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山羊MSH4和MSH5基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达
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作者 郑杰 刘霜 +3 位作者 罗斌 胡亮 杨珂伟 字向东 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期98-104,共7页
以低繁藏山羊和高繁金堂黑山羊为研究对象,分别提取处于发情期的5只藏山羊和5只金堂黑山羊的卵巢、子宫、输卵管、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对MSH4、MSH5基因c DNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究。结... 以低繁藏山羊和高繁金堂黑山羊为研究对象,分别提取处于发情期的5只藏山羊和5只金堂黑山羊的卵巢、子宫、输卵管、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对MSH4、MSH5基因c DNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究。结果表明,藏山羊和金堂黑山羊MSH4基因编码区均长2 499 bp,编码832个氨基酸,两品种基因编码区有5处碱基不同,并导致3处氨基酸的差异;MSH5基因编码区均长2 496 bp,编码831个氨基酸,两品种基因编码区有9处碱基不同,并导致5处氨基酸的差异。藏山羊MSH4基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、山羊、绵羊、牛、马、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.8%、99.8%、99.4%、98.1%、94.4%、85.1%、84.7%和93.5%;藏山羊MSH5基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、山羊、牛、家犬、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.6%、99.6%、97.3%、88.0%、85.8%、85.3%和90.2%。MSH4和MSH5基因m RNA在两个山羊品种的卵巢、子宫、输卵管、垂体中均有表达,但两品种间无显著性差异(P>0.05)。说明MSH4和MSH5基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究。 展开更多
关键词 藏山羊 金堂黑山羊 msh4 Msh5 克隆 定量PCR
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牦牛和犏牛睾丸组织Msh4基因mRNA表达差异的研究 被引量:5
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作者 曾琴 黄林 +2 位作者 金素钰 林亚秋 郑玉才 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期62-64,191,192,共5页
为了研究牦牛与犏牛睾丸组织Msh4基因mRNA表达水平的差异,从分子水平上揭示犏牛雄性不育的分子机制,试验从成年麦洼牦牛(n=9)、成年不育犏牛(n=3)和性未成熟犊牦牛(n=3)睾丸组织中提取总RNA,采用荧光定量PCR方法对Msh4 mRNA表达水平进... 为了研究牦牛与犏牛睾丸组织Msh4基因mRNA表达水平的差异,从分子水平上揭示犏牛雄性不育的分子机制,试验从成年麦洼牦牛(n=9)、成年不育犏牛(n=3)和性未成熟犊牦牛(n=3)睾丸组织中提取总RNA,采用荧光定量PCR方法对Msh4 mRNA表达水平进行检测。结果表明:犏牛和犊牦牛睾丸组织中Msh4 mRNA表达水平极显著低于牦牛(P<0.01),说明睾丸组织Msh4基因的低表达可能与犏牛雄性不育有关。 展开更多
关键词 牦牛 犏牛 杂交 雄性不育 睾丸 msh4基因
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DAB_(389)(Gly_4Ser)_2αMSH重组融合蛋白的构建及表达 被引量:6
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作者 李泽鸿 张国利 +1 位作者 岳玉环 朱平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期477-480,共4页
利用含有白喉毒素N端序列的基因作上游引物、含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列的基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EFG为模板,PCR扩增DAB389(Gly4Ser)2αMSH基因片段,用限制性内切酶EcoR和Nco酶切,并插入原核表达载体pET28... 利用含有白喉毒素N端序列的基因作上游引物、含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列的基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EFG为模板,PCR扩增DAB389(Gly4Ser)2αMSH基因片段,用限制性内切酶EcoR和Nco酶切,并插入原核表达载体pET28a的相应位点,构建了重组表达载体pET28a/DAB389(Gly4Ser)2αMSH,在大肠杆菌中表达重组融合蛋白DAB389(Gly4Ser)2αMSH,转化菌经IPTG、30℃诱导5h,用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白。结果表明扩增的片段与理论值一致。重组质粒的DNA序列分析正确。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为45870,且表达量达菌体总蛋白量的29.2%。Western blot分析显示,重组蛋白能特异地与抗白喉抗体结合。成功构建表达了重组DAB389(Gly4Ser)2αMSH的工程菌株,表达产物具有生物学活性。 展开更多
关键词 DAB389(Gly4Ser)2αMSH 重组蛋白 构建 表达
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DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH重组蛋白的构建表达及特异性细胞毒性研究 被引量:3
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作者 李泽鸿 岳玉环 +1 位作者 张国利 朱平 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期523-526,共4页
