MTT法检测通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨通络止痛方对人膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法:取本院行全膝关节置换术患者术中废弃滑膜组织,经I型胶原酶消化后进行原代培养,取3~4代成纤维细胞进行高、中、低浓度通络止痛方干预。应用四甲基偶氮唑盐法测定(MTT)法检测KOA滑膜细胞的增殖水平,并用倒置显微镜下观察各浓度下的细胞形态。结果:加药组组间与加药组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测随通络止痛方浓度减小KOA滑膜细胞在490 nm波长处吸光OD值数越大;高中浓度组抑制率为正值,随浓度增加抑制率增大,低浓度抑制率为负值,随浓度降低抑制率减少。结论:高、中浓度通络止痛方对滑膜细胞增殖有抑制作用,低浓度组的通络止痛方对滑膜细胞有增殖有促进作用。

密度梯度离心和贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性和成骨功能比较

目的 通过比较密度梯度离心和贴壁筛选两种方法所获MSCs的增殖活性和成骨功能,探索骨髓MSCs体外分离和纯化较好的方法,为MSCs进一步的试验研究提供依据。方法 应用密度梯度离心和贴壁筛选两种方法分离纯化骨髓MSCs ,并通过MTT法检测其增殖活性。用第三代MSCs进行骨向诱导,以观察两种方法所获MSCs是否有相似的骨向分化能力。结果 密度梯度离心法所获MSCs纯度高,杂质细胞少,增殖活性强,常表现为梭形和小多角形,7到1 0天内便可达到融合。而贴壁法所获MSCs纯度低,红细胞、破骨样细胞等杂质细胞较多,增殖速度相对较慢,且经数次传代仍有较多杂质细胞存在。经骨向诱导后,两种方法所获MSCs表现出相似的ALP活性和矿化结节形成能力。矿化结节数目在两组比较无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论 密度梯度离心法是体外分离和纯化骨髓MSCs较好的方法,所获细胞增殖活性高。两种方法所获MSCs具有相似的骨向分化能力。

检测癌症患者外周血淋巴细胞评估化疗药物敏感性的研究

目的基于众多文献报道四甲基偶氮唑蓝(MTT)法化疗药敏测定中癌细胞抑制率与外周血淋巴细胞抑制率呈正相关性,探讨MTT法预制检测板在检测癌患者外周血淋巴细胞药物敏感性中的价值,以指导临床化疗用药。方法应用泰伦公司生产的预制检测板,对75例癌患者外周血淋巴细胞进行20种药物的药敏检测,操作方法按说明书进行。结果39例肺癌患者外周血淋巴细胞对化疗药物敏感性,由高到低前5名依次为:卡氮芥(BCNU),紫杉醇(PTX),阿霉素(ADM),长春瑞滨(NVB)和表阿霉素(e-ADM);25例乳腺癌患者血淋巴细胞对化疗药物敏感性,前5名依次为BCNU,PTX,NVB,ADM和米托蒽醌(MIT);11例胃癌患者血淋巴细胞对化疗药物敏感性,前5名依次为PTX,ADM,BCNU,eADM和阿糖胞苷(Ara-C)。结论该MTT法预制检测板适用于癌患者药物敏感性试验,对临床癌患者个体化化疗有重要指导意义。

氧化苦参碱抑制SMMC—7721细胞增殖的研究

目的 研究不同浓度氧化苦参碱对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用。方法SMMC-7721细胞经不同浓度氧化苦参碱处理后,用MTT法检测细胞生长和增殖,用流式细胞仪技术检测细胞DNA分布。结果氧化苦参碱浓度>2.5mg/ml,细胞毒作用较大;浓度在0.1～2.5mg/ml时,对肿瘤细胞的生长有抑制作用,且呈时间剂量依赖性;浓度<0.1mg/ml,对肿瘤细胞生长几乎无抑制作用。氧化苦参碱作用后可增加G0/G1期细胞所占的百分比,阻止细胞进入S期。2.5mg/ml氧化苦参碱作用于SMMC-7721细胞3d,可观察到凋亡峰。结论 一定浓度的氧化苦参碱有抑制SMMC-7721细胞增殖的作用。

核仁素表达下调对C_2C_(12) 细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制CC12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。结论:核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡。

当归多糖组分促进淋巴细胞增殖及对IL-2和IFN-γ的诱生作用

目的:观察当归多糖及其3个组分对淋巴细胞增殖和细胞因子IL-2、IFN-γ的影响.方法:机械分散法制备小鼠单个脾细胞悬液;MTT法检测细胞增殖;酶联免疫法测定培养上清液中IL-2和IFN-γ的浓度.结果:当归多糖及其3个组分在30～100 μg/ml剂量范围内,能显著促进脾细胞的增殖;其中组分AP-3能够显著促进巨噬细胞、混合淋巴细胞的增殖反应,剂量依赖性地增加细胞上清液中IL-2和IFN-γ的浓度.结论:当归多糖能够活化巨噬细胞和T细胞,还可以通过细胞因子IL-2、IFN￣γ发挥免疫调节作用.

