MTT法用于中药成分细胞毒性和增殖检测的干扰因素及控制措施

3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法具有操作简单和成本低廉等优点,被广泛应用于中药成分的细胞毒性和对细胞增殖影响等研究。然而,细胞的数量和密度、MTT浓度和作用时间等实验条件会干扰检测结果的准确性。另外,由于中药成分种类繁多而且化学结构复杂,可能导致吸收光谱漂移、形成近似检测波长的吸收峰及干扰细胞代谢的活性等,影响MTT检测结果的准确性。对近年的相关文献进行整理,归纳和分析了影响MTT实验的实验条件、优化措施和质量控制,归类了检测需要注意的某些中药成分,总结了替代MTT法的其他实验及MTT与其他实验的联合应用,对应用中存在的问题进行了探讨和展望,期望为MTT法在中药成分相关实验中的合理应用提供参考。

MTT法与流式细胞术检测肺炎合剂促进T淋巴细胞转化的实验研究

目的：探讨肺炎合剂对小鼠Ｔ淋巴细胞转化的影响，并试图为中药研究淋巴细胞转化提供检测方法依据。方法：通过模仿病毒性肺炎患儿淋巴细胞转化率降低的机体，用氢化可的松建立免疫低下小鼠模型，以不同剂量药液灌胃给药后，采用ＭＴＴ法和流式细胞仪检测法对比观察肺炎合剂对ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾Ｔ淋巴细胞转化的作用。结果：肺炎合剂使正常和免疫低下小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖能力显著增强。结论：肺炎合剂对小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖反应的促进作用，可能是该药治疗作用机理之一。并认为流式细胞术是测定淋巴细胞转化的一种准确而可靠的万法。

利用MTT法测定杀虫剂对家蚕细胞的毒力

利用[3 (4,5 二甲基噻唑 2) 2,5 二苯基 ]四氮唑嗅盐法 (MTT法 )和叶片浸渍法分别测定了毒死蜱、丁硫克百威和阿维菌素对家蚕卵巢细胞 (BmN)和家蚕活体 (2龄幼虫 )的毒力,结果表明,两种生测方法获得的毒力测定结果并不完全一致,毒死蜱和丁硫克百威对家蚕细胞和家蚕2龄幼虫的毒力差异均极显著。因此细胞的毒力测定尚不能替代昆虫活体测定。用MTT法测定了毒死蜱原药和乳油对家蚕卵巢细胞的毒力,结果表明同一杀虫剂的原药与制剂对细胞的毒力有较大差异。因此研究杀虫剂对离体细胞的毒力时,建议使用原药。

台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As_2O_3细胞毒性作用中的意义

目的筛选三氧化二砷（As203）对HL一60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法，并对其结果进行分析。方法采用台盼蓝拒染法、M1Tr法、CCK～8法测定不同浓度的As203，体外作用HL一60细胞株的细胞存活率．采用单因素方差分析其与剂量一时间依赖反应的关系。结果4．0、8．0μmol／L作用48、72h及8．0μmol／L作用24h被染细胞小于5％，其余均未观察到蓝染细胞。MTY法检测在1．0～8．0μmol／LAs20，剂量范围内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。CCK-8法检测在0．5～8．0μmol／LAs203剂量范嗣内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低，As20，的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应。结论在研究As203的细胞毒性时，用CCK-8法优于M11’法，均比台盼蓝法更为灵敏。

反复熔铸Ni-Cr烤瓷合金体外细胞毒性实验(MTT法)

目的:初步评价反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同熔铸次数Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液培养小鼠结缔组织成纤维细胞(L-929)的结果,从而对反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性进行初筛。结果:各浓度实验组细胞生长形态良好、细胞毒性级为0～1级;经过2～5次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液、不同培养时间的A492均值与经过1次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金相应A492均值无显著性差异(P>0.05)。结论:初步认为Ni-Cr烤瓷合金经过1～5次熔铸后具有较好的生物相容性。

MTT法分析中药含药血清对体外软骨细胞增殖影响的研究

以MTT法观察补肾和柔肝中药含药血清对体外软骨细胞的影响。结果 :在两次连续灌胃 3h后所取血清浓度为 5 %和 10 %时 ,对软骨细胞有促进增殖的作用 ;血清浓度为 5 %时 ,两药之间作用无差异 ,而 10 %时 ,补肾方作用优于柔肝方。为便于以下比较 ,将血清浓度定在 5 % ;长时间 ( 8d)灌胃和短时间 ( 1d)所取血清对软骨细胞的增殖作用无差异 ;以 0 5、1、5倍等效剂量灌胃所取血清对软骨细胞的增殖作用未呈量效依赖关系 。