目的:构建重组毒素DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,探讨其对过度表达αMSH受体的几种癌细胞的特异杀伤作用。方法:利用含有His.Tag和白喉毒素的基因序列作上游引物、含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2的互补序列基因作下游引物,以pET28a-DAB389(Gly4... 目的:构建重组毒素DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,探讨其对过度表达αMSH受体的几种癌细胞的特异杀伤作用。方法:利用含有His.Tag和白喉毒素的基因序列作上游引物、含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2的互补序列基因作下游引物,以pET28a-DAB389(Gly4Ser)2-EGF为模板,PCR扩增得到DAB389(Gly4Ser)2-αMSH片段,插入原核表达载体pET28a的相应位点,构建重组表达载体并在大肠杆菌中表达重组融合蛋白DAB389(Gly4Ser)2-αMSH。用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达的重组蛋白,用结晶紫法检测重组蛋白对几种癌细胞和正常细胞的毒性作用。结果:构建了含有His.Tag重组表达质粒pET28a-DAB389(Gly4Ser)2-αMSH;SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为45.32×103,其表达量占菌体蛋白总量的29.2%;Western blot分析显示,重组蛋白能特异地与抗白喉抗体结合;细胞活性检测表明重组蛋白对SP2/0,HeLa,A549,A375这4种癌细胞有明显的杀伤作用,4种癌细胞的IC50值分别是3.138,2.736,7.243和4.672μg.mL-1。结论:成功构建了具有生物学活性的重组蛋白DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,为进一步的靶向性药物研究奠定了基础。 展开更多
关键词 DAB389(Gly4Ser)2-αMSH 重组蛋白 表达 特异性细胞毒性
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两种重组融合蛋白的分子生物学特性比较 被引量:2
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作者 李泽鸿 李树民 《北华大学学报(自然科学版)》 CAS 2007年第6期497-500,共4页
使用DNASTAR软件,利用计算机模拟比较了带有亲和标记和连接肽的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH与DAB389-αMSH两种融合蛋白的抗原性、亲水性、等电点及表位等分子生物学特性.结果显示,DAB389(Gly4Ser)2-αMSH的抗原性和表位明显低于DAB389-... 使用DNASTAR软件,利用计算机模拟比较了带有亲和标记和连接肽的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH与DAB389-αMSH两种融合蛋白的抗原性、亲水性、等电点及表位等分子生物学特性.结果显示,DAB389(Gly4Ser)2-αMSH的抗原性和表位明显低于DAB389-αMSH,而DAB389(Gly4Ser)2-αMSH的亲水性高于DAB389-αMSH,两者的等电点均为5.9. 展开更多
关键词 DAB389(Gly4Ser)2-αMSH DAB389-αMSH 抗原性 亲水性 表位
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DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH的纯化及细胞特异性毒性
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作者 李泽鸿 张国利 +1 位作者 岳玉环 吴广谋 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期910-913,918,共5页
重组表达载体pET28a/DAB389(Gly4Ser)2-αMSH在BL21(DE3)中以可溶形式表达重组蛋白,依次通过硫酸铵盐析、离子交换层析、亲和层析纯化、脱盐得93.26%重组蛋白纯品;细胞活性测试结果表明,该重组毒素只对SP2/0、HeLa、A549、A375等4种癌... 重组表达载体pET28a/DAB389(Gly4Ser)2-αMSH在BL21(DE3)中以可溶形式表达重组蛋白,依次通过硫酸铵盐析、离子交换层析、亲和层析纯化、脱盐得93.26%重组蛋白纯品;细胞活性测试结果表明,该重组毒素只对SP2/0、HeLa、A549、A375等4种癌细胞有杀伤作用,对DK、BHK正常细胞没有杀伤力;重组蛋白对SP2/0、HeLa、A549、A375细胞的IC50分别为:3.138、2.736、7.243、4.672 mg/L。 展开更多
关键词 DAB389(Gly4Ser)2-αMSH 纯化 细胞毒性
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细菌一种“新的分泌机制”初探
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作者 李泽鸿 彭其胜 《中国兽药杂志》 2011年第3期9-12,共4页
构建了免疫毒素DAB389(Gly4Ser)2-αMSH的两种表达质粒,其一为胞内表达质粒pET28a/DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,其二为胞周质表达质粒pET20b/DAB389(Gly4Ser)2-αMSH。实验结果显示,置于胞内表达质粒的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH在大肠杆菌的... 构建了免疫毒素DAB389(Gly4Ser)2-αMSH的两种表达质粒,其一为胞内表达质粒pET28a/DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,其二为胞周质表达质粒pET20b/DAB389(Gly4Ser)2-αMSH。实验结果显示,置于胞内表达质粒的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH在大肠杆菌的周质腔内分泌表达,而置于胞周质表达质粒的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH却不能表达。通过分析免疫毒素的特性,发现DAB389(Gly4Ser)2-αMSH中并不存在信号肽序列;与革兰氏阴性细菌中已发现的四种蛋白质分泌途径特性相比较,发现它不属于其中的任何一种,可能为一种新型细菌分泌机制。 展开更多
关键词 分泌机制 信号肽 DAB389(Gly4Ser)2-αMSH
