MTT分析法、空斑减数法及CPE观察法评估药物体外抗病毒效果的比较与分析

目的:比较MTT分析法、空斑减数试验及细胞病变效应(CPE)观察3种方法在评估药物体外抗病毒效果分析中的优劣,为选择适宜的药物体外抗病毒效果的检测方法提供实验依据。方法:分别采用 CPE法、MTT分析法和空斑减数试验法评价大黄素于体外抗疱疹病毒 1 型、疱疹病毒 2 型和柯萨奇病毒增殖的效果,比较 3 种检测方法的结果,并分析该方法的实用性与利弊。结果:在抗疱疹病毒增殖的检测中,MTT法与空斑减数法所测结果具有显著性差异,空斑减数法比MTT法更准确,但对抗柯萨奇病毒增殖的检测,MTT法与空斑减数法无明显差异。结论:MTT法与 CPE法结合,可广泛用于对抗病毒药物的筛选,但对于疱疹病毒类非杀细胞病毒,使用空斑减数法较好。

MTT分析法检测重组成骨生长肽的活性

目的 对本研究室构建、表达的重组成骨生长肽 (rOGP)进行活性测定。方法 采用MTT分析法 ,PBS为阴性对照 ,骨宁注射液为阳性对照。结果 rOGP、骨宁注射液组OD550 值均明显高于PBS阴性对照组 ;rOGP组OD550 值又明显高于骨宁注射液组。结论 重组OGP具有促进成纤维细胞增殖活性 ,且效果明显优于目前临床常规药物骨宁注射液。

化疗药物体外药敏试验(MTT分析法)

目前,MTT分析法已被用于细胞系筛选新抗肿瘤药物,并正式用于临床.我们用MTT分析法对26例人肿瘤标本进行了化疗药物的体外药敏试验,探讨其临床应用的可能性.1 材料与方法1.1 主要试剂与仪器完全培养液 RPMI 1640培养液(美国GIBCO产品),含20%小牛血清(北京军事医学科学院),青霉素100u/ml,链霉素100μg/ml.清洗液Hanks液+青霉素、链霉素各500u/ml.消化液 0.25%胶原酶(Ⅰ型,sigma产品)+0.002%DNA酶(Fluka产品).

MTT比色分析法检测山羊白细胞介素-2方法的建立

以伴刀豆蛋白A(ConA)活化的山羊外周血单核细胞作为应答细胞 ,建立了检测山羊白细胞介素 2 (IL 2 )的MTT比色分析法。结果表明 ,以 3μg/mL的ConA浓度刺激 ,经过 36h活化所得的应答细胞活性最好 ;MTT的用量及作用时间分别以 2 0 μL( 5 0 μg/μL)及 4h为最佳 ;IL 2与活化细胞的作用时间以

改良MTT比色分析法测定乙型肝炎IL-2活性的研究

用改良MTT比色分析法,测定57例乙型肝炎患者末梢血淋巴细胞在PHA刺激下产生的白细胞介素2(IL-2)活性。各型乙型肝炎IL-2活性明显低于正常人,重症肝炎IL-2活性最低。结果提示:乙型肝炎细胞免疫功能紊乱。

MTT法在非小细胞肺癌优化治疗方案中的应用

目的:通过非小细胞肺癌体外原代细胞的培养,对其常用的化疗药物进行敏感性检测,探讨不同化疗药物之间的敏感性差异,筛选出最佳的化疗药物或联合化疗方案。方法:应用MTT显色分析法测定40例非小细胞肺癌实体瘤标本对9种化疗药物及其组成的联合化疗方案的敏感性或耐药性,并比较结果。结果:非小细胞肺癌化疗敏感性个体差异较大。联合化疗药物的敏感性明显优于单药,P=0.038。各药物平均抑制率由高到低的顺序依次为DDP+HCPT>DDP+VP16>HCPT>DDP+NVB>DDP+ADM+IFO>ADM>CTX+ADM+VCR>DDP>NVB>VP16>CBP>IFO>VP16+CBP>VCR>CTX。无论是单药组间比较,还是联合药物组间比较,其敏感性的差异均有显著差异,均P<0.01。结论:体外肿瘤细胞药敏试验对临床肿瘤化疗用药有很强的指导性,并能发现耐药病例。对非小细胞肺癌患者进行化疗时,应尽量选择联合用药方案。

