MSCs通过调控AMPK/mTOR促进自噬改善NASH肝损伤

非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)是代谢相关性脂肪肝病(metabolic associatedfattyliverdisease,MAFLD)肝脏特征性病理表现,是MAFLD从相对良性和可逆阶段向肝损伤甚至肝硬化和肝细胞癌发展的关键转折点。近年来研究表明,脂质沉积和氧化应激贯穿于MAFLD始终,而改善肝脂肪沉积和氧化应激是目前治疗和预防NASH疾病发生和发展的主要干预途径。一般来说,促进自噬水平可减少脂质积累(triglyceride,TG)和氧化应激(oxidative stress,OS)并促进肝细胞存活,而阻断自噬水平可能会加速NASH的进展。但自噬水平的激活与上游信号AMPK/mTOR/ULK1的活化及EI24的调控密不可分。其中一种与AMPK、mTOR通道活化密切相关的自噬跨膜蛋白依托泊苷诱导2.4蛋白(Etoposide-induced protein 2.4,EI24),可通过促进自噬溶酶体的降解加速自噬流的活化过程。同时,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作为理想的自噬诱导体,凭借其激活AMPK/mTOR介导性自噬在治疗各种NASH炎症性疾病方面优异的治疗效果被广泛研究。因此,当采用MSCs以“药物作用”调控EI24/AMPK/mTOR轴促进自噬改善或逆转NASH脂肪堆积、氧化应激等肝损伤,以期为NASH相关发病机制的阐明和开发新的治疗策略提供依据。

一种新型的两态叠加MSCS光场的广义非线性等阶N次方H压缩

本文利用新近建立的多模压缩态理论 ,详细研究了一种新型的两态叠加多模薛定谔猫态 (即 MSCS)光场 |ψ( 2 ) 〉q 的广义非线性等阶 N次方 H压缩效应 .结果发现 :1态 |ψ( 2 ) 〉q是一种典型的非经典光场 ;当压缩阶数 N与腔模总数 q这两者之积为偶数 ,即 q N =2 p,并且p为奇数亦即 p=2 m′+ 1 ( m′=0 ,1 ,2 ,3,… ,… )时 ,如果各模的初始相位和 qj =1φj、态间的初始相位差 (θ( I)pq-θ( R)nq )、各多模相干态光场的总的平均光子数 qj =1R2j等满足一定的量子化条件(或者当 qj =1R2j 在总的平均光子数 qj =1R2j 的一系列压缩区内连续取值时 ) ,态 | ψ( 2 )〉q 总可呈现出周期性变化的、任意阶的广义非线性等阶 N次方 H压缩效应 .2态 | ψ( 2 )〉q的第一及第二两个正交分量 ,其压缩结果 (亦即压缩程度和压缩深度 )完全相同 ,但压缩条件不同 ;两者的等阶 N次方 H压缩效应呈现出周期性的互补关系 .3与文献 1 6相比 ,本文所研究的态 | ψ( 2 )〉q的等阶 N次方 H压缩效应是比其等阶 N次方 Y压缩效应更高阶的广义非线性等阶高阶压缩效应 .

Ad-HGF修饰MSCs异体移植对烧伤创面愈合的作用

目的:探讨携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒(Ad-HGF)修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)局部异体移植对烧伤创面愈合的作用。方法:密度梯度离心法体外分离培养雄性Wistar大鼠MSCs,并以感染复数(MOI=100)体外转染Ad-HGF。30只雌性Wistar大鼠随机分为:MSCs治疗组(A组),Ad-HGF修饰MSCs治疗组(B组),Ad-GFP修饰MSCs治疗组(C组),Ad-HGF治疗组(D组),空白对照组(E组)。复制大鼠深Ⅱ度烧伤模型,将细胞悬液、病毒悬液及生理盐水于创面下多点注射。伤后3、5、7、14、21 d观察创面收缩率并采集创面标本,行HE染色观察创面愈合情况。结果:伤后7、14 dB组与A组、C组、D组、E组比较,创口收缩率显著提高(P<0.05);HE染色可见B组表皮明显厚于其他各组,并可见钉脚下伸。结论:Ad-HGF修饰MSCs异体移植可显著提高烧伤创面愈合速度和质量,为烧伤创面修复提供了新的策略。

