方法的分析性能、相关性及诊断价值。结果灵敏度从高到低依次是酶联免疫吸附试验(96.2%,102/106)、免疫印迹(89.6%,95/106)、胶体金(87.7%,93/106)、间接免疫荧光法(73.6%,78/106)。特异性从高到低依次是间接免疫荧光(98.2%,216/220)、酶联免疫吸附试验(96.8%,213/220)、免疫印迹(87.7%,193/220)、胶体金法(85.5%,188/220)。免疫印迹与胶体金法之间检出率差异无统计学意义(P=0.736)。酶联免疫吸附试验与免疫印迹、酶联免疫吸附试验与间接免疫荧光、免疫印迹与胶体金法之间一致性较好(Kappa>0.75)。结论酶联免疫吸附试验是目前临床实验室检测抗线粒体抗体M2亚型的最佳方法。 展开更多
关键词 抗线粒体抗体M2亚型 胶体金法 免疫印迹法 间接免疫荧光法 免疫吸附试验
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新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体检测与分析 被引量:12
11
作者 张家瑞 阿丽亚·买买提依明 +6 位作者 屈勇刚 谷思颖 魏其 吴圆圆 李静 常军帅 李岩 《中国猪业》 2020年第4期43-46,共4页
为了解2.019年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体水平,本试验采用间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)法对采自5家规模化猪场不同日龄猪的338份血清样品进行猪圆环病毒2型抗体检测与分析。结果显示,猪圆环病毒2型抗体平均阳性率为70.71%(239/33... 为了解2.019年新疆部分地区猪圆环病毒2型抗体水平,本试验采用间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)法对采自5家规模化猪场不同日龄猪的338份血清样品进行猪圆环病毒2型抗体检测与分析。结果显示,猪圆环病毒2型抗体平均阳性率为70.71%(239/338),刚好达到国家规定标准(70%),平均S/P值为1.69,各猪场间猪圆环病毒2型抗体水平差异显著。各日龄段猪群抗体平均阳性率在26%~92%之间,存在一定差异。保育猪平均阳性率最低(26.56%),且低于国家规定标准(70%),只有经产母猪、后备猪和育肥猪的猪群抗体阳性率在70%以上。表明在新疆地区5个规模化化猪场中,有3个猪场的猪圆环病毒2型抗体阳性率未能达到国家标准(70%),需要制定更加合理的免疫程序;哺乳仔猪、保育猪和种公猪平均阳性率低于国家标准,需加强免疫防控。该结果在一定程度上可为新疆部分地区猪圆环病毒2型防疫工作提供一定的参考。 展开更多
关键词 圆环病毒2 抗体 间接免疫吸附试验
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新疆牛巴贝斯虫病的流行病学调查 被引量:4
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作者 简子健 马素贞 +3 位作者 孙其喆 沈炯玉 吕伟 苗中秋 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2129-2133,共5页
【目的】2006~2008年对全疆14个地州的牛巴贝斯虫病进行流行病学调查。【方法】使用已建立的牛巴贝斯虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-MSA-2作为抗原。【结果】(1)新疆存在着牛巴贝斯虫病。在2006年采集的278份牛血清样品中... 【目的】2006~2008年对全疆14个地州的牛巴贝斯虫病进行流行病学调查。【方法】使用已建立的牛巴贝斯虫病间接ELISA检测方法,以纯化的重组蛋白GST-MSA-2作为抗原。【结果】(1)新疆存在着牛巴贝斯虫病。在2006年采集的278份牛血清样品中,阳性血清7份,感染率为2.52%。在2007年的532份牛血清样品中检出阳性血清32份,感染率为3.13%。在2008年的530份牛血清中检出阳性血清43份,感染率为5.28%。(2)2008年在地方流行性疫病区牛巴贝斯虫感染率高达28%。(3)牛巴贝斯虫病所在的地州由2006年的5个扩大到2008年的11个。【结论】新疆牛巴贝斯虫病的感染率逐年上升,疫区面积不断扩大,流行区内感染率激增,牛巴贝斯虫病的防治不容忽视。这是新疆首次利用血清学方法对全疆牛巴贝斯虫病进行大规模的流行病学调查。 展开更多
关键词 牛巴贝斯虫 msa-2c间接酶联免疫吸附试验 流行病学调查 感染率
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河南油田新疆石油探区莱姆病流行病学调查 被引量:2
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作者 孙恒松 田桢 +5 位作者 耿震 侯学霞 郝琴 蒋毅 吕冰 万康林 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期209-211,共3页
目的查明河南油田所属新疆石油探区人群莱姆病感染与发病情况,为防治工作提供科学依据。方法采用普查方法进行流行病学调查,间接免疫荧光抗体法(IFAT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行血清抗莱姆病螺旋体抗体检测。根据流行病学资料、临... 目的查明河南油田所属新疆石油探区人群莱姆病感染与发病情况,为防治工作提供科学依据。方法采用普查方法进行流行病学调查,间接免疫荧光抗体法(IFAT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)进行血清抗莱姆病螺旋体抗体检测。根据流行病学资料、临床表现和血清学检查结果进行病例诊断。统计学分析采用χ2检验。结果分别进行了5次调查,共计7956人,检测到抗莱姆病螺旋体抗体(IgG/IgM)阳性者1037份,感染率为12.07%~14.07%,平均感染率为13.03%。不同职业人群中,莱姆病感染率以野外勘探开发组最高(16.36%),野外建设施工组次之(12.63%),后勤服务组最低(7.58%),3组间感染率差异有统计学意义(χ2=101.1,P<0.01)。感染者中年龄最小6岁,最大61岁,但不同年龄组感染率差异无统计学意义(χ2=7.1,P>0.1)。诊断为莱姆病者665例,患病率为8.36%。结论河南油田新疆石油探区人群存在莱姆病感染,并有莱姆病的发生和流行,应加强莱姆病的防治,以保护其健康。 展开更多
