胃息肉及胃癌组织中PMS2、MSH6、C-met的表达水平及其临床应用价值

目的对比分析胃息肉及胃癌组织中错配修复基因PMS2、MSH6、细胞间质表皮转化因子(C-met)的表达及其在胃息肉向胃癌转化中的预测价值。方法选取2017年7月至2019年12月安徽理工大学第一附属医院收治的143例胃息肉患者及45例胃癌患者作为研究对象,对比胃息肉及胃癌组织中PMS2、MSH6、C-met的表达水平及其相关性,建立PMS2、MSH6、C-met的受试者工作特征曲线(ROC曲线),分析其在胃息肉向胃癌转化中的预测价值。结果不同病理类型胃息肉及胃癌组织中PMS2、MSH6、C-met阳性表达率比较差异有统计学意义(P<0.01),其中PMS2、MSH6的阳性表达率比较,胃癌组织<腺瘤性息肉<胃底腺息肉<增生性息肉<炎性息肉;C-met阳性表达率比较,胃癌组织>腺瘤性息肉>胃底腺息肉>增生性息肉>炎性息肉。Spearman相关分析结果显示,PMS2、MSH6、C-met表达水平与胃息肉病理类型及病变严重程度呈显著相关性(r=-0.324、r=-0.319、r=0.298,均P<0.001),且PMS2表达与MSH6表达呈正相关(r=0.796,P<0.001),PMS2、MSH6表达与C-met表达呈负相关(r=-0.492、r=-0.483,均P<0.001);ROC曲线分析结果显示,PMS2预测胃息肉向胃癌转化的灵敏度为83.3%、特异度为74.8%,MSH6预测胃息肉向胃癌转化的灵敏度为82.5%、特异度为73.6%,C-met预测胃息肉向胃癌转化的灵敏度为77.8%,特异度为71.2%。结论PMS2、MSH6、C-met表达与胃息肉病理类型及病变严重程度显著相关,可能参与不同病理类型胃息肉向胃癌的发生发展,明确胃息肉的病理类型并检测PMS2、MSH6、C-met表达水平对防治胃息肉向胃癌转化具有重要意义。

敲低错配修复基因MSH6抑制结直肠癌细胞上皮间充质转化及其增殖

目的:探究错配修复基因MSH6对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及可能发生的机制。方法:根据美国国家生物信息技术中心(NCBI)中MSH6的基因序列构建靶向敲低MSH6的序列shMSH6-1、shMSH6-2和shMSH6-3,采用细胞转染技术敲低结直肠癌细胞中MSH6的表达,通过实时荧光定量PCR检测敲低效率并进行慢病毒包装,应用Western blot在细胞系中筛选MSH6高表达细胞系进行后续实验,应用CCK8检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,伤口愈合和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot方法检测上皮间充质相关蛋白的表达变化。结果:MSH6在结直肠癌细胞系中表达上调,其中RKO、SW620、LOVO细胞系上调明显,敲低MSH6明显限制了结直肠肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,同时导致E-cadherin蛋白水平增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达下降。结论:MSH6在结直肠癌中表达上调,敲低MSH6可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞发生凋亡并能够逆转EMT的发生。

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌MSH6基因胚系突变的测序研究

目的探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC）家系中MSH6基因胚系突变。方法采用PCR-直接测序的方法检测39个无胚系MSH2及MLH1基因突变、符合不同临床标准的中国人HNPCC家系先证者MSH6基因各外显子胚系突变;对137名正常人胚系基因组DNA进行错义突变相应外显子的测序分析。应用Envision二步法检测有突变的先证者肿瘤组织MSH6蛋白表达。结果在39个HNPCC先证者中共发现6个MSH6基因的胚系突变,分别位于第4、6、9和第10外显子;突变类型为4个错义突变、1个无义突变、1个剪接区的插入突变;对4个错义突变的相应外显子的测序分析显示：137名正常人胚系基因组DNA5例具有第6外显子1163密码子处的c.3488A〉T的错义突变,约占3.65%（5/137）,为单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）;其余错义突变在正常人群中均未发现。在6例有MSH6基因胚系突变家系的肿瘤组织中免疫组化染色除1例为SNP的肿瘤组织MSH6蛋白阳性表达外,其余均为阴性表达。经过查询国际HNPCC突变数据库及SNP数据库证实上述突变中5个为国际上尚未报道的病理性突变,1个为新发现的SNP。结论MSH6基因胚系突变在符合不同临床标准的中国人HNPCC中均起一定作用,对无MSH2及MLH1基因胚系突变的先证者行MSH6基因胚系突变的测序分析对确诊HNPCC家系是必要的。

拟南芥miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p靶向MSH6基因参与Cd应激响应

MSH6在激活细胞周期阻滞和修复镉诱导的DNA损伤等方面具有重要功能。本研究以拟南芥为实验材料,通过生物信息学分析发现,MSH6具有miRNA172b-5p、miRNA172e-5p、miRNA472-3p等microRNAs(miRNAs)的作用靶点。利用烟草双荧光素酶报告系统体外验证检测发现,与阴性对照组相比,miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p均可显著抑制荧光素酶的相对活性,其比值分别下降了25.5%、47.2%和49.5%。采用拟南芥植株瞬时侵染体内验证结果显示,miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p分别上升了178.9%、123.6%和37.6%;同时,qRT-PCR(real time quantitative reverse transcript polymerase chain reaction)结果表明,拟南芥幼苗在1.25、2.5、4.0 mg·L-1Cd胁迫7 d后,与对照组相比,MSH6表达显著降低,分别下降了20.3%、22.7%和38.2%。而miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p表达显著增加,二者呈显著的负相关关系(r=-0.997,P<0.01;r=-0.997,P<0.01;r=-0.952,P<0.05),表明miRNA172b-5p、miRNA172e-5p和miRNA472-3p是拟南芥Cd胁迫响应的miRNAs,并且靶向MSH6基因。本研究为DNA mismatch repair(MMR)对Cd毒理调控机制的研究提供miRNA理论基础。