督脉电针联合人脐血MSCs移植对脑缺血大鼠VEGF蛋白表达的影响

目的:研究督脉电针联合人脐血MSCs移植对脑缺血大鼠VEGF表达的影响。方法:提取并培养人脐血MSCs,建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,采用免疫组织化学染色检测不同时间段脑缺血边缘区VEGF的表达水平。结果:缺血后7 d和14 d,脐血MSCs移植组和联合治疗组VEGF阳性表达均高于PBS移植组(P<0.01),缺血后14d和28 d,联合治疗组高于人脐血MSCs移植组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:督脉电针联合人脐血MSCs移植具有协同效应,可上调缺血区半暗带VEGF表达,促进血管新生,对改善缺血半暗带血供有重要意义。

缺氧预处理MSCs移植对脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4表达的影响及清热化瘀方的干预作用

目的观察缺氧预处理骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4 m RNA和蛋白表达的影响及清热化瘀方的干预作用。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,将216只SD大鼠随机分为6组:假手术组(SO)、模型组(MCAO)、MSCs移植对照组(N-MSCs)、经HP处理后的MSCs移植组(HP-MSCs)、MSCs移植联合清热化瘀方组(MSCs+QRHY)、HP-MSCs移植联合清热化瘀方组(HP+QRHY)。每组大鼠36只,每组根据取材时间点7,14,28 d又可分为每组3个亚组,每个亚组12只大鼠。采用q RT-PCR和Western blot观察3个时间点SDF-1/CXCR4 m RNA及其蛋白的表达变化,并以TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果各组缺血半暗带SDF-1/CXCR4 m RNA及其蛋白的表达均于7d达到高峰,14,28 d表达逐渐下降。其中7,14 d同一时间点组间比较,HP-MSCs组、MSCs+QRHY组及HP+QRHY组二者的表达均明显优于N-MSCs组(P<0.01,P<0.05),而以HP+QRHY组增高最为明显(P<0.05,P<0.01),28 d后,各移植组的表达趋势趋同,但仍高于模型组(P<0.05)。结论缺氧预处理MSCs移植能够显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4的表达,清热化瘀方能够进一步上调SDF/1CXCR4的表达,减少细胞凋亡。

工频磁场刺激小鼠MSCs体外增殖与分化的初步研究

通过实验初步研究了工频磁场对小鼠骨髓间充质干细胞体外增殖与分化的影响。实验结果显示工频电磁场对骨髓间充质干细胞的增殖与分化有明显的诱导效应,且具有一定的重复性,同时,磁效应不是一种线性关系,存在着窗口效应。文末讨论了磁刺激治疗骨折不愈合研究的国内外现状,并提出了我们的研究构想。

淫羊藿苷调控Wnt/β-catenin信号通路干预大鼠MSCs成脂成骨双向分化实验研究

目的:探讨不同浓度的淫羊藿苷对体外培养的骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成脂与成骨双向分化的作用及其机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离纯化和培养Sprague Dawley大鼠MSCs,免疫荧光检测MSCsy阳性标志CD44和CD90;CCK-8检测不同浓度淫羊藿苷对MSCs细胞增殖作用影响;观察不同浓度淫羊藿苷对MSCs成脂和成骨分化的影响;qRT-PCR和Western blot检测给药前后MSCs内成脂特异性基因PPARγ、Adipsin和FABP4以及成骨特异性基因RUNX2、ALP和OPN的变化。Western blot检测淫羊藿苷刺激对Wnt/β-catenin通路激活的影响。结果:免疫荧光结果显示MSCs阳性标志CD44和CD90均表现出红色荧光遍布胞质;CCK-8检测结果显示10、20、30和40 ng/ml淫羊藿苷在1~4 d对MSCs增殖均无影响,50 ng/ml淫羊藿苷在第3~4 d时明显抑制MSCs增殖(P<0.05);与空白对照组相比,10 ng/ml淫羊藿苷能抑制MSCs向成脂方向分化,同时显著下调成脂特异性基因PPARγ、Adipsin和FABP4的表达(P<0.05),而40 ng/ml淫羊藿苷作用则与之相反;10 ng/ml淫羊藿苷能促进MSCs向成骨方向分化,同时显著上调成骨特异性基因RUNX2、ALP和OPN的表达以及OC的活性,而40 ng/ml淫羊藿苷作用则与之相反。10 ng/ml和40 ng/ml淫羊藿苷均显著上调Wnt/β-catenin信号通路β-catenin和Wnt7(P<0.05)表达,同时下调GSK-3β的表达(P<0.05)。结论:不同浓度的淫羊藿苷通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进RUNX2、ALP和OPN的表达或者抑制PPARγ、Adipsin和FABP4的表达从而促进大鼠MSCs成骨分化,抑制其成脂分化作用。

