锌对小鼠组织MT-1基因转录及MT蛋白表达的影响

目的 :研究锌对小鼠各脏器金属硫蛋白 (MT)基因表达的影响。方法 :将小鼠随机分为注锌组和对照组 ,注锌后不同时间或不同剂量锌注射后 16 h断头处死动物 ,取一定量肝、脑、胸腺及脾脏组织制成匀浆 ,采用 Northern blot及 10 9Cd- hem饱和法测定组织 MT基因转录及蛋白表达的变化。结果 :时程研究表明 ,锌 10 mg/ kg腹腔注射后 2 h,小鼠肝脏及脾脏 MT- 1m RNA水平明显升高 ,4 h达峰值 ,分别为对照组的 5 .30和 2 .92倍 ,2 4 h恢复至正常水平 ;其 MT蛋白表达迟于 MT- 1m RNA水平升高 ,注锌后 8～ 2 4 h肝脏及脾脏 MT蛋白含量均比对照组明显升高 (P<0 .0 5或 P<0 .0 0 1) ,2 4 h达峰值 ,72 h恢复至正常水平。注射不同剂量锌后小鼠肝脏及脾脏 MT- 1m RNA水平 (4h)和 MT蛋白含量 (16 h)均呈剂量依赖性增加。小鼠腹腔注射锌 2 .5～ 10 mg/ kg 16 h,小鼠肝脏或脾脏 MT含量或锌5～ 10 mg/ kg注射后脾脏 MT含量均显著高于对照组 (P<0 .0 1或 P<0 .0 0 1)。但注射锌后脑及胸腺MT- 1m RNA水平及 MT蛋白含量均无明显变化经。结论 :锌诱导小鼠组织 MT合成具有明显的组织器官特异性。

非小细胞肺癌中MT蛋白的表达及意义

为了研究非小细胞肺癌 (non small cell lungcarcinoma,NSCLC)组织中金属硫蛋白 (metallothioneim ,MT)的表达及意义 ,选取非小细胞肺癌 54例 (鳞癌 32例 ,腺癌 2 2例 )和支气管粘膜上皮增生与不典型增生组织 1 2例的石蜡标本 ,用免疫组化SP法检测MT在各组织中的表达。结果显示 ,肺癌组织中MT的阳性表达明显上调 (P <0 .0 1 ) ,且随着肿瘤分化程度的降低 ,MT的表达逐渐增强 ,其差异具有显著性 (P <0 .0 5)。MT的表达在鳞癌与腺癌中无明显差异 (P >0 .0 5)。

燃煤型砷中毒患者皮肤P53mt蛋白的表达

目的 研究P5 3mt蛋白在燃煤型砷中毒患者皮肤中的表达情况。方法 根据病理学诊断结果将患者分为癌变组 (A组 ,18例 )、癌前组 (B组 ,11例 )和一般病变组 (C组 ,39例 ) ,P5 3mt蛋白的检测用免疫组化两步法。结果 A、B、C 3组P5 3mt蛋白阳性细胞密度分别为 38 0 7± 2 9 0 0、17 16± 15 0 0和 4 0 5± 8 2 4,3组间差异有显著性 (A和C :P <0 0 1,A和B :P <0 0 1,B和C :P <0 0 5 ) ,而正常组未发现阳性表达 ;A、B、C 3组的阳性率分别为 88 89%、72 73%和 2 5 6 4% (A和C :P <0 0 1,B和C :P <0 0 5 ) ;3组间阳性分级构成差异有显著性 (P <0 0 1) ,A组Ⅱ、Ⅲ级占 38 89% ,而B、C两组仅分别为 9 0 9%和 2 5 6 %。结论 燃煤型砷中毒致皮肤癌变过程中 ,P5 3mt基因起一定作用。P5 3mt蛋白的检测可用于燃煤型砷中毒病变皮肤的良。

