MTMR3基因多态性与非吸烟者肺癌易感性

目的位于染色体22q12.2区域的MTMR3(myotubularin related protein 3)基因是调控肌维管束蛋白表达的基因,MTMR3基因过度表达与肿瘤等疾病发生有关。本研究旨结合表达数量性状(expression Quati tatire Trait Loci,eQTL)信息探讨MTMR3基因多态性与非吸烟者肺癌易感性的关系,为探究肺癌的发病机制提供依据。方法对肺癌易感区域22q12.2进行连锁不平衡和eQTL分析,筛选具有调控基因表达的致病位点并预测其调控的基因。本研究采用病例对照研究方法,病例为2013-03-05-2014-12-30辽宁省肿瘤医院(96例)、中国医科大学附属第一医院(92例)、中国医科大学附属第四医院(90例)、沈阳军区总医院(95例)和人民解放军沈阳二0二医院(88例)5所三甲级医院的原发性肺癌患者461例(病例组),同期社区中健康对照472名(对照组)。应用TaqMan基因分型技术对rs36605位点进行基因分型。采用t检验比较年龄在病例组与对照组间分布的差异,采用χ~2检验比较性别、各基因型以及各环境暴露因素在病例组与对照组间分布的差异,应用Logistic回归计算OR值及其95%置信区间(CI)。结果经eQTL分析得到rs36605位点是MTMR3基因的一个顺式eQTL,rs36605位点可能与MTMR3基因的表达有关。以TT基因型为参照,AT基因型(OR=0.81,95%CI为0.60~1.10,P=0.178)和AA基因型(OR=1.85,95%CI为0.61~5.59,P=0.276)与肺癌的患病风险无统计学关联。也未发现在显性模型(OR=0.85,95%CI为0.63~1.15,P=0.291)以及隐形模型(OR=1.94,95%CI为0.64~5.86,P=0.238)中存在此关联。试验验证了烹饪油烟暴露增加了肺癌的患病风险,调整OR=1.61,95%CI为1.06~2.45,P=0.025,但未发现烹饪油烟暴露与rs36605位点多态性之间存在交互作用,P>0.05。结论试验未发现,22q12.2区域内的rs36605位点多态性与非吸烟者肺癌的易感性有关,尚不能得到MTMR3基因多态性与非吸烟者肺癌的易感性有关。

MTMR3基因1670C>T多态性与胃癌易感性的关系研究

目的：探讨MTMR3基因3＇非翻译区（3＇UTR）1670C〉T多态性与胃癌发病的关联。方法：通过病例对照研究,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法检测500例胃癌患者和502例正常对照者MTMR3基因1670C〉T位点的基因型,通过非条件Logistic回归,并校正了性别、年龄、吸烟、饮酒的影响,分析该位点与胃癌易感性的关系。结果：MTMR3基因1670C〉T基因型分布在病例组和对照组均符合Hardy-Weinberg平衡（P〉0.05）。经过年龄、性别、吸烟和饮酒状况校正的非条件logistic回归分析发现,与CC基因型患者相比,含有T等位基因的基因型（CT和TT）患者胃癌的发病风险增高（校正优势比=1.72,95%置信区间=1.36-2.16,P=3.99×10^-5）。结论：MTMR3基因1670C〉T多态性位点与胃癌发病存在显著性关联,1670T可能是胃癌发生的一个遗传危险因素。

微小RNA-10a靶向MTMR3对胶质瘤细胞生长和迁移的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-10a对胶质瘤细胞生长和迁移的影响及分子机制.方法收集脑胶质瘤和癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-10a的表达水平.在U251脑胶质瘤细胞株中构建miR-10a过表达细胞株(实验组)和对照细胞株(对照组),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒和Transwell分析不同处理的脑胶质瘤细胞的增殖和迁移能力.采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-10a与靶基因的关系;并在miR-10a过表达细胞株过表达靶基因,分析细胞的增殖和迁移能力.采用t检验分析两组各指标差异.结果与脑胶质瘤癌旁组织(1.01±0.19)比较,脑胶质瘤组织中miR-10a表达水平(2.38±0.28)显著上调,差异有统计学意义(t=3.918,P<0.05).实验组细胞增殖能力较对照组显著增加,差异有统计学意义(F=2.991,P<0.05).与对照组(48.67±13.42)个比较,实验组肿瘤细胞迁移能力(128.32±19.32)个显著增加,差异有统计学意义(t=4.109,P<0.05).生物信息学分析显示MTMR3是miR-10a的靶基因.与对照组细胞(1.19±0.21)比较,实验组细胞MTMR3蛋白的表达水平显著下调(0.21±0.09),差异有统计学意义(t=3.819,P<0.05).在补偿实验中,与过表达对照载体的细胞比较,过表达MTMR3蛋白则显著抑制了脑胶质瘤细胞的增殖和迁移,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-10a在脑胶质瘤中呈现高表达,并通过调节MTMR3蛋白调控着脑胶质瘤细胞的增殖和迁移.