关键词 流行病学调查 河南油田 莱姆病 石油 新疆 免疫吸附试验 荧光抗体法 血清学检查 X^2检验 统计学分析 感染率 发病情况 科学依据 防治工作 抗体检测 间接免疫 临床表现 职业人群 勘探开发 建设施工 后勤服务 螺旋体
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抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用 被引量:2
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作者 丁壮 李佑民 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第2期11-16,共6页
用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法筛选,以有限稀释法克隆化,阳性率达100%,建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株杂交瘤细胞系。用ELISA检测培养上清及诱生... 用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法筛选,以有限稀释法克隆化,阳性率达100%,建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株杂交瘤细胞系。用ELISA检测培养上清及诱生的腹水的效价。培养上清效价为1D_8 1∶1280~×、5D_7 1∶640~×、4B_1 1∶320~×、2B_8 1∶320~×、1A_4 1∶640~×,腹水效价为1D_8 10^(-7)、5D_7 10^(-7)、4B_110^(-7)、2B_8 10^(-5)、1A_4 10^(-4)。用免疫双扩散试验结果,五株单抗中有一株属IgG类,四株属IgG类。将单抗提纯后用ELISA夹心间接法及间接免疫荧光试验(IFA)对6种冠状病毒进行了特异性鉴定,除猪流行腹泻病毒外,不与其它冠状病毒发生交叉反应。取效价高而稳定的1D_8、5D_7、4B_1细胞系单克隆抗体做IFA及直接ELISA试验初步证明该McAb具有敏感性高,特异性强的优点,可作为猪流行性腹泻病毒检测的一种新试剂。 展开更多
关键词 单克隆抗体 腹泻病毒 杂交瘤细胞株 免疫吸附试验(ELISA) 初步应用 BALB/c小鼠 间接免疫荧光试验 ELISA检测 培养上清 IGG类 冠状病毒 有限稀释法 免疫双扩散 特异性鉴定 流行性腹泻 抗原免疫 细胞融合 试验结果
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抗H9亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量:1
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作者 王凤强 姜北宇 +3 位作者 刘明泽 赵玉军 米丰全 刘剑 《中国动物保健》 2005年第8期27-29,共3页
利用纯化的H9N2亚型禽流感尿囊液病毒免疫原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法检测培养上清是否对H5N1亚型AIV及NDV反应,筛选只针对H9N2亚型AIV的阳性细胞株,经克隆获得1株较高... 利用纯化的H9N2亚型禽流感尿囊液病毒免疫原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法检测培养上清是否对H5N1亚型AIV及NDV反应,筛选只针对H9N2亚型AIV的阳性细胞株,经克隆获得1株较高亲和力的杂交瘤细胞株,命名为4E7,用其制备的腹水ELISA效价达到2×105,Western-blotting证明单抗4E7经鉴定为针对75KD血凝素的单抗,HI效价为1:27,且不与新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、传染性脑脊髓炎病毒、鸡传染性支气管炎病毒、H5N1亚型禽流感病毒发生交叉反应,具有较好的特异性。IgG亚型为IgG1。 展开更多
关键词 禽流感病毒 单克隆抗体 免疫吸附试验 H9亚型禽流感病毒 初步鉴定 鸡传染性法氏囊病病毒 Balb/c小鼠 间接ELISA方法 制备 鸡传染性支气管炎病毒
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猪细小病毒2型VP蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 何玉 王广操 +4 位作者 张梦岩 李玉峰 白娟 姜平 王先炜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期118-125,共8页
为了有效监测猪细小病毒2型(PPV2)的抗体水平,选择PPV2VP蛋白主要亲水区及高抗原指数区进行原核表达。以表达的重组tVP蛋白为包被抗原建立了检测PPV2抗体的间接ELISA。优化后的反应条件为:抗原包被浓度为0.8μg/mL,血清的最佳稀释度为1... 为了有效监测猪细小病毒2型(PPV2)的抗体水平,选择PPV2VP蛋白主要亲水区及高抗原指数区进行原核表达。以表达的重组tVP蛋白为包被抗原建立了检测PPV2抗体的间接ELISA。优化后的反应条件为:抗原包被浓度为0.8μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的工作浓度为1∶20 000,检测的临界值为0.400 5(D450nm≥0.400 5判定为阳性)。特异性试验证明,与猪细小病毒1型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒O型血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性试验变异系数均小于10%。应用此方法对采自江苏省的480份临床血清样本进行了检测,PPV2抗体阳性率为31%。试验结果表明,tVP蛋白能很好地获得表达,以此蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA具有较高的特异性和敏感性,可以用于临床血清PPV2抗体的检测。 展开更多
关键词 猪细小病毒2 重组截短的VP蛋白 原核表达 间接免疫吸附试验
