绵羊MSR1克隆及其序列分析

为了解绵羊巨噬细胞清道夫受体1(Macrophage Scavenger Receptor 1,MSR1)基因的生物学信息特征,本研究对绵羊MSR1进行了克隆鉴定,与其他物种的MSR1氨基酸序列进行比对、构建进化树,并进行生物信息分析,预测了MSR1的理化性质。结果显示:绵羊MSR1基因ORF区全长1362 bp,编码453个氨基酸,分子量约为50 kDa,构建了MSR1真核表达载体;绵羊MSR1与山羊、羚羊、马鹿、水牛、白鲸、猪、人、家兔、小鼠的同源性分别为98.90%、96.03%、93.16%、93.16%、81.28%、78.81%、74.17%、73.51%、63.77%,同属于牛科动物的序列同源性在90%以上,进化树上在同一分支;该蛋白分子式为C_(2188)H_(3473)N_(629)O_(680)S_(19),理论等电点为6.00,蛋白质性质为弱酸性,51~73号氨基酸为跨膜结构,有7个潜在的糖基化位点和多个磷酸化位点,存在2个棕榈酰化位点和5个乙酰化位点,169~180位氨基酸序列区域为优势抗原决定簇。研究结果为以后研究绵羊MSR1的功能奠定了基础。

MSR1对矽肺小鼠脂质蓄积和炎性因子分泌的影响研究

目的探究A类清道夫受体1(MSR1)在矽肺小鼠肺组织内的表达及其在小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)中介导的炎症和脂质代谢的作用。方法24只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、染毒7 d组、染毒14 d组和染毒28 d组,每组6只。RAW264.7细胞分为对照组、siRNA-MSR1组、SiO_(2)组、siRNA-MSR1+SiO_(2)刺激组。通过苏木精-伊红(HE)染色和Van Gieson(VG)染色观察小鼠肺组织病理变化;油红O染色镜下观察脂质蓄积情况;免疫组织化学染色(IHC)检测MSR1的表达以及定位;免疫印迹法检测MSR1、炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、IL-1β的表达。结果与对照组相比,HE和VG染色结果显示矽肺小鼠肺组织中炎性细胞聚集,胶原分布增加;IHC结果显示,矽肺小鼠模型中MSR1的表达上调;油红O染色结果显示小鼠肺组织出现大量橙红色脂滴;免疫印迹结果显示,与对照组比较,矽肺小鼠肺组织中MSR1、TNF-α、IL-6、IL-1β表达均上调(P<0.05)。与对照组比较,SiO_(2)细胞刺激组MSR1的表达上调,siRNA-MSR1组的MSR1表达降低(P<0.05),SiO_(2)组细胞内出现橙红色脂滴,siRNA-MSR1+SiO_(2)刺激组脂滴蓄积程度低于SiO_(2)组(P<0.01);ELISA结果显示SiO_(2)细胞刺激组TNF-α、IL-6、IL-1β表达上调(P<0.05)。与SiO_(2)组比较,siRNA-MSR1+SiO_(2)刺激组的TNF-α、IL-6、IL-1β表达下调(P<0.05)。结论MSR1参与了矽肺小鼠肺组织和细胞内脂质成分的调控及炎症因子的释放;抑制MSR1的表达可以拮抗巨噬细胞的炎症反应和脂质异常蓄积。MSR1可能是今后干预矽肺病程进展的潜在治疗靶点。

miR-34a调控MSR1蛋白对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-34a通过MSR1对前列腺细胞迁移和侵袭的影响。方法:Western blot检测前列腺癌PC3细胞中MSR1表达情况;q PCR检测前列腺癌PC3细胞中miR-34a的表达情况,使用双荧光素酶实验检测miR-34a和MSR1之间的相关性;Transwell侵袭实验检测miR-34a和MSR1对前列腺癌细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验检测miR-34a和MSR1对前列腺癌细胞迁移能力的影响。结果:Western blot检测前列腺癌PC3细胞中MSR1的表达水平相对较高;q PCR检测前列腺癌PC3细胞中miR-34a的表达水平相对较低;双荧光素酶检测miR-34a和MSR1之间有直接的结合位点,miR-34a可以调控MSR1的表达水平,划痕愈合试验和Transwell侵袭试验检测过表达miR-34a后前列腺癌PC3细胞的迁移和侵袭能力受到相应的抑制,过表达MSR1后可以逆转miR-34a对前列腺癌PC3细胞的迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-34a可以通过MSR1蛋白来调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭行为。