非小细胞肺癌中MT蛋白与P53表达的研究

目的研究金属硫蛋白(metallothionein,MT)、p53蛋白在非小细胞肺癌(non-small-cell-lungcarcinoma,NSCLC)中的表达及其与临床病理的关系。方法选取NSCLC组织73例(鳞癌41例,腺癌32例)及正常肺支气管黏膜组织15例的石蜡标本,用免疫组化技术(S-P法)检测MT及p53蛋白在各组织中的表达。结果MT蛋白和p53蛋白在NSCLC中的阳性表达率分别为54.8%(40/73)、65.8%(48/73),均明显高于在正常肺支气管黏膜组织中的阳性表达率20.0%(3/15)、33.3%(5/15),差异具有统计学意义P<0.05。肺鳞癌和腺癌中MT的阳性表达率分别为56.1%(23/41)和53.1%(17/32),p53蛋白的阳性表达率分别为68.3%(28/41)和62.5%(20/32),其差异均无统计学意义P>0.05。MT蛋白和p53蛋白的阳性表达率均与NSCLC组织的分化程度、淋巴结转移等因素密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。MT蛋白阳性表达与p53蛋白阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论MT蛋白的高表达可能是非小细胞肺癌的发生的一种生物学标志,且与p53蛋白存在协同作用,联合检测两种蛋白的表达水平对判断NSCLC恶性程度、淋巴转移趋势具有重要价值。

线粒体未折叠蛋白反应在棕榈酸诱导肾小管上皮细胞脂质聚集中的作用

目的探讨线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,UPR^(mt))对肾小管上皮细胞(human kidney 2,HK-2)脂代谢的影响。方法采用棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导HK-2细胞内脂质聚集,分别予siRNA抑制UPR^(mt)或巴多索隆(the 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic acid,CDDO)增强UPR^(mt)。油红染色观察细胞内脂质聚集情况,线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Mito-SOX测定线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,Western blotting检测HSP60、LONP1、CLPP、ACOX1、PPARα、PGC1α、CPT1α蛋白表达。结果PA诱导HK-2细胞脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多及UPR^(mt)关键蛋白HSP60、LONP1表达降低;抑制UPR^(mt)可加剧PA导致的脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多,HSP60、LONP1表达进一步降低;增强UPR^(mt)可缓解PA导致的脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多以及HSP60、LONP1表达降低。结论PA诱导的HK-2细胞脂质聚集可能与线粒体功能障碍有关,UPR^(mt)在该过程中对HK-2细胞具有保护作用。

猴金属硫蛋白MT1 α-结构域中Cys33和Cys34的突变对蛋白质稳定性的影响

重组猴金属硫蛋白 MT1及其 C3 3 M,C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S突变体蛋白的蛋白质快速液相色谱( FPLC)分析表明 ,突变体蛋白 C3 4S和 C3 3 M/ C3 4S存在着两个稳定的流分 f1和 f2 .CD光谱和重金属离子分析表明 ,突变体蛋白多流分不仅与半胱氨酸和 Cd2 + 离子结合方式和构型有关 ,还与金属结合量有关 .突变体蛋白多流分的结果表明 ,在把猴金属硫蛋白 α-结构域中的 Cys3 3和 Cys3 4突变为非半胱氨酸残基以建立 β-β结构域的金属硫蛋白时 ,可导致蛋白形成多种结构形式 .这表明 α-结构域在稳定金属硫蛋白的结构中起着重要的作用 。

结直肠癌组织CD151与MT1-MMP蛋白、mRNA表达及相关性

目的 探讨结直肠癌组织CD151与膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)表达及其与临床病理因素之间的关系,并探讨CD151与MT1-MMP蛋白、mRNA表达的相关性。方法 应用免疫组织化学及定量反转录(qRT)-聚合酶链反应(PCR)对64例结直肠癌及对应远切端正常肠黏膜组织进行检测,并对CD151 mRNA与MT1-MMP蛋白、mRNA的表达进行相关性分析。结果 结直肠癌组织CD151、MT1-MMP蛋白及mRNA表达均显著高于远切端正常肠黏膜(P<0.05),且结直肠癌组织CD151、MT1-MMP蛋白及mRNA表达均呈正相关(P<0.05)。CD151、MT1-MMP的蛋白表达与结直肠癌患者年龄、性别和发生部位、肿瘤最大直径无相关性,与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),CD151与结直肠癌的分化程度有关,而MT1-MMP则无关。结论 结直肠癌组织CD151、MT1-MMP在蛋白及mRNA水平均呈高表达且具有正相关性,提示CD151与MT1-MMP可能共同参与了结直肠癌的发生、发展、浸润及转移。

