SD大鼠MSX-2基因真核表达载体的构建与功能鉴定

目的构建SD大鼠颅颌面发育相关基因MSX-2与PcDNA3．1融合的高效真核表达载体，为研究MSX-2基因的功能奠定基础。方法根据SD大鼠MSX-2基因的核苷酸序列，设计并合成引物，采用PCR技术，扩增编码MSX-2基因，TA克隆到PMD18-T载体上，再亚克隆到真核表达载体PcDNA3．1的BamHI和Xhol位点。对该重组体进行酶切鉴定，以及测序验证。重组体转染HEK293细胞，RT-PCR和Western blot检测重组MSX-2基因的RNA和蛋白表达情况。结果重组真核表达载体PcDNA3．1-MSX-2经PCR扩增、酶切鉴定均显示有476bp左右的特异性基因片断，证明MSX-2基因正向插入真核表达载体中；碱基序列的测定证明重组质粒中含有SD大鼠的MSX-2基因序列。重组体转染HEK293细胞，RT-PCR和Western blot可检测到重组MSX-2基因的mRNA和蛋白的特异表达。结论成功构建SD大鼠MSX-2基因的高效真核表达载体，为进一步研究MSX-2基因的功能及基因治疗奠定了基础。

壮骨伸筋胶囊对泼尼松致骨质疏松模型大鼠的改善作用及其机制研究

目的:研究壮骨伸筋胶囊对骨质疏松模型大鼠的改善作用及其机制。方法:将72只SD大鼠随机分为6组,即空白对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、骨疏康颗粒组[阳性药物,3 g(生药)/kg]和壮骨伸筋胶囊低、中、高剂量组[1.4、2.7、5.4 g(生药)/kg]。除空白对照组ig生理盐水外,其余各组大鼠于每周一、四ig醋酸泼尼松片(4.5 mg/kg)复制骨质疏松模型,并同时于每周一至六ig相应药物,连续13周。测定大鼠股骨骨密度、骨形态计量指标[骨小梁体积百分比、骨小梁矿化率(MAR)和骨皮质矿化率(mAR)]、肾组织中肌节同源盒基因Msx-2 mRNA及其蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠骨密度、骨小梁体积百分比降低,mAR升高,肾组织中Msx-2 mRNA及其蛋白表达减弱(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,骨疏康颗粒组和壮骨伸筋胶囊高剂量组大鼠骨小梁体积百分比升高、m AR降低,肾组织中Msx-2 mRNA表达增强;各给药组大鼠骨密度增加、Msx-2蛋白表达增强;中剂量组骨小梁体积百分比升高,以上差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);MAR差异无统计学意义(P>0.05)。结论:壮骨伸筋胶囊对泼尼松致大鼠骨质疏松有一定的改善作用,其机制可能与上调肾组织中Msx-2基因的表达有关。