耻垢分枝杆菌的蚯蚓血红蛋白样蛋白MSMEG_3312影响其大环内酯类药物的敏感性

【目的】活性氧类分子是机体有氧代谢的自然产物,可以引起氧化损伤,导致细胞DNA突变、蛋白质失活,是细菌耐药产生的原因之一。蚯蚓血红蛋白家族是能携带氧、可逆地结合氧的一类蛋白,在氧代谢过程中发挥重要作用,与活性氧类分子介导的细菌耐药相关。预测耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)MSMEG_3312是蚯蚓血红蛋白样蛋白,其功能可能与细菌抗药性有关。【方法】通过生物信息学预测耻垢分枝杆菌MSMEG_3312的结构特征。通过基因敲除、遗传互补和抗药性分析以及启动子表达测定等方法研究MSMEG_3312与耻垢分枝杆菌抗药的相关性。【结果】与野生菌株mc2155相比,msmeg_3312敲除菌株表现为抗大环内酯类抗生素,而且回补msmeg_3312部分丧失了这种耐药表型。此外,大环内酯类抗生素的胁迫在统计上显著下调msmeg_3312启动子的表达。另外,对作用于核糖体的其他药物,敲除菌株和野生菌株没有抗药性差异。【结论】生物信息学分析显示MSMEG_3312的氨基酸序列具有典型的蚯蚓血红蛋白保守的HHE结构域,预测其二级结构含有4个α-螺旋组成的典型蚯蚓血红蛋白结构。MSMEG_3312与耻垢分枝杆菌对大环内酯类抗生素的药物敏感性相关,其可能通过影响药物与核糖体50S亚基的作用来发挥功能。

定量蛋白质组分析蚯蚓血红蛋白样蛋白MSMEG_3312介导的分枝杆菌耐红霉素机制（英文）

【目的】细菌耐药机制是个复杂的机制,系统生物学是系统性揭示耐药机制的有力研究手段。我们课题组前期研究结果显示,蚯蚓血红蛋白样蛋白msmeg_3312基因敲除后能够增加耻垢分枝杆菌对红霉素的耐药性,本文系统研究MSMEG_3312参与红霉素耐药性形成的机制。【方法】首先纯化MSMEG_3312蛋白,利用光谱及圆二色谱描述MSMEG-3312蛋白。利用定量蛋白质组学的方法比较分析敲除菌株Δmsmeg_3312与野生型菌株mc^2155蛋白表达的差异,并通过qRT-PCR进行验证。利用红霉素ELASA试剂盒测定Δmsmeg_3312与mc^2155的胞内药物浓度。【结果】光谱及圆二色谱分析确定MSMEG_3312是蚯蚓血红蛋白样蛋白。定量蛋白质组学分析发现,红霉素未处理的条件下,相比于野生型菌株mc^2155,敲除菌株Δmsmeg_3312有包括3种转运蛋白在内的8种蛋白表达水平上调,14种蛋白表达下调;而红霉素处理后,Δmsmeg_3312中有448种蛋白差异表达,其中有11种转运蛋白表达上调,26种蛋白与氨基酸合成通路相关。胞内药物浓度检测显示敲除菌株Δmsmeg_3312的胞内红霉素浓度显著低于野生型菌株。【结论】蚯蚓血红蛋白样蛋白MSMEG_3312调控改变了细菌对红霉素药物处理的反应网络,其介导的红霉素耐药是一种集合抗生素耐受机制。

面向环境监测的无线传感器网络节点设计

环境监测是无线传感器网络的一个重要应用领域。本文介绍了一种基于JN5121-Z01-M01无线微处理器模块的无线传感器网络终端节点的软硬件设计方案。实验证明:节点工作状况良好,整个网络具有较高的可靠性,可以实现对环境振动信息实时、准确的监测;节点硬件具有很强的通用性,只需要适当的扩展就可以实现对温度、光强等其他信息的采集。

312经络锻炼法对函授学员高血压病的疗效研究

目的研究312经络锻炼法(简称312)以函授班形式教学,对原发性高血压病近、中期疗效追踪及相关机理。方法40例函授班学员有高血压病者,进行教、学、练、督导312,自身对照分组。于312前及后第1,3,6,12个月分别观察其症状、体征、血压、用药、疗效等指标的变化,数据综合分析总结;并与以往面授班者作比较。结果①血压:40例于312后1,3,6个月与312前比较各均有显著性差异,P<0.01(图1、表1)。②疗效:症状其他指标,用药指标等相应地有所好转。312后1,3,6个月显效率逐渐递增,各分别为18%,35%,42.5%;总有效率各为95%,97%,100%;无效率各分别为5%,2.5%,0%,呈逐渐递减趋势,(表2)。③本文函授班血压和疗效结果与以往面授班[6]者比较,完全等同。结论312函授班对高血压病有良好效果。