MSR1基因多态性与缺血性脑卒中遗传易感性的关联研究

目的探讨巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)基因多态性与缺血性脑卒中的相关性。方法应用连接酶特异检测技术及TaqMan等位基因分型技术,在110例缺血性脑卒中患者和100例正常对照组之间对MSR1基因的rs416748、rs433235、rs12718376及rs4333601四个多态性位点进行检测。结果 MSR1基因rs416748位点基因多态在缺血性脑卒中病例组和正常对照组间的分布差异有统计学意义;应用二元对数回归统计法,在校正了性别、年龄、BMI、吸烟及高血压后,rs416748突变型等位基因A可显著增加缺血性脑卒中的患病风险。MSR1基因rs433235,rs12718376及rs4333601各位点基因多态在缺血性脑卒中病例组和正常对照组间的分布差异未达统计学差异水平(P>0.05),与缺血性脑卒中发病风险无显著相关性。结论 MSR1基因rs416748多态性位点可能与中国汉族人群缺血性脑血管病遗传易感性有关;MSR1基因多态性有可能是中国人群缺血性脑血管病高危人群筛选的标志和干预靶点。

外周血单个核细胞中MSR1基因表达增高与原发性高血压易感性关系的研究

目的观察原发性高血压患者外周血巨噬细胞清道夫受体-1(macrophage scavenger receptor 1,MSR1)的基因表达,初步探讨其与原发性高血压易感性之间的关系。方法用逆转录聚合酶链反应法分别检测原发性高血压组和对照组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中MSR1的信使RNA(mRNA)表达。结果与对照组比较,原发性高血压组患者PBMC中MSR1 mRNA表达显著增高(P<0.001)。logistic回归分析表明,MSR1的基因高表达水平是原发性高血压最具有预示性的危险因素(OR=14.006,P<0.001)结论 MSR1可能参与了原发性高血压的病理生理过程,PBMC的MSR1 mRNA表达上调可能是原发性高血压的风险因素之一。

治疗动脉粥样硬化的靶位:A类清道夫受体

动脉粥样硬化性心血管疾病是危害人类健康的常见疾病之一。A类清道夫受体是动脉粥样硬化发生和发展过程中的主要参与者之一 ,介导巨噬细胞内吞修饰的低密度脂蛋白 ,形成泡沫细胞 ,有明显的致动脉粥样硬化作用 ,是治疗动脉粥样硬化的潜在靶点。另外A类清道夫受体还参与机体的防御过程。重点综述了A类清道夫受体各成员结构及其在动脉粥样硬化中的生理作用和在新药研发方面的应用与展望。

眼睑黄色瘤巨噬细胞清道夫受体1单核苷酸多态性研究

目的:探讨眼睑黄色瘤与巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)基因单核苷酸多态性(SNP)的相关性。方法:分别抽取20例眼睑黄色瘤患者和20例健康者的空腹外周静脉血,应用Sanger测序方法进行MSR1基因型SNP检测,眼睑黄色瘤患者同时进行血脂、α-脂蛋白水平、颈动脉彩超等检查。结果:眼睑黄色瘤患者和健康人MSR1基因型SNP分布无显著差异,但部分合并颈动脉硬化和高血脂症的患者MSR1外显子区域S2-SNP1、S5-SNP2、S5-SNP4位点发生纯合突变。结论:眼睑黄色瘤与抗动脉粥样硬化受体MSR1基因型SNP具有相关性。

抗氧化酶过表达对趋磁螺菌MSR-1耐氧性的影响

在格瑞斯瓦尔德磁螺菌(Magnetospirillum gryphiswa ldense)MSR-1中分别过量表达3种抗氧化酶Fe-超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶HPII,并分析过量表达这3种酶对趋磁螺菌MSR-1耐氧性的影响。通过PCR分别扩增大肠杆菌DH5α的Fe-超氧化物歧化酶(sodB)、谷胱甘肽过氧化物酶(btuE)、过氧化氢酶HPⅡ(katE)基因序列,将前两个片段分别连接到广宿主质粒pBBR1MCS-2上,后一个片段连接到广宿主质粒pBBR1MCS-5上,构建成表达质粒pBBR1MCS-sodB,pBBR1MCS-btuE和pBBR1MCS-katE,将3个质粒通过双亲接合转移的方法分别转入趋磁螺菌MSR-1。3种抗氧化酶过表达对趋磁螺菌MSR-1耐氧性影响的试验结果为过量表达Fe-超氧化物歧化酶对菌体生长影响不明显;过量表达谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶HPII使趋磁螺菌MSR-1致死。上述试验结果表明抗氧化酶系在菌体耐氧过程中的全局协调调控的重要性。