大蒜素诱导人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的研究

【目的】探讨大蒜素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响。【方法】MTT法检测大蒜素对BIU87细胞生长的影响;倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2,bax,caspase-3mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化。【结果】大蒜素能明显抑制BIU87细胞的生长,与大蒜素的浓度和作用时间有关,5mg/L大蒜素作用5d可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期阻滞在S-和G2期;凋亡相关基因bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高。【结论】诱导细胞凋亡是大蒜素发挥抗瘤效果的一种重要机制;凋亡发生可能与细胞周期阻滞、bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关。

含去痴灵水提物血清抑制M146L细胞分泌Aβ

目的研究含去痴灵水提物血清对M146L细胞分泌的β淀粉样蛋白(βamyloidprotein)的影响,探讨去痴灵治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的可能性及作用机制。方法采用血清药理学方法,制备含去痴灵水提物血清。体外培养稳定转染人类阿尔茨海默病β淀粉样前体蛋白(betaamyloidproteinprecursor,APP)和突变型早老素1(prsenilin1,PS1)基因的中华仓鼠卵巢上皮细胞系(M146L),使之高效产生β淀粉样蛋白42(Aβ42),建立Aβ42过度表达的细胞模型。加入含去痴灵水提物血清,用MTT法检测不同浓度(12%、6%、3%)的含药血清对M146L细胞毒作用,用ELISA法测定其对M146L细胞分泌Aβ42的影响。结果3个浓度的含药血清对M146L存活均无影响,对细胞分泌的Aβ42有抑制作用,并呈现一定的量效关系。结论一定剂量(12%、6%、3%)的含去痴灵水提物血清对M146L细胞分泌的Aβ42有明显的抑制作用,其机制尚待进一步研究。

丁烯酸内酯对心肌线粒体呼吸链酶复合物活力的影响

目的 研究丁烯酸内酯 (BUT)对大鼠心肌细胞毒性作用机制。方法 差速贴壁结合化学方法分离纯化大鼠心肌细胞。MTT法检测BUT作用于心肌细胞后其存活率的改变。用差速离心法分离心肌线粒体。TBA法检测心肌匀浆和心肌线粒体悬液中MDA的含量。应用紫外分光光度法检测BUT作用于线粒体悬液 2h后线粒体呼吸链酶复合物活力。结果 BUT对培养的心肌细胞有很强的毒性作用并且呈现明显的量效 关系 ,其作用于心肌细胞的LC50 为5 3 μg/mL。BUT作用在线粒体悬液中所引起的脂质过氧化效应强于其在心肌匀浆中所引起的脂质过氧化作用。BUT作用后线粒体酶复合物活力发生了改变 ,复合物Ⅰ和复合物Ⅱ的活力受到了比较明显的抑制 ,而复合物Ⅲ、Ⅳ的活力则有一定程度升高。结论 BUT能引起心肌细胞的脂质过氧化作用 ,这种作用有可能是因为BUT作用于线粒体呼吸链影响了电子在呼吸链上的传递过程所致。

蒙药升阳十一味丸对胃癌细胞抑制作用及其机制研究

目的研究蒙药升阳十一味丸对体外培养的人胃癌MGC-803细胞系抑制作用,并探讨其作用机理。方法通过MTT法检测药物作用后细胞的增殖抑制率,倒置光显微镜、透射电镜、Hochest33342/PI荧光染色观察细胞形态学变化,检测凋亡细胞。结果MTT显示,蒙药升阳十一味丸能抑制MGC-803细胞的增殖,其IC50值在2.0 mg/ml左右;光镜、电镜下可见凋亡细胞,凋亡细胞的比率较对照组明显增加。结论蒙药升阳十一味丸对胃癌MGC-803细胞具有明显的抑制作用,这种抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡而实现的。

