MSC移植对缺血再灌注损伤视网膜神经节细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)移植对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)视网膜神经节细胞Bcl-2/Bax表达的影响,为MSC移植治疗RIRI提供实验依据。方法 44只SD大鼠分为正常组(4只)、模型组(20只)、MSC移植组(20只)。前房加压法建立大鼠RIRI模型。体外培养大鼠MSC,MSC移植组于再灌注后予以玻璃体腔注射MSC。免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜缺血再灌注2h、6h、12h、24h、48h后Bcl-2/Bax表达情况。结果正常组视网膜神经节细胞未见Bcl-2、Bax表达。再灌注后2h、6h、12h、24h、48h,模型组Bcl-2表达分别为0.280±0.008、0.323±0.010、0.474±0.020、0.451±0.011、0.407±0.011,MSC移植组Bcl-2表达分别为0.340±0.006、0.401±0.009、0.610±0.006、0.581±0.009、0.490±0.005;模型组Bax表达分别为0.322±0.007、0.457±0.010、0.469±0.022、0.591±0.014、0.529±0.010,MSC移植组分别为0.252±0.008、0.366±0.011、0.389±0.009、0.433±0.013、0.391±0.004。MSC移植组与模型组比较Bcl-2表达均明显增强(均为P<0.01),Bax表达均明显减弱(均为P<0.01)。结论 RIRI大鼠行MSC移植术,可使神经节细胞Bcl-2表达增强,Bax表达减弱,Bcl-2/Bax比值升高,减少神经节细胞凋亡。MSC移植对RIRI神经节细胞有明显的保护作用。

人脐带血间充质干细胞移植对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的研究脐带血来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离、纯化及培养的条件,以建立稳定的体外培养体系,满足实验和临床的需要;探讨经尾静脉移植脐血间充质干细胞对心肌梗死大鼠心功能的影响。方法无菌条件下采集健康育龄产妇正常分娩胎儿的脐带血42份,脐血随机分成3组:FBS(胎牛血清)未包被组、FBS包被组和mesencult培养基组。FBS未包被组和FBS包被组均使用含10%FBS的LG-DMEM培养基、mesencult培养基组使用专用来培养干细胞的mesencult培养基,与其添加物配合使用。3组均用Ficoll淋巴细胞分离液,密度梯度法分离脐血单个核细胞(MNC),将单个核细胞按密度1×108/ml接种于T25培养瓶中,置37℃饱和湿度含5%CO2孵育箱培养,72 h后全量换液,去除未贴壁细胞,以后均7 d换液1次。待细胞长到80%铺满瓶底时结束原代培养。按1∶1进行消化传代。观察不同培养条件对脐血MSCs生长的影响。取P2代细胞用流式细胞仪检测细胞表面CD 29、CD 34、CD45、CD 105标志。将36只SD大鼠随机分成MSCs移植组、假手术组和心肌梗死植组各12只,结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型。心肌梗死后1周,经尾静脉注射脐血MSCs,4周后测定大鼠血流动力学。结果 42份脐血中单个核细胞原代培养,其中仅8份传代培养成功,而其中mesencult条件培养基有5份培养成功,明显高于FBS包被组(3份)和FBS未包被组(0份)。流式细胞仪检测第2代的脐血MSCs结果显示,P2代MSCs不表达或极弱表达CD 34,CD45造血细胞标志,稳定地高表达CD 29、CD 105间充质细胞相关的表面抗原标记。这与骨髓MSCs的表面抗原标志相一致。移植后4周,经血流动力学检测,与心梗组比较,MSCs移植组左室心功能明显改善(P<0.05)。结论将脐血单个核细胞以高密度(1×108cells/ml)接种在mesencult培养基中可以在体外成功培养出较纯化的脐血MSCs,其培养成功率较高。脐血MSCs的免疫表型符合间充质干细胞特征。脐血MSCs移植能促进心梗大鼠心功能恢复。

自体骨髓间充质干细胞移植在中枢神经系统疾病中的应用

目的观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的临床疗效。方法选择2007-09-2010-07于我院急诊科、心血管外科、脑外科、神经外科就诊并被诊断为缺血性脑血管病和创伤性脑损伤患者32例,入选患者按奇、偶数分为对照组16例和治疗组16例,治疗组采用DSA脑血管介入下自体骨髓间充质干细胞移植治疗;对照组采用一般的脱水、降颅压和血管扩张治疗,比较临床疗效。结果 治疗组平衡能力、语言能力和肌张力、运动性的恢复状况优于对照组,治疗组有效率81.2%,对照组有效率31.3%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 采用自体骨髓间充质干细胞移植方法治疗中枢神经系统疾病疗效满意,值得临床推广应用。

GATA-4基因增加骨髓间充质干细胞抗缺氧能力的探讨

目的探讨GATA-4基因对骨髓间充质干细胞(MSCs)在低氧环境下存活能力的影响。方法将GATA-4基因转染大鼠MSCs,以转染空质粒的MSCs做对照,通过蛋白印迹法检测GATA-4转染效果。模拟体内心肌梗死氧化应激损伤,在低氧环境下培养48 h,观察MSCs形态变化。通过MTT细胞增殖测定、膜联蛋白V-PE凋亡检测和乳酸脱氢酶(LDH)释放评价MSCs存活能力。结果在低氧环境下,GATA-4基因修饰组与转染空质粒的对照组相比,MTT摄取增加、膜联蛋白V阳性细胞数降低、LDH释放减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论转录因子GATA-4可以增加MSCs抗缺氧能力,增加细胞存活;为MSCs移植治疗缺血性心肌病、增加细胞存活提供新的方法。