海洋动物金属硫蛋白的提取与分析技术研究进展

金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)是一类低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白。由于水生生物体的MTs能被金属诱导,而且诱导程度与水环境重金属浓度之间存在一定的相关性,可间接反映出水环境中重金属的污染水平,因此,海洋动物体内的MTs已被认为是海水和沉积物重金属污染的生物标志物。近20 a来,为了将MTs应用于海洋污染的生物监测,国内外学者先后研究了多种分析技术及相应的提取方法。本文对目前已报道的海洋动物MTs提取与检测技术进行了评述,并根据存在的不足提出了今后的研究重点。

镉污染对不同生境拟水狼蛛氧化酶和金属硫蛋白应激的影响

为探讨镉(Cd)对机体抗氧化功能及金属硫蛋白(MT)的影响,在室内分别用不添加Cd2+和添加浓度为20 mg/kg Cd2+培养基培养的黑腹果蝇来饲喂4种不同生境下(S1,S2,S3和S4)拟水狼蛛,于饲喂5d、10d和20d后,分别测定其体内MT和丙二醛(MDA)的含量及超抗氧化酶(GST、SOD和CAT)活性。结果表明:(1)不同生境拟水狼蛛用不添加Cd2+培养基培养的黑腹果蝇饲喂后,不添加Cd2+对照组拟水狼蛛镉的积累量和MT含量无显著变化,但均显著低于添加Cd2+污染组。添加Cd2+污染组拟水狼蛛镉的积累量和MT含量都显著高于对照组,且均随着饲喂时间的延长而显著升高,具有明显的时间-效应关系(P<0.05)。(2)在饲喂5d和10d后,不添加Cd饲喂的拟水狼蛛MDA含量和抗氧化酶系差异都不显著。添加Cd2+污染组(S1,S2和S3)MDA含量显著高于对照组(S4),MDA含量与饲喂时间呈显著正相关(P<0.05);GST、SOD和CAT等抗氧化酶活性污染组显著低于对照组,与饲喂时间呈显著负相关(P<0.05);饲喂20d后,污染组MDA含量和抗氧化酶(SOD和CAT)活性均与对照组无显著差异,但GST活性差异显著。

菲律宾蛤仔金属硫蛋白的提取方法优化

为了利用双壳类动物金属硫蛋白(MTs)指示海洋重金属污染,有必要确定有效提取这种生物标志物的方法。本研究以暴露于含镉海水的菲律宾蛤仔内脏为试验材料,依次采用正交设计和单因素设计对内脏MT(以粗提液中的巯基含量表示)的提取工艺条件进行优化。所得到的最佳匀浆条件为:Tris-HCl缓冲液浓度为0.02 mol/L,pH值7.8,内脏与缓冲液的质量体积比(m/v)为1/5,其中,缓冲液的浓度对提取效果影响较大。最佳除杂条件为:匀浆液首先在4℃、20 000 g离心30 min,再于80℃水浴加热10 min,然后于4℃15 000 g离心10 min。这些结果有助于重金属生物监测中蛤仔MT的经济高效提取和共存杂蛋白干扰的有效去除。

青蛤(Cyclina sinensis)金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因的克隆与表达分析

利用构建的cDNA文库及高通量测序方法,获得金属硫蛋白及硫氧还蛋白基因全长。结果表明,青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白的cDNA全长分别为776bp和804bp,金属硫蛋白基因编码74个氨基酸,包含7个CXC特征结构;硫氧还蛋白基因编码165氨基酸,包含5个氨基酸构成的活性中心。采用实时定量PCR方法分析了两种基因在Cd2+胁迫下的表达变化,结果显示,金属硫蛋白基因在Cd2+胁迫下6—12hmRNA表达量急剧上升,与对照组有显著性差异(P<0.01)。硫氧还蛋白基因在Cd2+胁迫下mRNA在6h明显升高,在6—24h与对照组出现显著性差异(P<0.05)。说明Cd2+能够诱导青蛤金属硫蛋白和硫氧还蛋白基因表达的时序性升高,二者的转录过程反映了贝类抵御重金属胁迫的分子调控过程。