5种中药多糖及其含药血清对MSCs增殖的影响

目的：探讨当归多糖、何首乌多糖、熟地多糖、枸杞多糖、黄芪多糖及其含药血清对骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响。方法：分离、培养大鼠MSCs,各中药多糖及其含药血清,分别加入培养基诱导72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况。结果：1mg/mL黄芪多糖及其10%含药血清对大鼠MSCs增殖的影响,与相应浓度的空白组及空白血清组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：黄芪多糖及其含药血清可促进大鼠MSCs增殖。

MSCS光场广义非线性不等幂次差压缩特性研究

利用多模辐射场的广义非线性不等幂次差压缩的一般理论 ,研究了具有普遍意义的两态叠加多模薛定谔猫态 (MSCS)光场的广义非线性不等幂次差压缩特性 (即Nj 次方X压缩特性 ) .通过计算 ,求得了MSCS的Nj 次方X压缩的一般理论结果 ,为寻找压缩条件提供了理论依据 .

甲醛对鼠BM-MSCs细胞系的遗传毒性影响

目的研究甲醛对BM—MSCs的遗传毒性，从而为甲醛导致白血病的发作提供生物学依据。方法采用噻唑篮比色（Mrrr）法检测BM—MSCs的增殖活性；用彗星、KCI—SDS沉淀、姐妹染色单体互换（SCE）和微核（MN）柃测甲醛对BM—MSCs的遗传毒忡效应。结果75～200μmol／L。甲醛可呈剂量依赖抑制BM—MSCs的增殖（P〈0．01），诱导BM—MSCsDNA断裂效应呈现先增高后降低趋势，在125μmol/L时，达到峰值，其中75～150μmol／L甲醛作用较对照组显著升高（P〈0．01）；甲醛在≥125μmol／L，时可以明显引起BM—MSCsDNA-蛋白交联（DPCs）、SCE和MN的形成，较对照组显著升高（P〈0．01）。结论甲醛可抑制BM—MSCs的增殖活性，并且对BM—MSCs具有一定的遗传毒性效应。

大鼠MSCs的体外分离、培养及鉴定的实验研究

[目的]体外分离、培养及鉴定大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。[方法]密度梯度离心法体外分离、培养7周龄SD大鼠MSCs,利用差速贴壁原理纯化MSCs,并通过形态学观察、细胞表面抗原标志物、多细胞系诱导分化对其进行鉴定。[结果]第3代(P3代)不表达抗原CD34,表达抗原CD44,符合MSCs表面标志物特征。[结论]密度梯度离心法能够建立稳定的MSCs体外分离培养体系。

MSCs对辐射诱导小鼠胸腺瘤中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例变化的影响

目的观察MSCs对辐射诱导小鼠胸腺瘤中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例变化的影响,探讨MSCs对辐射诱发肿瘤的预防和治疗作用。方法应用Kaplan经典方法制备C57BL/6幼年鼠胸腺瘤模型[1],经小鼠尾静脉输注同系鼠MSCs,6个月后取胸腺组织,将胸腺细胞制成单细胞,标记CD4、CD8、CD45,流式细胞术分析T细胞亚群。结果流式细胞术分析结果显示:照射后CD4-CD8-亚群比例由正常组的(5.11±5.10)%降低到(0.01±0.01)%(P<0.05),MSCs治疗(0.61±0.39)%后有所恢复;MSCs治疗组(91.49±4.47)%中CD4+CD8+亚群比例与正常组(82.44±6.06)%接近,单纯照射组(99.09±0.49)%显著高于正常组(P<0.05);照射后CD4+CD8-亚群由(7.72±3.37)%下降到(0.87±0.49)%,CD4-CD8+亚群由(4.74±2.59)%下降到(0.02±0.01)%,MSCs治疗后CD4+CD8-和CD4-CD8+都有不同程度上调。正常组、单纯照射组、MSCs治疗组中CD45+在CD4+CD8+中的比例分别为(86.09±2.24)%、(0.16±0.03)%、(97.35±3.23)%,差异有统计学意义(P<0.05);单纯照射组CD4-CD8-、CD4-CD8+和CD4+CD8-中CD45+均有不同程度的降低,MSCs治疗组有不同程度升高,且具有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs可使辐射诱导胸腺瘤模型组小鼠胸腺中T细胞CD4/CD8各亚群及各亚群中CD45比例增高或恢复,提示MSCs具有防治辐射诱发胸腺瘤的作用,并对辐射造成的胸腺损伤具有修复作用。