MSMEG_0372基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌的构建与鉴定

目的为研究MSMEG_0372基因的功能,构建该基因敲除、回补及过表达耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.smegmatis)并鉴定。方法聚合酶链反应(PCR)扩增MSMEG_0372基因的左、右臂(即等位基因互换底物,allele exchange substrates,AES)。AES与p0004s经过酶切并连接,构建p0004s-AES质粒。p0004s-AES与phAE159经过酶切并连接,构建phAE159-AES噬菌粒。噬菌粒转化至M.smegmatis,30℃培养,扩增重组噬菌体。用重组噬菌体侵染M.smegmatis,37℃培养,发生基因同源重组,形成MSMEG_0372基因敲除菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。PCR扩增MSMEG_0372基因,构建pMV361-MSMEG_0372质粒。将pMV361-MSMEG_0372质粒分别导入MSMEG_0372基因敲除菌株和野生型M.smegmatis,构建MSMEG_0372基因回补菌株和MSMEG_0372基因过表达菌株。筛选阳性菌落,PCR鉴定。结果PCR扩增出MSMEG_0372的左、右臂(AES),构建了p0004s-AES质粒和phAE159-AES噬菌粒,制备了高滴度的重组噬菌体并侵染M.smegmatis,从而成功构建了MSMEG_0372基因敲除菌株。构建了pMV361-MSMEG_0372质粒,成功构建了MSMEG_0372基因回补和过表达菌株。结论成功构建并鉴定了MSMEG_0372基因敲除、回补及过表达M.smegmatis,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

调制芯片在抄表、报警系统中的应用

以 PCD3312 C调制芯片和 AT89C2 0 5 1微处理器为核心 ,配合几个外围芯片 ,构成了一套以电话线为传输介质的低成本的智能小区的抄表、报警系统。

MSMEG_6171在耻垢分枝杆菌中的表达及多组学关联分析

目的筛选MSMEG_6171在耻垢分枝杆菌中的可能调控通路或基因,并进行验证。方法构建MSMEG_6171基因过表达的耻垢分枝杆菌株和空载质粒对照菌株;对其转录组和蛋白质组进行验证并深入挖掘MSMEG_6171过表达调控的下游信号网络;qRT-PCR验证差异表达基因。结果成功构建了MSMGE_6171过表达的耻垢分枝杆菌菌株(Msm::6171);转录组和蛋白质组数据的对比分析发现有38个基因在转录水平和蛋白表达水平显著上调,有31个基因表达水平显著下调;差异表达基因主要参与甘油酯代谢,核糖体和代谢通路;15个候选基因实时荧光定量PCR验证结果与转录组和蛋白质组测序分析趋势一致。结论MSMGE_6171调控了多个靶向基因,参与代谢和核糖体通路,为深入研究MSMGE_6171的调控网络提供了新的认识和重要参考。

耻垢分枝杆菌MSMEG_4259的基因组维护功能研究

MSMEG_4259基因及其同源基因广泛存在于分枝杆菌属中。蛋白序列分析显示,MSMEG_4259包含DEDDh核酸外切酶结构域以及一个类似UvrC的核酸内切酶结构域,提示其可能参与DNA修复。为了探究MSMEG_4259的生理功能,本研究利用同源重组方法在耻垢分枝杆菌(Mycolicibacterium smegmatis)构建了MSMEG_4259基因敲除(ΔMs4259)菌株,并采用波动试验测定菌株在对数生长期以及H2O2处理后的利福平耐药突变频率。结果显示,ΔMs4259菌株的利福平耐药自发突变频率较野生型菌株升高1.9倍(P<0.05),该表型能够通过表达MSMEG_4259回补。测定耐药突变菌株rpoB基因的耐药决定区域序列,发现ΔMs4259菌株的A:T>C:G突变概率较野生型菌株上升约10倍,有研究证明该突变谱是DNA氧化损伤的常见突变。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)结果显示,野生型菌株的MSMEG_4259表达在H2O2处理后上调约7倍,提示该基因在转录水平参与了氧化压力应答。野生型菌株与ΔMs4259菌株在氧氟沙星、叔丁基过氧化氢和紫外线处理下的存活率无显著差异,提示MSMEG_4259不参与耻垢分枝杆菌对上述DNA损伤剂的耐受。本研究初步揭示了MSMEG_4259参与耻垢分枝杆菌基因组维护的生理功能、突变谱及转录调控等特性,为进一步研究其同源基因在结核分枝杆菌致病和耐药中的作用机制奠定了基础。