MTT法检测通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨通络止痛方对人膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法:取本院行全膝关节置换术患者术中废弃滑膜组织,经I型胶原酶消化后进行原代培养,取3~4代成纤维细胞进行高、中、低浓度通络止痛方干预。应用四甲基偶氮唑盐法测定(MTT)法检测KOA滑膜细胞的增殖水平,并用倒置显微镜下观察各浓度下的细胞形态。结果:加药组组间与加药组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测随通络止痛方浓度减小KOA滑膜细胞在490 nm波长处吸光OD值数越大;高中浓度组抑制率为正值,随浓度增加抑制率增大,低浓度抑制率为负值,随浓度降低抑制率减少。结论:高、中浓度通络止痛方对滑膜细胞增殖有抑制作用,低浓度组的通络止痛方对滑膜细胞有增殖有促进作用。

MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性

[目的]建立一套适合于实验室高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。[方法]通过MTT法,对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术等8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行初测;描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况。[结果]受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但萎缩,边缘清晰化,与生长状况良好的细胞形态有明显区别;浓度为1.0～1.5mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%,且抑制作用随着浓度的增加而加强。[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型。

MTT法检测纳米金粒子体外细胞毒性的研究

目的研究球形纳米金粒子对人成纤维细胞的体外细胞毒性作用;方法应用柠檬酸钠还原法制备纳米金溶胶,将纳米金溶胶制备成不同浓度的含金培养液,采用MTT法体外检测其对人成纤维细胞的细胞毒效应。结果培养液中加入不同浓度纳米金溶胶(1.875 mg.L-13、.750 mg.L-17、.500 mg.L-11、5.000 mg.L-13、0.000 mg.L-1)各组细胞相对增殖率(RGR)分别为112.653%,111.293%,89.524%,72.109%,46.803%,加入15.000 mg.L-1、30.000 mg.L-1纳米金溶胶组,其RGR与空白对照组有显著差异,1.875 mg.L-1、3.750 mg.L-1组毒性评级为0级,7.500 mg.L-1、15.000 mg.L-1组毒性评级为1级,倒置显微镜下细胞形态正常,生长良好,30.000 mg.L-1组毒性评级为3级,镜下可见细胞明显的空泡变性;结论此种纳米金粒子的体外细胞毒性呈剂量依赖关系,低浓度纳米金粒子具有良好的生物相容性,30.000 mg.L-1纳米金粒子有中度细胞毒性。

地榆鞣质抗肝癌细胞SMMC-7721的MTT及FCM分析

目的：探讨中药成分地榆鞣质（STM，STL）的抗癌活性，并试图建立一种筛选抗癌药物的方法．方法：运用MTT法测定STM及STL对体外培养人肝癌SMMC－7721细胞的杀伤率井通过流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象DNA变化．结果：STM与STL均有明显抗癌活性，与阴性对照组相比有显著差异（P＜0．01），并具有剂量效应关系（RM=0．9615，RL=0．9531）；STM，STL与MMC联合用药抗癌活性显著增强，与单独用药组相比差异显著（P＜0．01）；流式细胞仪（FCM）分析人肝癌细胞分裂周期各时象DNA变化显示，药物作用后S期细胞明显减少，增殖指数（PI）降低，并诱导出凋亡峰（AP峰）．结论：ST的抗癌作用可能是多方面的，FCM的测定技术为筛选抗癌中药提供新的方法．

MTT法测定大肠癌化疗药物敏感性

目的 运用MTT法测定大肠癌体外对化疗药物的敏感性及其适用价值。方法 采用改良的噻唑兰 (MTT)法测定 84例结直肠癌标本对 9种化疗药物的体外敏感性 ,并运用免疫组化法检测 30例肿瘤细胞的多药耐药基因 (MDR1)。结果 84例结直肠癌细胞对化疗药物的敏感性 ,从高到低依次为 5 Fu >MMC >Ara C >HCPT >CBP >CDDP >MXT >MTX >ADM。 30例患者中 14例MDR1阳性。结论 以MTT法检测结直肠癌细胞对化疗的敏感性有助于指导临床选择肿瘤敏感的化疗药物 ,并可避免盲目选用肿瘤非敏感性化疗药对机体造成的毒性反应。在检测肿瘤对化疗药物敏感性的同时 ,建议检测多药耐药基因 ,及时发现耐药病人 ,以便采用其它有效的治疗方法。

MTT肿瘤药敏试验中培养基的选择

目的考察RPMI1640双琼脂培养基(R)对肿瘤细胞培养的选择性,选择适合的MTT法培养基。方法用R和肿瘤细胞选择性培养基(completeassaymedium,CAM)分别进行乳腺、肠、胃癌的MTT药敏试验。结果所试的3个癌种、20个药品总体来说在两种培养基中抑制率无统计学差异(P>0.05),单个药敏在乳腺癌中长春新碱、长春地辛和吡柔比星的CAM培养抑制率大于R培养(P<0.05),在肠、胃癌中无统计学差异。结论R培养肿瘤细胞的选择性和CAM相当,但鉴于R抑制成纤维细胞能力相对比CAM弱,R可能更适合含纤维细胞较少的癌种。