一株具抗肿瘤活性的北极细菌的筛选及分子鉴定

在中国首次北极科学考察期间 ,从北极海域采集了水体 ,沉积物等样品 ,从中分离得到一批嗜冷细菌 ,采用MTT法对这些北极海洋细菌进行了细胞毒活性物质的筛选 ,得到一株具有细胞毒活性的菌株 .采用

无机硅壳类纳米颗粒对细胞的毒性检测

采用MTT分析方法结合激光共聚焦荧光显微成像系统研究了无机硅壳类纳米颗粒,包括无机二氧化硅纳米颗粒(SiNP)、二氧化硅壳荧光纳米颗粒(FSiNP)以及二氧化硅磁性纳米颗粒(MSiNP)对COS-7细胞、HNE1细胞和MCF-7细胞的毒性.研究结果表明:在有效浓度范围内,无机硅壳类纳米颗粒具有很好的生物相容性,对细胞的生长和代谢没有明显的影响,从而为无机二氧化硅纳米颗粒在生物医学中的应用提供了坚实的理论依据.

涎腺腺样囊性癌细胞对抗癌药物敏感性的研究

目的 检测涎腺腺样囊性癌对抗癌药物的敏感程度。方法 采用MTT法测试了 14种抗癌药物对SACC - 83、ACC - 2和ACC -M等 3个体外培养的涎腺腺样囊性癌细胞株的杀伤作用强度。结果 3种细胞株对14种药物的敏感性大体相似而又有差别 ,在抗代谢类抗肿瘤药物中 ,对MTX、DNR、ADM、5 -Fu、MMC的敏感性较强 ,在植物来源的抗癌药物中 ,对Taxol有明显的敏感性。

具抗肿瘤活性的海洋微生物菌株的初步筛选

本研究采用MTT法对海洋放线菌、细菌、霉菌及极地和大洋细菌进行细胞毒活性物质的筛选 ,结果有 1 0 %放线菌及一株极地细菌具有细胞毒活性 .此外利用DNA修复特性在E .coli 3 4 3 /591和E .coli 3 4 3 /63 6之间的差异性 ,对前面筛得的菌株进行DNA损伤的筛选 ,结果得到两株活性菌株 .采用荧光染色观察得到 3株具有诱导肿瘤细胞凋亡的菌株 ,这些具抗肿瘤活性的菌株可供进一步研究 .

辛伐他汀对成骨细胞增殖和矿化功能影响的实验研究

目的:研究辛伐他汀对原代培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和矿化功能的影响。方法:酶消化法分离培养大鼠颅骨成骨细胞,分别用空白培养基、不同浓度辛伐他汀及不同浓度的rhBMP-2作用24 h后,MTT法测量药物对细胞增殖活性的影响,细胞接种到培养板连续培养7 d,von Kossa染色观察成骨细胞矿化结节,采集图像并转换处理后计算矿化结节面积的百分比。结果:辛伐他汀对成骨细胞增殖活力的增加呈剂量依赖方式,而且可使成骨细胞矿化面积百分比显著增加,与rhBMP-2的作用相当。结论:辛伐他汀可促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞的增殖和矿化,从而发挥促进骨形成的作用。

人脑胶质瘤细胞SWO-38条件培养基对中脑神经元活性的影响及其活性物初步分离

目的 探讨人脑胶质瘤细胞SWO -38条件培养基 (SWO -38CM)对SD大鼠中脑神经元生物活性的影响并对活性物初步分离。 方法 制备SWO -38CM并超滤浓缩 ,将分子量大于10KD的SWO -38CM行SephacrylS-200-HR凝胶层析 ,用MTT分析法确定神经营养活性。结果 分子量大于10KD的SWO-38CM及其凝胶层析Ⅱ峰可提高MTT分析法的光密度值。结论 人脑胶质瘤细胞SWO -38可分泌促进中脑神经元活性的物质 ,该物质的分子量大于10KD。