FX3312井施工技术

在介绍FX3312井井身结构与井眼轨迹设计概况的基础上,对施工中的井眼轨迹控制和井壁稳定技术进行了详细的论述说明,该井施工的成功,对施工同类型井具有很好的指导作用。

基于电话网络的远程数据通讯

本文介绍了一种简单的基于编码芯片PCD3312的单片机远程通讯方法。采用电话线作为传输线路，PCD3312作为信号调制器，设计出了一种低成本的数据通讯工具。 本系统采用串行通讯方式。数据发送端首先以拨号方式将接收端的号码通过PCD3312调制成不同频率的正弦信号，经由电话线发送至电话交换机，然后电话交换机根据发送来的号码，向接收端发送请求，接收端根据请求发出应答信号，发送端收到应答信号后即开始传送数据。接收端是通过一个复杂的信号解调电路将不同频率的正弦信号解调成可以被系统利用的数字信号。这就是本系统的数据通信过程。

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这个甲骨文描绘的是一件杀伤力很大的兵器,这个字被人们天天说起,但是它现在的用法已经与它最初的意思相去十万八千里了。它会是什么字呢?赶紧把你的答案填在评刊表上寄往编辑部,谜底将在下期揭晓。

高考作文(上海卷)试题

1985年,参加关于成语“知足常乐”的讨论,写一篇发言稿(50分)。1986年,1.评论歌曲《十五的月亮》歌词的艺术特点(10分);2.2002年回母校(40分)。1987年,1.为《人民日报》刊登的一篇文章作摘要(10分);2.有感于五十年前的今天(40分)。

机械化籽粒直收玉米品种金科玉3312的选育

集约化、规模化、全程机械化是今后玉米生产的主要方式,选育出能够满足籽粒直收的玉米品种是实现玉米生产方式转型的重要基础。金科玉3312是榆林市金日种业有限责任公司为了适应目前生产中对于机械化籽粒直收玉米品种的需求,通过深入挖掘和利用国内外优异玉米种质资源,开发研究并采用诱导系组配单倍体和化学加倍等方法选育而成的适宜籽粒直收的玉米品种,该品种于2019年通过陕西省农作物品种审定委员会审定,审定编号:陕审玉2019036号。金科玉3312具有适应性广、抗病性强、产量高、抗倒伏、耐密植、出籽率高、籽粒脱水快等适宜机械化籽粒直收的优点,且具备超过15000kg/hm2的增产潜力。

耻垢分枝杆菌MSMEG_6281过表达对菌株生长和形态的影响

【目的】耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2155,mc2155)MSMEG_6281为结核分枝杆菌自溶素Rv3717的同源蛋白,通过建立过表达MSMEG_6281的耻垢分枝杆菌菌株,推测该蛋白对耻垢分枝杆菌肽聚糖代谢的影响。【方法】利用RT-PCR方法检测乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)作用后MSMEG_6281基因的表达变化;以耻垢分枝杆菌基因组DNA为模板,采用PCR技术克隆MSMEG_6281基因,构建分枝杆菌表达质粒p VV16-MSMEG_6281,进一步建立MSMEG_6281过表达的耻垢分枝杆菌菌株;利用生长曲线检测MSMEG_6281过表达对耻垢分枝杆菌生长的影响;利用扫描电子显微镜分析MSMEG_6281过表达引起的耻垢分枝杆菌形态变化。【结果】EMB处理引起MSMEG_6281基因表达上调;构建了过表达MSMGE_6281的耻垢分枝杆菌菌株(mc2155/p VV16-MSMEG_6281);过表达MSMGE_6281的耻垢分枝杆菌生长缓慢,菌体形态由短杆状转变为长杆状。【结论】MSMGE_6281的过表达可改变耻垢分枝杆菌形态。MSMGE_6281的功能与细胞壁肽聚糖水解相关,在mc2155细胞壁形态维持方面发挥重要作用。

PCD3312及其IIC总线接口的驱动

文章介绍了带有IIC总线接口的DTMF编码芯片PCD331 2。通过设计虚拟IIC总线 ,实现了PCD331 2在不具备IIC总线接口功能的MCU控制下 ,产生DTMF信号的方法。

堂堂书阵百重关

现代是作者与读者相互寻找、相互选择的时代。正是通过阅读活动,读者的视域与作者的视域,当下的视域与历史的视域,实现了对接与融合,从而为彼此的理解和沟通提供了条件。王尔德有一句名言:"作品一半是作者写的。