饲粮中不同锌源及锌水平对固始鸡和AA肉鸡肝脏金属硫蛋白含量及基因表达的影响

为了研究肉鸡肝脏中金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量和MT mRNA表达水平作为评定锌源生物利用率的有效性,在固始鸡和AA肉鸡饲料中添加不同水平的饲料级硫酸锌(ZnSO4·H2O)、氧化锌(ZnO)和氨基酸络合锌(ZnAA),分别测定了2、3、4、5和6周龄末肝脏中MT含量和MT mRNA的表达水平。结果表明:品种间肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平差异极显著,固始鸡高于AA肉鸡。锌源和锌添加水平对所测定指标产生显著影响,氨基酸络合锌显著高于硫酸锌,这两种锌源极显著高于氧化锌;随着锌添加水平增加,肉鸡肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平提高,锌水平之间差异极显著。4周龄前,随着周龄增长,肝脏中MT含量和MT mRNA水平显著升高,而4周龄后随周龄显著降低。以肝脏中MT含量评定的锌源间相对生物利用率与以MT mRNA表达水平为指标评定的结果一致性较好,说明肝脏中MT含量和MTmRNA表达水平是评定锌源相对生物利用率的有效指标,相比较而言,MT含量受品种、周龄和锌添加水平的影响大于MTmRNA表达水平。

稀土元素钕对菲律宾蛤仔金属硫蛋白的诱导效应

稀土元素能否诱导海洋生物合成MTs(金属硫蛋白),将影响到MTs对海水重金属的指示作用.以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)为试验动物,采用含稀土Nd3+的人工海水对其进行暴露培养,测定蛤仔鳃部和内脏中MTs含量随暴露剂量和时间的变化.结果表明,Nd3+暴露能够增加蛤仔体内MTs含量.ρ(Nd3+)为0.1～10μg/L时能明显促进蛤仔鳃和内脏MTs的合成;蛤仔在ρ(Nd3+)为1μg/L下暴露培养7 d,内脏MTs含量达到最高水平;同时,光谱扫描及SDS-PAGE分析表明,Nd3+诱导的蛤仔内脏中MTs在258 nm处有特征吸收峰,主要以二聚体和三聚体的形式存在,分子质量分别为13.0和18.1 ku.

金属硫蛋白在动物营养学上的应用

综述了金属硫蛋白(MT)在动物的健康、疾病以及生长性能等方面的重要作用。MT能参与畜禽体内微量元素Cu、Zn等的代谢,可利用MT来评价动物机体Zn的营养状态;MT具有抗应激的作用;MT有重金属解毒作用,在高铜、高锌日粮的促生长机理中发挥重要作用;MT促进动物机体生长发育;此外,MT在Se对动物机体的各种生理作用中发挥重要作用。

猪金属硫蛋白抗体的制备

以自猪肝提取的金属硫蛋白(MT)与牛备清白蛋白(BSA)偶联物为抗原,免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体。结果表明:加强免疫间隔时间10 d,MT首次免疫量保持在16～32μg/只,加强免疫时用量依次加倍,其免疫效果最佳,可使大部分小鼠抗血清效价达到1:16以上。随后,将这部分抗血清IgG提纯并达到电泳纯,经直接ELISA鉴定其确为猪MT的特异性抗体,表明可用于酶标记方法检测猪MT。

镧(Ⅲ)离子诱导的菲律宾蛤仔金属硫蛋白性质研究

稀土离子能否诱导海洋生物的金属硫蛋白(MT)合成,将影响到MT对海水重金属的指示作用.以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)为试验动物,采用含镧(Ⅲ)离子(La3+)的人工海水对其进行暴露培养,测定蛤仔鳃部和内脏中MT含量.结果表明,La3+暴露能够增加蛤仔体内MT含量,其中,10～1×100μg·L-1的La3+对鳃部诱导作用较大;10～1×10000μg·L-1的La3+对内脏MT均有较好诱导;同时,过柱层析洗脱液的光谱扫描及十二烷基的硫酸盐钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析表明,La3+诱导的蛤仔内脏中的MT在258nm处有特征吸收峰,主要以二聚体和三聚体的形式存在,分子量为13.1kD和18.3kD.