OPN诱导小鼠MSCs向表皮细胞分化促进创面愈合的研究

目的以骨桥蛋白（osteopontin,OPN）基因敲除小鼠及野生型小鼠为研究对象,探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）分化为表皮细胞的潜能及骨桥蛋白在分化过程中的作用。方法体外实验：将分离培养的野生型（WT）和基因敲除型（KO）新生鼠（鼠龄1 d）MSCs鉴定纯度后分别设为WT组和KO组,取其第3代分别在表皮转化培养体系中孵育,通过镜下观察、流式细胞术、免疫荧光染色、Western blot等方法,比较两组表皮细胞标志物（CK14）表达水平的差异。动物实验：实验分4组,WT组小鼠创周注射GFP-MSCs（WT/MSCs）组,WT小鼠创周注射PBS（WT/PBS）组,KO小鼠创周注射GFP-MSCs（KO/MSCs）组,KO小鼠创周注射PBS（KO/PBS）组,每组各8只雄鼠,鼠龄6～8周,体质量20～25 g,按分组将分离培养的GFP-MSCs和PBS注射到创周,观察创面愈合及GFP-MSCs向表皮细胞分化的情况。结果分离培养的MSCs呈梭形或成纤维细胞样生长,流式细胞术检测MSCs的纯度超过91%;诱导分化第12、17天的两组细胞检测发现,WT组和KO组的细胞均表达CK14;第17天免疫荧光结果示WT组CK14的表达阳性率（0.936 3±0.009 5）明显高于KO组（0.647 5±0.023 1）,（P〈0.01）;Western blot检测结果也显示KO组的CK14表达量（0.389 4±0.016 8）明显低于WT组（0.614 6±0.015 3）,（P〈0.01）。动物实验WT/PBS组创面愈合速度快于KO/PBS组（P〈0.05）,WT/MSCs组的创面愈合速度快于WT/PBS组（P〈0.05）,注射的GFP-MSCs向表皮细胞分化的能力WT/MSCs组强于KO/MSCs组（P〈0.05）。结论 OPN在体内、体外均可诱导MSCs分化为表皮细胞,进而促进创面愈合。

红景天苷对小鼠MSCs的增殖及其细胞周期的影响

目的本研究探讨了不同浓度红景天苷通过ERK信号通路对小鼠骨髓间充质干细胞增殖和细胞周期变化的影响及机制。方法实验分为对照组（D-MEM/F-12完全培养液）、不同浓度红景天苷（5-100μg/mL）诱导组和阻断组（5-100μg/mL＋30μg/L PD98059）,利用CCK8法、流式细胞术及Western blot分别检测ERK信号通路阻断前后细胞抑制率、细胞周期及其相关蛋白的表达。结果 10μg/mL诱导组和阻断组均能抑制细胞增殖,且5μg/mL（P〈0.01）、25μg/mL（P〈0.05）和100μg/mL（P〈0.05）诱导组对细胞抑制显著高于阻断组。25μg/mL诱导组和阻断组G0/G1期细胞比例均增加,细胞周期阻滞于G0/G1期。诱导组和阻断组cyclin A和cyclin D1蛋白的表达与对照组比较均下调,P21蛋白的表达上调。阻断组cyclin A蛋白的表达与诱导组比较明显下调（P〈0.01）;50和100μg/mL诱导组与阻断组相比cyclin D1蛋白表达显著下调,P21蛋白的表达显著上调（P〈0.01）。结论红景天苷能通过调节细胞周期相关蛋白的表达抑制小鼠MSCs细胞的增殖和细胞周期的改变。

携带Ang-1的MSCs双介入治疗ANFH的转染与表达

目的建立兔股骨头坏死模型,探讨双介入治疗方法的可行性,检测治疗后股骨头的转染率及表达。材料与方法用激素建立兔股骨头坏死模型80只,随机分为钻孔注入组、动脉灌注组、双介入组、对照组。实验组采用经皮穿刺于股骨头钻孔,直接注入携带血管生成素-1(Ang-1)的骨髓间质干细胞(MSCs),或/和经颈动脉穿刺,行超选择插管至双侧股骨头供血动脉,缓慢注入携带Ang-1的MSCs,对照组不作治疗。术后2、4、6、8周分别处死动物,取股骨头进行组织学观察、荧光检测、免疫组织化学检测。结果介入组转染增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)/Ang-1质粒的MSCs分化的细胞在荧光显微镜下见高表达Ang-1基因,同时局部循环血管和成骨细胞增多。明显好于单独治疗组、对照组。结论携带Ang-1的MSCs经双介入治疗不仅能促进毛细血管的生成,而且能定向进行骨分化。

