MT-5细胞表达HBsAg的进一步研究

进一步观察了基因工程转化细胞株MT-5中HBsAg的表达,结果表明,HBsAg的表达分泌稳定,培养48小时收获,产率最佳;培养基中的小牛血清以10％为最适,通过建立多个单细胞亚克隆株证明,MT-5细胞中HBsAg的表达存在不均一性,亚株的HBsAg表达不受糖皮质激素的诱导,但受Cd^(2+)和Zn^(2+)的诱导,且细胞能够耐受较高浓度的ZnCl_2,Cd^(2+)和Zn^(2+)的最佳诱导浓度分别为1μM和100μM,最高诱导效率为350％,最高诱导产量达2.5mg/l。 MT-5培养上清中的HBsAg经亲和层析初步纯化后,SDS-PAGE呈现两条特异性多肽,分子量为23k和27k,它们代表HBsAg的主要多肽及其糖基化产品,DNA杂交结果不但确证重组S基因存在于MT-5细胞中,而且揭示重组DNA以游离体状态存在,似乎不进行整合和重排,不同亚系细胞中重组DNA的拷贝数估算为11～27个/细胞,拷贝数与HBsAg表达量有正相关关系。