低强度He-Ne激光照射对小鼠皮肤成纤维细胞、胸腺细胞和骨髓细胞的影响

目的观察不同照射条件的低强度He-Ne激光照射对离体培养的小鼠皮肤成纤维细胞、骨髓细胞和胸腺细胞增殖的影响.方法采用MTT法检测不同照射强度和照射时间的低强度He-Ne激光对不同细胞增殖的影响.结果结果表明在(1.108～4.433)mW/cm2功率密度下照射2～5 min能促进皮肤成纤维细胞增殖,照射时间>5 min各功率密度的He-Ne激光均抑制其增殖;在此功率密度范围内照射2～20 min均促进骨髓细胞和胸腺细胞增殖;照射时间>60 min,骨髓细胞和胸腺细胞的生长明显受抑. 结论相同照射条件下低强度He-Ne激光促骨髓细胞和胸腺细胞增殖的程度较皮肤成纤维细胞高,而且皮肤成纤维细胞较另两种细胞更易于被抑制增殖.

5-氟尿嘧啶衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性研究

目的设计合成5-氟尿嘧啶衍生物,并对其抗肿瘤活性进行评价。方法以5-氟尿嘧啶(5-FU)结构为基础,化学合成2-苄氧基-5-氟-4(3H)-嘧啶酮(2-BF),采用质谱(MS)、核磁共振氢谱(1H-NMR)及碳谱(13C-NMR)对其结构进行表征;MTT比色分析法比较2-BF与5-FU作用于人结肠癌细胞(SW620)及正常人肠上皮细胞(HIEC)后对细胞生长抑制率的影响及差异。结果 MS、1H-NMR和13C-NMR的结果确证合成化合物为目标产物;体外实验结果表明,2-BF(0.01～100μmol·L-1)作用于SW620细胞24h和48h后,其对细胞的生长抑制率分别为29.20%～64.96%、32.85%～72.26%,呈浓度、时间依赖性。在HIEC细胞中,高浓度2-BF(1、10、100μmol·L-1)的细胞生长抑制作用明显低于5-FU(P<0.01)。结论本实验成功合成了5-氟尿嘧啶衍生物——2-苄氧基-5-氟-4(3H)-嘧啶酮,不仅具有较好的抗肿瘤活性,且细胞毒性明显低于5-FU,具有潜在的临床应用价值。

银杏叶提取物EGb761对NO供体硝普钠诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的 探讨银杏叶提取物 (EGb 761 )对NO供体硝普钠 (SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 采用MTT比色分析测细胞存活率、Hoechst 332 58荧光染色及DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测凋亡。结果 不同剂量EGb761预处理海马神经元 6h可剂量依赖地对抗SNP引起的神经元凋亡 ,提高神经元的存活率 ;减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象 ;DNA凝胶电泳图谱未见典型的“梯子状”改变。结论 EGb

肺癌细胞株中NVB和Doc药物敏感性关联基因的研究

目的:筛选小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中与诺维苯(NVB)、泰索帝(Doc)药物感受性相关的基因。方法:采用MTT比色分析法测定4株SCLC细胞株和6株NSCLC细胞株对NVB、Doc的药物感受性,同时应用cDNAmacroarray技术检测10株肺癌细胞株中1291个药物感受性关联基因的表达状态,分析二者之间的相关性。结果:与NVB和Doc药物敏感性关联(r≥±0.4)的基因共有56个。1)与NVB药物敏感性相关联的基因有36个,SCLC+NSCLC组与NSCLC组共同表达的基因有20个,其中,SCLC+NSCLC组表达的基因有27个,特异表达的有7个,NSCLC组为29个基因,9个基因特异表达。2)与Doc药物敏感性相关联的基因有50个,其中,SCLC+NSCLC组与NSCLC组共同表达的基因有12个,SCLC+NSCLC组表达的基因有24个,12个基因特异表达,NSCLC组为38个基因,26个基因特异表达。3)肺癌细胞株中与NVB、Doc药物感受性相关联基因的分类主要分布于:信号转导分子﹑代谢酶类及其抑制剂、细胞因子和转录因子等4类。结论:SCLC和NSCLC细胞株中NVB、Doc药物敏感性相关联基因存在明显差异,但分类基本相同。