干扰Mtmr 3基因对C2C12细胞增殖与分化的影响

旨在探究肌管相关蛋白3(myotubularin related protein 3,Mtmr 3)对C2C12细胞增殖与分化的调控作用及机制。本试验以小鼠成肌细胞系(C2C12)为试验材料,分别使用qRT-PCR和免疫荧光染色检测Mtmr 3基因在成肌细胞生长期与分化期的mRNA表达水平和分化第6天时的分布形态。合成Mtmr 3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),试验分为siRNA NC对照组和Mtmr 3 siRNA处理组(n=3),利用EdU、CCK-8、qRT-PCR、Western blot技术检测Mtmr 3 siRNA对成肌细胞增殖与分化的影响,并通过信号通路研究调控成肌细胞增殖与分化的机制。结果显示,Mtmr 3在生长期的mRNA水平表达量总体呈下降趋势,而在分化期的表达量呈逐渐上升趋势,Mtmr3免疫荧光染色呈肌管状。干扰Mtmr 3后,细胞内Mtmr 3基因的mRNA和蛋白表达水平均极显著地降低(P<0.01);在增殖试验中,转染细胞Mtmr 3 siRNA后,极显著地增加了EdU阳性细胞占总细胞的比率和细胞活力(P<0.01);干扰Mtmr 3表达后,Pcna和Cdk4的mRNA与蛋白表达水平极显著地升高(P<0.01),Ccnd基因的mRNA表达水平极显著地升高(P<0.01)。在分化试验中,转染Mtmr 3 siRNA后极显著抑制了分化标志基因Myhc蛋白的表达水平(P<0.01),极显著抑制细胞分化第4和6天Mtmr 3、Myog和Myhc基因在mRNA的表达水平(P<0.01)。在增殖期和分化期干扰Mtmr 3表达后,Mtor和P70s6k的磷酸化蛋白表达水平分别极显著升高和极显著降低(P<0.01)。CCK-8的结果表明,与对照组相比,Mtmr 3 siRNA能够抵消部分Mtor通路特异性抑制剂Rapamycin(Rapa)的抑制作用,促进成肌细胞增殖(P<0.01);在细胞分化时加入Rapa处理成肌细胞,细胞内Mtor、P 70s6k、Myog和Myhc基因的mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。综上所述,Mtmr 3在成肌细胞生长期的表达量呈下降趋势,而在分化期的表达量呈逐渐上升趋势,Mtmr3免疫荧光染色呈肌管状。干扰Mtmr 3基因表达,通过激活Mtor通路促进成肌细胞增殖,通过失活Mtor通路抑制成肌细胞分化。

miR-99a对乳腺癌细胞侵袭和迁移的负向调控机制研究

目的探讨miR-99a对乳腺癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响乳腺癌细胞侵袭及迁移的可能分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中miR-99a的表达。运用脂质体介导的转染方法分别将miR-99a模拟物(miR-99a mimics)、miR-99a抑制物(miR-99a inhibitors)以及相应对照miRNA转染MDA-MB-231和MCF-7细胞,通过Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕实验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-99a的靶基因,并对靶基因进行验证。结果(1)高转移潜能的MDA-MB-231细胞中miR-99a表达明显低于低转移潜能的MCF-7细胞,划痕实验中转染miR-99a mimics的与转染control mimics的MDA-MB-231细胞比较迁移能力显著减弱(P<0.05),而MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力明显增强(P<0.01)。(2)Transwell的侵袭及迁移实验显示,转染miR-99a mimics后MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力明显减弱(P<0.01);MCF-7细胞转染miR-99a inhibitors后迁移能力增强(P<0.01),而侵袭能力基本不变(P>0.05)。(3)生物信息学方法预测徼管相关蛋白(MTMR3)是miR-99a的靶点,实时定量PCR和3'UTR荧光素酶报告基因实验验证了该靶点。(4)干扰了MTMR3后MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力明显减弱。结论(1)miR-99a对乳腺癌细胞的侵袭及迁移发挥负向调控作用。(2)miR-99a可能通过靶向于MTMR3发挥其对乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用。