MSCs对豚鼠光老化皮肤组织中Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察Ⅰ型胶原在骨髓间充质干细胞(MSCs)修复光老化皮肤的表达。方法采用密度梯度离心法分离培养MSCs,利用UVB灯管照射豚鼠制备皮肤光老化模型,实验分为正常组、模型组及治疗组。HE染色观察皮肤病理变化,免疫组织化学染色检测I型胶原表达。结果模型组豚鼠表皮厚度明显增加,真皮厚度急剧减少,胶原纤维异常增生且排列紊乱,皮肤附件也出现明显的增生;治疗组皮肤结构完整且清晰,表皮及真皮层均未见明显增厚,表皮非常光滑,横纹肌与真皮之间未见异常增生的胶原纤维。模型组Ⅰ型胶原蛋白的表达显著增加,明显高于正常组与治疗组。治疗组Ⅰ型胶原蛋白的表达接近于正常组。结论 MSCs对皮肤光老化有治疗作用。

MSCs对紫外线诱导皮肤光老化过程中MMP-1和MMP-3mRNA表达的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对紫外线(UVA)致皮肤光老化模型皮肤组织基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-3 mRNA表达的影响。方法将30只大鼠随机分为对照组、模型组和MSCs治疗组,每组10只。模型组和MSCs组的大鼠采用15 W UVA和UVB紫外灯2 h/d共照射60 d,照射于其背部裸露皮肤区。MSCs组大鼠在照射60 d后,在照射区局部多点皮内注射MSCs细胞,1次/w,共8 w。取皮肤组织,利用RTPCR进行检测。结果模型组和MSCs组MMP-1、MMP-3 mRNA表达均高于对照组(P<0.05),MSCs组MMP-1、MMP-3 mRNA表达明显低于模型组(P<0.05)。结论 MSCs可通过抑制MMP-1、MMP-3的分泌,起到抗光老化作用。

基于MSCS的应用服务器动态负载平衡的实现

本文讨论了如何在 MSCS的基础之上 ,利用 MSCS的某些特性来帮助实现应用服务器的动态负载平衡 ,并实现对会话的支持 .

MSCs对紫外线诱导皮肤光老化大鼠模型凋亡的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对紫外线诱导皮肤光老化模型大鼠皮肤细胞凋亡的影响。方法采用15 W UVA和UVB紫外灯,每日照射大鼠背部裸露皮肤区2 h,共照射60 d。随机分为对照组、模型组及MSCs治疗组,每组10只。体外分离培养MSCs,在大鼠背部裸露皮肤区多点注射,1次/w,共8 w。取皮肤组织,利用RT-PCR方法检测。结果治疗组Bax mRNA表达明显低于模型组(P<0.05),但接近于对照组(P>0.05)。治疗组Bcl-2 mRNA表达高于模型组(P<0.05),低于对照组(P<0.05)。结论 MSCs对紫外线诱导的皮肤光老化模型大鼠皮肤细胞有抑制凋亡作用。

非对称MSCS光场的广义非线性不等阶高阶振幅压缩

利用多模辐射场的不等阶压缩的一般理论 ,详细研究了非对称多模薛定谔猫态 (MSCS)光场 |Ψ( ab) 〉q =C( a I)pq |{i Z( a) *j }〉q+C( b I)nq |{-i Z( b) *j }〉q的广义非线性不等阶高阶振幅压缩特性 ,即广义非线性不等阶 Nj次方 Y压缩特性 ,结果发现 :态 |Ψ ( ab)〉q是一种典型的非经典多模光场 ,在任意多模 (q模 )光场中 ,无论部分模的压缩阶数为偶数阶 ,部分为奇数阶 ,还是 q模均为偶数阶 ,或均为奇数阶的情况下 ,只要各模初始相位φ( a)j 与φ( b)j (j=1 ,2 ,3 ,… ,q)、平均光子数 R( a)j 与 R( b)j 、态间初始相位差θ( a I)p q -θ( b I)nq 等分别满足各自条件 ,态 |Ψ( ab) 〉q总会呈现周期性变化的任意不等阶 Nj次方 Y压缩效应和