MTH1(mut T homolog1)是Mut T的同源酶,是一种核苷酸焦磷酸酶,主要参与DNA损伤修复过程,尤其在肿瘤细胞的DNA复制过程中发挥着重要角色。最新的研究表明,MTH1可以清除肿瘤细胞中受损DNA功能结构的氧化构件,使得肿瘤细胞继续分裂与增殖,...MTH1(mut T homolog1)是Mut T的同源酶,是一种核苷酸焦磷酸酶,主要参与DNA损伤修复过程,尤其在肿瘤细胞的DNA复制过程中发挥着重要角色。最新的研究表明,MTH1可以清除肿瘤细胞中受损DNA功能结构的氧化构件,使得肿瘤细胞继续分裂与增殖,从而维持肿瘤细胞的生存,而更为重要的是正常细胞不需要MTH1,因此,MTH1有可能只与异常的细胞生长密切相关,这使得MTH1作为治疗靶点成为人们关注的焦点。该文着重对MTH1与肿瘤关系最新的研究成果进行综述,探讨MTH1维持肿瘤生长的相关机制及其与肿瘤治疗的关系,为靶向MTH1治疗肿瘤提供新的思路,为肿瘤研究工作者提供重要参考。展开更多
目的建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响。方法设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包...目的建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响。方法设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包装病毒颗粒,将病毒转染HeLa细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性克隆株,用western b lot技术检测克隆株的MTH1的表达量以确定干扰效果最理想的稳定细胞株,用API5000型质谱仪检测稳定细胞株RNA中的8-oxoG与G的含量以评价RNA的氧化程度。结果本研究设计的3条siRNA中有2条干扰效率可达90%以上,所建立的敲减MTH1基因HeLa细胞稳定细胞株的干扰效果达80%以上,质谱检测结果表明MTH1基因低表达的稳定细胞株每106个G中含有14.9个8-oxoG,而对照细胞中则仅含9.7个8-oxoG。结论 MTH1基因的低表达可引起HeLa细胞中RNA氧化程度明显升高。展开更多
目的探讨MutT同源蛋白1(MutT homolog protein 1,MTH1)的表达对结肠癌(colorectal cancer,CRC)进展和预后的影响。方法笔者首先使用免疫组织化学方法检测了87例结肠癌组织和配对的癌旁正常组织中MTH1蛋白的表达,应用χ^2检验分析MTH1蛋...目的探讨MutT同源蛋白1(MutT homolog protein 1,MTH1)的表达对结肠癌(colorectal cancer,CRC)进展和预后的影响。方法笔者首先使用免疫组织化学方法检测了87例结肠癌组织和配对的癌旁正常组织中MTH1蛋白的表达,应用χ^2检验分析MTH1蛋白表达量与结肠癌临床病理特征之间的相关性,应用COX比例回归风险模型分析MTH1蛋白表达对结肠癌根治术后患者的总体生存预后判断价值。笔者使用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测了6株结肠癌细胞HCT116、SW480、SW620、LoVo、COLO320、T84及人胚胎肠黏膜细胞CCC-HIE-2中MTH1基因mRNA和蛋白的表达水平,应用独立t检验比较了肿瘤细胞和正常肠黏膜上皮细胞中MTH1基因mRNA和蛋白相对表达量的均值,并且应用Spearman等级相关系数检测MTH1基因mRNA和蛋白表达的相关性。笔者使用本实验室构建成功的siRNA干扰MTH1基因mRNA表达的HCT116和LoVo细胞株,利用CCK-8和Transwell实验检测MTH1蛋白低表达对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果在87例结肠癌组织中,MTH1蛋白高表达患者手术治疗后总的生存率显著低于MTH1低表达患者(P=0.005)。COX多因素分析表明MTH1蛋白高表达是结肠癌预后不良的独立预测因素(HR=2.256,95%CI:1.008~5.049,P=0.048)。结肠癌细胞株中MTH1基因mRNA和蛋白表达量显著高于正常的肠黏膜细胞,而且mRNA与蛋白的表达呈正相关。siMTH1干扰MTH1基因mRNA表达量的下降与HCT116和LoVo细胞增殖、迁移、侵袭能力的下降显著相关(P<0.05)。结论MTH1蛋白表达影响了结肠癌的进展和预后。展开更多
文摘MTH1(mut T homolog1)是Mut T的同源酶,是一种核苷酸焦磷酸酶,主要参与DNA损伤修复过程,尤其在肿瘤细胞的DNA复制过程中发挥着重要角色。最新的研究表明,MTH1可以清除肿瘤细胞中受损DNA功能结构的氧化构件,使得肿瘤细胞继续分裂与增殖,从而维持肿瘤细胞的生存,而更为重要的是正常细胞不需要MTH1,因此,MTH1有可能只与异常的细胞生长密切相关,这使得MTH1作为治疗靶点成为人们关注的焦点。该文着重对MTH1与肿瘤关系最新的研究成果进行综述,探讨MTH1维持肿瘤生长的相关机制及其与肿瘤治疗的关系,为靶向MTH1治疗肿瘤提供新的思路,为肿瘤研究工作者提供重要参考。
文摘目的建立敲减MTH1基因的HeLa细胞稳定细胞株,研究MTH1基因的低表达对HeLa细胞内RNA氧化程度的影响。方法设计并合成针对MTH1基因的3条siRNA,分别转染HeLa细胞,选择干扰效果最为理想的靶序列连接入反转录病毒载体Retro-Q,在293T细胞内包装病毒颗粒,将病毒转染HeLa细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性克隆株,用western b lot技术检测克隆株的MTH1的表达量以确定干扰效果最理想的稳定细胞株,用API5000型质谱仪检测稳定细胞株RNA中的8-oxoG与G的含量以评价RNA的氧化程度。结果本研究设计的3条siRNA中有2条干扰效率可达90%以上,所建立的敲减MTH1基因HeLa细胞稳定细胞株的干扰效果达80%以上,质谱检测结果表明MTH1基因低表达的稳定细胞株每106个G中含有14.9个8-oxoG,而对照细胞中则仅含9.7个8-oxoG。结论 MTH1基因的低表达可引起HeLa细胞中RNA氧化程度明显升高。