子宫内膜癌MTS1/p16基因的表达及临床意义

为探讨MTS1/p16基因在子宫内膜癌中的发生发展关系 ,对子宫内膜癌及癌前病变组织MTS1/p16蛋白表达进行免疫组化测定。结果 :p16蛋白广泛存在于子宫内膜癌、癌前病变和正常子宫内膜组织中 ,表达分别为5 1.85 %、76 .5 9%与 10 0 .0 0 % ;p16表达与细胞恶性程度呈负相关。提示p16基因突变导致细胞周期增殖失控 ,是内膜癌发生发展的一个重要环节。

金属硫蛋白和瑞舒伐他汀对小鼠动脉粥样硬化和SM22α表达的影响

目的 探讨金属硫蛋白（MT）和HMG-CoA还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化以及血管平滑肌22α蛋白（SM22α）表达的影响.方法 30只6周龄雄性ApoE基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组、瑞舒伐他汀组、金属硫蛋白组,高脂饮食喂养13周;10只背景品系雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周.13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇（TCH）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）的水平,处死小鼠后取主动脉,剪取主动脉弓部位5 mm长主动脉用10％甲醛固定,石蜡包埋,切片,HE染色及SM22α免疫组织化学染色;其余标本-80℃保存,取100 mg主动脉组织两份,分别提取总蛋白和RNA,并做WesternBlot和RT-PCR检测,观察主动脉血管壁形态学变化,定性和定量分析主动脉组织SM22α表达强度变化.结果 与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀组血清中TCH、TG、LDL-C水平显著降低（P＜0.05）;金属硫蛋白组与高脂高脂模型组比较,TCH、TG、LDL-C水平无统计学差异（P＞0.05）;和正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR方法分析主动脉SM22α蛋白和mRNA的表达均明显减少;金属硫蛋白和瑞舒伐他汀组主动脉粥样硬化病变程度减轻,SM22α蛋白和mRNA的表达均增加.结论 金属硫蛋白对血脂无明显影响,瑞舒伐他汀降低血脂作用明显;ApoE基因缺陷小鼠主动脉组织动脉粥样硬化明显且SM22α表达减少,金属硫蛋白和瑞舒伐他汀可减轻主动脉粥样硬化病变程度并可增加主动脉SM22α的表达.

pET15b-pep-1-p27mt的构建、表达及意义

构建细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)PEP-1和细胞周期抑制蛋白p27mt的重组体,并在大肠杆菌中表达。将已构建的表达细胞周期抑制蛋白p27mt的基因,克隆入pET15b-pep-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内,以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果:成功地构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,并在IPTG诱导下获得特异性的表达。PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡提供了理论基础。

MT对热应激奶牛外周血淋巴细胞凋亡相关基因cytc和Fas表达水平的影响

为探讨外源性金属硫蛋白(Metallothionein,MT)对热应激中国荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞凋亡率及细胞周期的影响及其机理,选取20头中国荷斯坦奶牛经产泌乳母牛,随机均分为A、B、C、D 4组,分别按每头0(对照)、4.0、8.0和12.0 mg的剂量经颈静脉注射Zn-MT,于试验第1(注射Zn-MT之前)、21、36、51和61天逐头采取血样,测定不同剂量的外源性MT对热应激奶牛血淋巴细胞凋亡基因cytc和Fas表达水平的影响。结果表明,注射外源性MT后,各试验组奶牛外周血淋巴细胞中促凋亡基因cytc和Fas的表达水平均有不同程度的降低,其中,B组奶牛cytc基因表达水平的降幅达到显著(P<0.05)水平,D组奶牛Fas基因表达水平的降幅表达水平的降幅达到极显著(P<0.01)水平。