MT1E在肝癌细胞中的作用及不同中医治法对其表达调控的差异研究

目的:比较常用不同中医治法对MT1E表达调控作用的差异,以及初步探讨MT1E在肝癌细胞中的生物学功能。方法:(1)以DEN诱发大鼠肝癌形成为模型,应用基因芯片检测健脾益气、清热解毒、活血化瘀等常用中医治法对MT1E基因表达的差异;(2)针对MT1E基因mRNA序列设计2个siRNA靶点,分别经质粒重组后电转入SMMC-7721肝癌细胞株中,用实时荧光定量PCR技术检测MT1E基因的表达情况,用MTT法检测细胞生长增殖情况。结果:(1)芯片结果显示,MT1E基因在肝癌形成后表达明显增加,不同中医治法对其具有不同程度的调控作用,其中健脾益气法的下调作用最明显;(2)成功筛选到MT1E基因RNA干扰的1个有效靶序列,经实时荧光定量PCR技术检测到电转染72h后,该基因的表达水平明显降低;(3)MTT的结果显示,有效干扰靶点电转染144h后细胞的生长增殖得到了明显的抑制。讨论:MT1E基因是中医健脾益气法防治原发性肝癌的有效靶点之一,经生物学功能研究表明,该基因的高表达与肿瘤细胞的恶性增殖有关。

缺氧诱导MT1E表达对三阴型乳腺癌细胞上皮-间质转化的影响

目的探究缺氧诱导金属硫蛋白1E(metallothionein 1E,MT1E)表达对缺氧状态下三阴型乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞体外上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法将MDA-MB-231细胞分为常氧培养组、低氧培养组和RNAi低氧培养组,采用qRT-PCR、Western blot法及免疫组化法检测MT1E、E-cadherin与vimentin的mRNA表达量和蛋白表达水平;Transwell实验和细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭和转移能力。结果缺氧可诱导MDA-MB-231细胞内MT1E表达上调并伴有E-cadherin表达下调和vimentin表达上调;Transwell实验和细胞划痕实验发现细胞侵袭数量和迁移率明显增加(P均<0.05);靶向干扰MT1E生成后E-cadherin表达回升,vimentin表达下降,MDA-MB-231细胞侵袭数量和迁移率明显降低(P均<0.01)。结论MDA-MB-231细胞内的MT1E可由缺氧诱导表达上调同时对缺氧状态下的EMT进程具有促进作用。

MT1E在三阴性乳腺癌中的表达和意义

目的 检测金属硫蛋白1E(Metallothionein1E,MT1E)在三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cance,TNBC)中的表达,分析其与临床病理特征和预后的相关性。方法 选取2015年1月至2016年12月间于我院行手术治疗的45例TNBC患者癌组织及其对应的癌旁组织标本,应用免疫组织化学SP法检测TNBC组织和癌旁组织中MT1E的表达并分析MT1E表达与TNBC患者临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型评估MT1E表达与TNBC患者预后之间的关系。结果 MT1E在TNBC组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05),MT1E高表达的TNBC患者更容易出现淋巴结转移、高TNM分期和高组织学分级(均P<0.05);Kaplan-Meier法分析发现,与低表达组相比,MT1E高表达组的无病生存率和总生存率明显下降(P<0.05);Cox比例风险回归模型结果提示MT1E高表达、淋巴结转移和高TNM分期是TNBC患者复发的独立危险因素,MT1E高表达和高TNM分期是TNBC患者死亡的独立危险因素。结论 MT1E在TNBC组织中高表达,且与淋巴结转移、高TNM分期、高组织学分级和TNBC患者的预后存在相关性,有望成为临床诊断和治疗TNBC的新靶点。

金属硫蛋白1E对胰腺癌SW1990细胞生长的影响

目的 观察外源性人金属硫蛋白1E（MT1E）基因对胰腺癌SW1990细胞生长的影响.方法 构建MT1E基因真核表达载体,转染SW1990细胞并获得阳性单克隆细胞.用Westernblot技术检测转染前后MT1E蛋白表达,噻唑蓝（MTT）实验检测其增殖能力的变化,流式细胞仪分析细胞周期时相分布.同时检测Cyclin D1与p53的表达.结果 MT1E融合蛋白在SW1990MT1E细胞中表达.MTT结果表明,与SW1990和SW1990MT1E空细胞比较,SW1990MT1E细胞增殖速度明显增快.SW1990MT1E细胞与SW1990和SW1990空细胞比较,G0/G1期细胞明显减少,S期明显增多,差异有统计学意义.SW1990MT1E较SW1990空的细胞Cyclin D1与p53表达明显升高.结论 MT1E能够促进SW1990增殖,可能和上调Cyclin D1促使细胞进入S期增多,通过失活p53蛋白使细胞恶性变.