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Arabidopsis PTD Is Required for Type Ⅰ Crossover Formation and Affects Recombination Frequency in Two Different Chromosomal Regions 被引量:5
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作者 Pingli Lu Asela J.Wijeratne +2 位作者 Zhengjia Wang Gregory P.Copenhaver Hong Ma 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期165-175,共11页
In eukaryotes, crossovers together with sister chromatid cohesion maintain physical association between homologous chromosomes, ensuring accurate chromosome segregation during meiosis I and resulting in exchange of ge... In eukaryotes, crossovers together with sister chromatid cohesion maintain physical association between homologous chromosomes, ensuring accurate chromosome segregation during meiosis I and resulting in exchange of genetic information between homologues. The Arabidopsis PTD (Parting Dancers) gene affects the level of meiotic crossover formation, but its functional relationships with other core meiotic genes, such as AtSP011-1, AtRAD51, and AtMSH4, are unclear; whether PTD has other functions in meiosis is also unknown. To further analyze PTD function and to test for epistatic relationships, we compared the meiotic chromosome behaviors ofAtspoll-1 ptd and Atrad51 ptd double mutants with the relevant single mutants. The results suggest that PTD functions downstream of AtSP011-1 and AtRAD51 in the meiotic recombination pathway. Furthermore, we found that meiotic defects in rck pM and Atmsh4 ptd double mutants showed similar meiotic phenotypes to those of the relevant single mutants, providing genetic evidences for roles of PTD and RCK in the type I crossovers pathway. Moreover, we employed a pollen tetrad-based fluorescence method and found that the meiotic crossover frequencies in two genetic intervals were significantly reduced from 6.63% and 22.26% in wild-type to 1.14% and 6.36%, respectively, in the ptd^2 mutant. These results revealed new aspects of PTD function in meiotic crossover formation. 展开更多
关键词 PTD MEIOSIS msh4 CROSSOVER Recombination frequency
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亲和标记DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白的构建、表达及纯化
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作者 李泽鸿 张国利 +1 位作者 岳玉环 朱平 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2008年第3期241-244,共4页
目的:构建含有亲和标记His-tag的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,便于融合蛋白质的纯化。方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切识别序列、白喉毒素N端序列的基因作上游引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列基因作下游引物,以p... 目的:构建含有亲和标记His-tag的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,便于融合蛋白质的纯化。方法:利用含有His-tag序列、Factor Xa酶切识别序列、白喉毒素N端序列的基因作上游引物,含有αMSH全序列和(Gly4Ser)2互补序列基因作下游引物,以pET28a/DAB389(Gly4Ser)2EGF为模板,PCR扩增目的基因片段,并插入到原核表达载体pET28a中,构建了重组表达载体pET28a/亲和标记DAB389(Gly4Ser)2-αMSH,融合蛋白在BL21(λDE3)中以可溶形式表达,通过硫酸铵盐析、亲和层析纯化、脱盐、Factor Xa酶切得到重组蛋白纯品。结果:扩增的片段与理论值一致,序列分析正确;目的蛋白表达量约占菌体总蛋白量的30.6%;纯化得到纯度为94.36%的重组蛋白。结论:成功构建了含有His-tag的DAB389(Gly4Ser)2-αMSH重组蛋白,减少了纯化步骤,为进一步研究重组毒素、简便纯化途径奠定基础。 展开更多
关键词 亲和标记His-tag DAB389(Gly4Ser)2-αMSH 重组蛋白 基因表达 免疫毒素类 白喉毒素
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