双琼脂MTT法测定肿瘤的药物敏感性

目的 :采用将集落法和 MTT法结合发展而成的双琼脂 MTT法以克服 MTT法中存在正常细胞干扰测定的缺点。方法 :对人肿瘤细胞及正常细胞株在双琼脂 MTT法和 MTT法光密度、抗癌药抑制率进行比较及临床实体瘤用两种方法的抗癌药抑制率进行比较。结果 :正常细胞在双琼脂 MTT法中生长不良 ,用该两种方法测定临床 2 0例食道癌对抗癌药抑制率 ,比较显示双琼脂 MTT法的抑制率大于 MTT法。结论 :双琼脂 MTT法提高了药敏结果的准确性 ,优于 MTT法。

MTT法测定瑞士乳杆菌MB2-1活菌数

以赛里木拉丝酸奶中提取的瑞士乳杆菌MB 2-1(Lactobacillus helveticus MB 2-1)为研究对象,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及测量细菌数量的范围,优化MTT法用于瑞士乳杆菌活菌计数的工作波长、MTT和DMSO用量、反应时间。结果表明:在107～109CFU/mL内测出的OD值与细菌浓度呈正向线性关系(R2>0.99),最佳反应条件为:1.0mL待测菌液与0.2mL MTT溶液在40℃条件下染色反应1h,反应液需要经过12000r/min离心10min,取离心沉淀物溶解于1.0mL二甲基亚砜中,于工作波长510nm处测定此溶液的OD值。MTT比色分析法可用于检测乳酸菌活菌数量。

卵巢癌细胞MTT法对化疗药物敏感性的研究

目的:研究卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性,从而指导临床用药。方法:选用临床上常用的20种化疗药物,应用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法,严格无菌操作,对20例卵巢实体肿瘤细胞进行化疗药药敏测定。结果:表明同一肿瘤细胞对不同化疗药物的敏感性各不相同,与药物对体内肿瘤细胞的杀伤作用呈正相关。结论:药敏结果与临床用药吻合率高,可以很好地指导临床个体化化疗。

3Y-TZP全瓷材料体外细胞毒性试验(MTT法)

目的:初步评价牙科全瓷材料3Y-TZP生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒实验(MTT法)测试不同浓度和浸提时间的材料浸提液L-929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响从而对全瓷材料3Y-TZP的生物相容性进行初筛。结果:各浓度组OD值均与阴性对照无显著性差异(P>0.05),与阳性组差异显著(P<0.01),材料毒性级别0级。结论:两种材料体外细胞毒实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性。

MTT法检测大鼠外周血淋巴细胞增殖反应探讨与应用

为了更精准简捷地评价机体的细胞免疫状态,采用MTT比色分析法检测大鼠外周血淋巴细胞的增殖能力,并对试验的最适条件进行了探讨,然后将该法应用到Transwell共培养体系中以评价H9N2AIV感染内皮细胞后对跨内皮淋巴细胞增殖能力的影响。结果表明:在96孔细胞培养板中接种密度为1.25×106个/m L的淋巴细胞于含10%FBS的RPMI 1640培养基中培养的最适时间为48 h。感染病毒后,跨内皮淋巴细胞的增殖明显受抑制;内皮完整状态下,淋巴细胞和病毒共孵育后,活病毒的量降低,而当内皮不存在或被病毒感染后,这一现象消失。结果证明作为机体细胞免疫功能评价指标之一的淋巴细胞增殖能力可采用改良后的MTT法检测。

MTT法、CPE观察法用于药物细胞毒性实验的比较与分析

目的比较和分析应用于检测药物细胞毒性的MTT法和CPE观察法。方法用MTT法和目测法分别检测麻黄、黄芩、病毒唑对Hela细胞的毒性,通过SPSS软件计算药物的TC50,用统计方法分析两种方法的差异。结果MTT法和CPE观察法得到的结果差异无统计学意义。结论药物毒性实验中MTT法较目测法更为简单直观。

应用MTT比色法评价不同牛血清促细胞生长作用

细胞培养过程中血清的选择对细胞的促生长增殖具有重要作用。本试验分别以商品新生牛血清、自制新生牛血清、自制成年牛血清培养成纤维细胞、骨髓瘤细胞、杂交瘤细胞,通过MTT比色法来判断细胞的增殖能力,进而对血清质量作出评价。结果表明,自制新生牛血清具有良好的促细胞生长作用(相对生长率>0.96),并且3次试验结果比较差异不显著(P>0.05),具有较好的重复性;而成年牛血清和无血清空白对照组促细胞作用不明显。因此应用MTT比色法能够评价血清质量。

鸡白细胞介素-6活性MTT检测方法的建立

采用白细胞介素-6依赖细胞株B9建立了鸡白细胞介素-6活性的MTT检测方法。每孔培养细胞数在2．5×10^3～4×10^4范围内D值与细胞数显示有良好的线性关系，MTT的最佳保留时间为4h，最低检测限为0．1U／mL。应用该方法检测了健康艾维菌肉鸡25例，血清chIL-6活性为（4．33±0.75）U／mL，而25例葡萄球菌病患鸡血清chIL-6的活性为（14．05±6．87）U／mL，与健康肉鸡比较差异极显著（P〈0．01），为该方法进一步临床应用奠定了基础。