P-GSK3β、P-Akt在卵巢癌中的表达及与卵巢癌耐药关系的研究

目的:研究磷酸化糖原合酶激酶-3β(P-GSK3β)和磷酸化Akt(P-Akt)蛋白在卵巢上皮癌中的表达情况及其与卵巢癌化疗原发耐药的关系。方法:应用MTT比色分析法检测卵巢癌细胞对紫杉醇(PTX)、表阿霉素(EADM)、顺铂(CDDP)和卡铂(CBP)4种临床常用化疗药物的敏感性。采用免疫组织化学二步法检测10例卵巢上皮良性肿瘤、10例卵巢上皮交界性肿瘤及70例卵巢癌的石蜡包埋组织中P-GSK3β和P-Akt的表达,并分析它们与临床病理因素的关系。结果:65例卵巢癌标本进行体外药敏试验,25例失败,可评价标本为40例。卵巢癌组织中P-GSK3β蛋白的阳性率为57.50%(23/40),P-Akt蛋白的阳性率为65%(26/40),二者呈正相关(r=0.535,P<0.05)。P-GSK3β蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均显著下降,其中CDDP、PTX两种药物的平均抑制率差异均显著(t=2.573和t=2.174;P=0.014和P=0.036)。P-Akt蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均显著下降,其中CDDP、CBP两种药物的平均抑制率差异均显著(z=-2.201和z=-2.298;P<0.05和P<0.05)。70例卵巢癌组织中P-GSK3β、P-Akt的阳性表达率分别为60%(42/70)、67.14%(47/70),二者呈正相关(r=0.546,P<0.05);P-GSK3β和P-Akt蛋白在卵巢癌组织组中的表达水平均显著高于卵巢上皮交界性、良性肿瘤,差异有统计学意义,P<0.05,P-GSK3β蛋白的表达与卵巢癌的分化程度及临床分期密切相关,P<0.05,而与卵巢癌的组织学分型无显著相关性。P-Akt与卵巢癌的分化程度密切相关,P<0.05,而与卵巢癌的组织学分型及临床分期无显著相关性。结论:P-GSK3β和P-Akt的过表达在卵巢癌的发展中具有重要的作用,卵巢癌耐药的产生可能与P-Akt结合GSK-3β使其失活有关。

肺癌细胞株中GEM和CDDP药物敏感性相关基因的研究

背景与目的筛选小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株中与健择(gemcitabine hydrochloride,GEM)和顺铂(cisplatin,CDDP)药物敏感性相关的基因,有助于进一步阐明抗癌药物作用机制,为克服抗癌药物的耐药性、研制开发新的抗癌药物提供新线索,同时也将为临床的个体化治疗提供理论依据。方法采用MTT比色分析法测定4株SCLC细胞株和6株NSCLC细胞株对CDDP和GEM的药物敏感性,同时应用cDNA macroarray技术检测10株肺癌细胞株中1291个药物敏感性相关基因的表达状态,分析二者之间的相关性。结果与GEM药物敏感性呈明显正相关(r≥0.632,P<0.05)的基因有6个;与CDDP药物敏感性关联的基因共有45个;与GEM、CDDP敏感性关联(r≥±0.4)的基因有41个;肺癌细胞系中与GEM和CDDP两类药物敏感性呈明显相关的基因是Metallothinein(信号转导分子)、CathepsinB(组织蛋白酶B)和TIMP1(生长因子);肺癌细胞系中与GEM、CDDP药物敏感性相关联的基因主要分布于Metallothinein、Cathepsin B、生长因子TIMP1等类别。结论SCLC和NSCLC细胞株中GEM、CDDP存在药物敏感性相关基因,其中Metallothinein、Cathepsin B和TIMP1基因与GEM药物敏感性呈正相关,与CDDP药物敏感性呈负相关。

烹调烟雾职业暴露人群外周血NK细胞自然杀伤活性检测

目的 分析烹调烟雾职业暴露人群外周血NK细胞自然杀伤活性。方法 采用MTT比色法。结果 暴露组与对照组检测结果经成组t检验 ,表明暴露组NK细胞杀伤率明显低于对照组。结论 长期接触烹调烟雾对机体天然免疫系统中NK细胞活性有抑制作用。