牦牛MT-IV基因克隆与序列分析

采用RT-PCR方法,利用特异性引物YMT-IVSP1和YMT-IVSP2先克隆出牦牛Bos grunniens MT-IV的编码区序列全长,将其与人MT-IV基因全序列比对,设计2对引物分别克隆内含子1和内含子2,将获得序列拼接后得到了牦牛MT-IV外显子与内含子全长为2 099 bp(GenBank Accession No.:EU665491),编码区序列长189 bp,编码62个氨基酸,20个半胱氨酸残基,不含芳香族氨基酸,2个内含子的长度分别为1 392和518 bp。将牦牛MT-IV基因编码区序列和氨基酸序列BLAST搜索结果表明,MT-IV在物种间高度保守。牦牛MT-IV氨基酸序列与牛、绵羊、山羊、狗、家鼠、人和马的比对表明,MT-IV包含有金属硫蛋白(MTs)特有的C-X-C、C-C-X-C-C、C-X-X-C结构域,构建的系统发育树与比较生理学和形态学相同,表明牦牛MT-IV具有与其他哺乳动物相同的分子特性,有必要进行牦牛MT-IV在上皮细胞中表达量水平的研究。

山羊、绵羊MT-IV分子特性研究

金属硫蛋白（MTs）是一类低分子量、金属和半胱氨酸含量高的细胞质蛋白，哺乳动物的MTs包括MT-I、MT-Ⅱ、MT-Ⅲ和MT-Ⅳ4种亚型，其中MT-Ⅳ只在磷状复层扁平上皮细胞中表达，相关研究报道较少。本研究根据GenBank已公布的动物MT-Ⅳ基因序列，设计出扩增山羊和绵羊MT-Ⅳ基因的特异性PCR引物MT-IVSP1和MT-ⅣSP2，利用RT-PCR的方法，分别从山羊和绵羊的瘤胃组织mRNA中，克隆出山羊和绵羊的MT-IV基因编码区序列（均为189bp），序列登录GenBank，获得序列号EF470251和EF624067。通过序列分析，表明山羊和绵羊两个物种MT-Ⅳ基因编码区全编码均为189bp、编码62个氨基酸，其中绵羊的MT-Ⅳ含有20个半胱氨酸，而山羊第6l位保守的半胱氨酸被色氨酸所代替。两个物种的MT-IV均不含芳香族氨基酸，含有MTs特有的C—X—C、C—X—X—C、C—C—X-C．C结构，无明显的跨膜结构域，无信号肽，是一种细胞质蛋白。二级结构分析表明两个物种的MT-Ⅳ二级结构大多数为无规则卷曲结构，分别在第7-9和第49～51氨基酸残基性存在折叠结构，不存在螺旋结构。三级结构预测结果表明两个物种MT-Ⅳ的三级结构由0c和D两个结构域组成，其中β结构域相同，仪结构域山羊少一个半胱氨酸残基，其结构与绵问存在明显差异，这一差异可能对山羊MT-Ⅳ的生理功能产生一定影响，有必要深入研究。

从循证医学角度看结直肠癌肝转移的规范化诊治

结直肠癌是人类最为常见的恶性肿瘤之一．结直肠痈肝转移（CLM）是其最主要的死亡原因之一．近年来．随着诊治理念的更新以及手术技术的进步。越来越多的CLM患者获得手术治疗的机会外月．预后僻以改善。在CLM的临床实践中，依靠循汪医学证据，规范化地诊断和治疗尤为重要．这包括多学科川队协作诊治、准确评估CLM的可切除性、规范化的手术及必要的综合治疗手段。