Msi1基因沉默对人肝癌HepG2细胞的影响

目的:探讨siRNA沉默Msi1基因表达后,人肝癌HepG2细胞的增殖与凋亡的情况。方法:设计合成针对Msi1 mRNA序列的siRNA多条序列,分别转染人肝癌HepG2细胞。使用RT–PCR方法检测各组细胞Msi1基因表达情况;Western blot法检测survivin蛋白、caspase3蛋白表达情况;MTT法、平皿克隆实验检测HepG2细胞增殖情况;流式细胞术检测各组HepG2细胞凋亡情况。结果:(1)RT-PCR结果:转染后24 h后,序列a,b,c转染效率分别为65%,64%及62%。其抑制率分别是Msi1 siRNAa(68%)、Msi1 siRNAb(56%)、Msi1 siRNAc(35%)。(2)流式细胞术检测各组细胞凋亡:空白组、阴性组、脂质体组、Msi1 siRNAa组凋亡率分别为(4.14±0.26)%、(4.51±0.78)%、(4.19±1.21)%,(16.8±0.26)%,Msi1 siRNAa组与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)Msi1 siRNAa最能有效抑制肝癌HepG2细胞中Msi1表达,与空白对照组比较,Msi1 siRNAa组HepG2细胞生长、增殖速度明显减缓(P<0.05);survivin蛋白表达水平显著下调(P<0.05),而caspase3蛋白表达水平上调(P<0.05);Msi1 siRNAa组凋亡率增高(P<0.05)。结论:沉默Msi1可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡。

白及MSI1基因的序列分析及SSR多态性分析

通过对白及(Bletilla striata(Thunb.)Rchb. f.)的IRA1多拷贝抑制子(multicopy suppressor of IRA1,MSI1)基因序列进行生物信息学分析,并根据其核苷酸序列设计简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)引物,进一步验证其在多个白及地方种中高度的保守性。运用Protparam、SOPMA、SWISS-MODEL等生物信息学软件分析白及MSI1蛋白的理化性质和结构域;DNAMAN、MEGA软件分别进行氨基酸多序列比对与系统进化分析;分析序列中的SSR位点并对多个白及品系进行PAGE检测和验证。结果显示,克隆得到的BSMSI1基因全长为3 700 bp,共编码了601个氨基酸残基,预测蛋白质分子量为65 309.75kg/moL,等电点为5.95,表现出高度的保守性,而且发现不同地区的白及BSMSI1基因在遗传上具有多样性。本研究拓展了对BSMSI1序列的认识,新开发标记能有效应用于MSI1基因的检测和育种鉴定,同时也可为其他物种的MSI1基因研究提供参考。