Rs10993994对前列腺癌细胞MSMB基因转录的影响

背景与目的:全基因组相关联研究发现了染色体10q11区域的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点rs10993994与前列腺癌的遗传易感性相关,本研究探讨rs10993994影响前列腺癌发病风险的可能机制,即研究rs10993994对前列腺癌细胞微精液蛋白β(microseminoprotein beta,MSMB)基因转录活性的影响。方法:化学合成MSMB基因的启动子序列,由于位于序列中间的SNP位点rs10993994有2种等位基因(T/C)可能,合成2条启动子MSMB promoter-T和MSMB promoter-C。将2条启动子通过酶切的方法导入荧光素酶报告基因载体(pGL3-basic vectors)中,筛选阳性克隆后,将携带启动子的质粒转染入前列腺癌细胞PC-3和LNCaP中,最后通过荧光检测仪检测重组质粒中启动子的转录活性。结果:成功合成2条启动子序列:MSMB promoter-T和MSMB promoter-C;分别将启动子序列与荧光素酶报告基因载体重组,形成重组质粒pGL3-MSMB promoter-T和pGL3-MSMB promoter-C。在前列腺癌细胞PC-3中,重组质粒MSMB promoter-C组的相对荧光度为2.27±0.39,显著高于重组质粒MSMB promoter-T组(0.57±0.13),差异有统计学意义(P<0.05);在前列腺癌细胞LNCaP中,重组质粒MSMB promoter-C组的相对荧光度为1.70±0.32,显著高于重组质粒MSMB promoter-T组(0.37±0.09),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:重组质粒pGL3-MSMB promoter-C的转录活性强于重组质粒pGL3-MSMB promoter-T的转录活性;rs10993994可以影响到MSMB基因启动子的启动转录活性,rs10993994位点上等位基因胞嘧啶(C)较胸腺嘧啶(T)更能促使MSMB基因转录。

牦牛MSMB基因的克隆及其生物信息学分析

微精原蛋白β(MSMB)对动物的繁殖功能具有重要的调控作用。采集成年健康母牦牛的卵巢组织,通过RT-PCR技术克隆牦牛的MSMB基因,并进行了生物信息学分析。结果表明:牦牛MSMB基因CDS区长117 bp,编码38个氨基酸;MSMB蛋白分子式C194H308N50O59S4,理论等电点7.69,分子质量4.4 ku,脂肪系数66.58,不稳定系数21.23,属于稳定蛋白质,半衰期30 h,不具有跨膜结构和信号肽,是亲水性蛋白;与黄牛MSMB基因对比发现,牦牛MSMB基因存在1处碱基突变;牦牛与黄牛和绵羊CDS区核苷酸同源性均在80%以上,说明MSMB基因在进化中保守;MEGA 6.0和Clustal X软件分析结果表明,牦牛与黄牛首先聚为一小类,其次与绵羊、小鼠和大鼠聚为一类,最终与猪、鸡和鱼聚为一类,符合物种进化规律,进化树与同源性比对结果相符;二级结构α螺旋、延长链、β-转角和无规卷曲,分别占13.16%、44.74%、13.16%、28.95%,二级结构与三级结构相符;预测MSMB蛋白其结构域是PSP94超家族成员。该实验结果为进一步研究牦牛MSMB基因功能提供了一定理论依据。

整合素α6、β-微精浆蛋白基因和染色体8q24区与前列腺癌的关联研究

目的探讨整合素α6（ITGA6）基因（rsl2621278，G）、染色体8q24区（rs10086908，T）和β-微精浆蛋白（MSMB）基因（rs10993994，T）与北京市居民中前列腺癌（PCa）的关联，了解PCa患者基因型和表型的关系。方法收集112例PCa患者临床、遗传、膳食习惯、嗜好等表型，对PCa患者和91名正常对照者的ITGA6基因（rs12621278，G）、染色体8q24区（rs10086908，T）和MSMB基因（rs10993994，T）进行比较，并进行病例组的基因型-表型分析。结果2组间相比，MSMB基因rs10993994，T风险等位基因频率差异有统计学意义（病例组56．4％，对照组46．2％；P=0．001，OR：1．97，95％CI为1．28～3．04）。8q24区的rs10086908，T（病例组83．5％，对照组79．2％）和ITGA6基因的rs12621278，G（病例组27．2％，对照组27．0％）组间差异无统计学意义（P〉0．05）。数量性状分析发现ITGA6风险基因型（G／G）的患者病程为（1．40±0．55）年，显著短于A／G型的（4．38±3．10）年和A／A型的（2．37±1．84）年（P=0．003）。结论MSMB基因变异和PCa易感性之间存在相关件．根示MSMB甚丙可能与PCa右芒麟．