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抗土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备、性质鉴定及初步应用
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作者 张振华 田拥军 李磊 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期750-750,共1页
关键词 土拨鼠肝炎病毒 病毒核心蛋白 单克隆抗体 性质鉴定 间接免疫吸附试验 BALB/c小鼠 免疫组织化学 制备
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淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用(简报)
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作者 扈光伟 张海涛 +1 位作者 缪时伟 朱国庆 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1989年第3期55-55,共1页
用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得4A5,4C2,5C0.6B6四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA),测知培养上清抗体滴... 用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得4A5,4C2,5C0.6B6四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA),测知培养上清抗体滴度为1:16—1:128,接种同系小鼠腹腔诱生的腹水, 展开更多
关键词 杂交瘤细胞系 单克隆抗体 免疫吸附试验(ELISA) 初步应用 骨髓瘤细胞SP2/0 淋球菌 简报 临床 BALB/c 淋病球菌 小鼠脾细胞 抗原免疫 菌体抗原 持续分泌 抗体滴度 培养上清 小鼠腹腔
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川崎病患儿血清可溶性白细胞介素-2受体和白细胞介素-6的变化及意义 被引量:4
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作者 洪华 邓君 +2 位作者 张玲英 叶长宁 赖德明 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期297-299,共3页
目的探讨血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)和白细胞介素-6(IL-6)水平在川崎病(K D)患儿中的变化,及其在发病中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗夹心法测定血清sIL-2R和IL-6水平;利用德灵BN ProSpec特种蛋白分析仪检测血... 目的探讨血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)和白细胞介素-6(IL-6)水平在川崎病(K D)患儿中的变化,及其在发病中的作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗夹心法测定血清sIL-2R和IL-6水平;利用德灵BN ProSpec特种蛋白分析仪检测血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。结果30例KD患儿大剂量丙种球蛋白静脉滴注前(静丙前)和滴注后(静丙后)血清slL-2R和hs-CRP水平与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),静丙前和静丙后比较差异有统计学意义(P<0.01);静丙前KD患儿血清IL-6和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);KD患儿血清slL-2R与hs-CR P水平呈正相关(r=0.6,P<0.01),静丙前K D患儿血清IL-6和hs-CRP呈正相关(r=0.68,P<0.01)。结论血清IL-6和slL-2R参与了川崎病的发生,它们可作为判断预后、评估患儿免疫功能状况的参考指标。 展开更多
关键词 血清可溶性白细胞介素-2受体 白细胞介素-6 川崎病 免疫吸附试验(ELISA) 患儿 血清SIL-2R 血清超敏c反应蛋白 血清IL-6 大剂量丙种球蛋白 hs-cRP SLL-2R 分析仪检测 双抗夹心法 统计学 特种蛋白 静脉滴注 判断预后
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信阳地区猪圆环病毒2型血清学调查与分析 被引量:3
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作者 刘琨 马超锋 +4 位作者 贾明杰 张焰峰 龚波 孙何云 胡积霞 《黑龙江畜牧兽医(下半月)》 CAS 2013年第3期88-89,共2页
猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪的一种传染病,是近几年来发现的较难控制的传染病。 为了解信阳市规模猪场PCV2隐性感染情况,笔者用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对信阳市7县2区未免疫圆环病毒疫苗的规模化猪场进行了血... 猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪的一种传染病,是近几年来发现的较难控制的传染病。 为了解信阳市规模猪场PCV2隐性感染情况,笔者用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对信阳市7县2区未免疫圆环病毒疫苗的规模化猪场进行了血清流行病学调查及分析,从而为了解PCV2在信阳地区猪群中的感染、分布与流行情况奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 血清学调查 信阳地区 间接免疫吸附试验 猪圆环病毒病 流行病学调查 感染情况 PcV2
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