硒蛋氨酸对耐顺铂食管癌细胞P-170的影响

目的:探讨硒蛋氨酸对耐顺铂食管癌细胞P-170抑制作用方法:采用顺铂高浓度间歇诱导食管癌细胞系EC9706, 建立耐药食管癌细胞模型;用MTT法检测硒蛋氨酸对该耐药食管癌细胞模型对顺铂敏感性的影响;用免疫组化检测该耐药食管癌细胞模型P-170表达,并进行半定量分析. 结果:硒蛋氨酸可增强该耐药食管癌细胞对顺铂敏感性,且呈现一定的浓度、时间依赖性,与单用同样浓度的顺铂和硒蛋氨酸组比较有显著差异(P<0.01).当顺铂加硒蛋氨酸浓度为40 mg/L+20 mmol/L处理耐顺铂食管癌细胞72 h后,对癌细胞增殖的抑制作用最明显该耐药食管癌细胞P-170强阳性表达,经硒蛋氨酸处理后仅弱阳性或无表达,统计学分析显示有显著差异(56.2% vs 25.7%,P<0.01). 结论:硒蛋氨酸可抑制多药耐药(MDR)基因编码的糖蛋白(P-170)的表达,在一定程度上逆转了肿瘤细胞耐药性.

人脑胶质瘤干细胞的分离、增殖和分化的研究

目的从人胶质瘤中分离并鉴定肿瘤干细胞。方法用神经干细胞无血清培养方法从胶质瘤中分离出具有单细胞克隆能力的细胞球,通过核型分析证明其肿瘤特性,用MTT法检测单克隆细胞增殖能力,应用免疫组织化学的方法检测克隆细胞nestin抗原和分化后相关神经细胞特异性抗原的表达。结果所获得的细胞球具有连续克隆的能力,nestin抗原阳性,并具有肿瘤核型,分化后的细胞表达星形胶质细胞和神经元特异性抗原。结论成功培养出脑胶质瘤肿瘤干细胞,该细胞具有自我更新、多向分化和很强的增殖能力等干细胞的特征。

枸杞糖肽对缺氧及KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响

目的:研究枸杞糖肽(LbGp)对低氧心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响,以及对KCl诱导的心肌细胞钙超载的影响。方法:采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺氧模型,实验分3组:正常对照组;缺氧模型组:细胞缺氧6h;枸杞糖肽预处理组:加入枸杞糖肽,再行缺氧6h。MTT法检测细胞活力。以Fluo/AM荧光指示剂负载,通过激光扫描共聚焦显微系统和Flou3/AM荧光指示剂标记技术,观察枸杞糖肽对缺氧心肌细胞游离钙含量的影响。加入终浓度60mmol·L-1KCl溶液,动态观察KCl刺激后心肌细胞[Ca2+]i的动态变化及LbGp预处理后对KCl诱导的钙超载的影响。结果:心肌细胞缺氧时间延长,损伤随之加剧,缺氧枸杞糖肽组心肌细胞荧光密度均较模型组显著降低(P<0.01),50μg·mL-1LbGp最为明显,[Ca2+]i明显减少。枸杞糖肽组加入KCl溶液后[Ca2+]i荧光强度曲线升高,但与模型组比较,幅度明显减小,25,50,100μg·mL-1LbGp且呈现量效关系。结论:低氧导致心肌细胞钙超载,而枸杞糖肽能减轻钙超载。亦能对抗KCl诱导的心肌细胞钙超载。机制之一是枸杞糖肽作用于L型钙通道。

保肝宁对肝星状细胞中核转录因子-κB活性影响的实验研究

目的观察中药复方保肝宁对肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)中核转录因子κB(nuclearfactorκB,NFκB)活性的影响及其相关机制。方法给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7天,制备含药血清,用MTT法检测其对肝星状细胞HSCT6生长的影响,用蛋白印迹实验(Westernblottinganalysis)检测药物作用不同时间NFκB蛋白抑制因子IκB磷酸化水平,用凝胶阻滞实验(gelshiftassay)检测药物作用30min后NFκB与DNA的结合水平。结果中药复方保肝宁对HSCT6细胞生长有显著的抑制作用;可快速抑制IκB磷酸化,30min达到最高水平,6h恢复至基础水平;可改变NFκB与DNA结合水平,使其与DNA结合能力下降。结论中药复方保肝宁能抑制IκB磷酸化,降低NFκB活性,并改变NFκB与DNA的结合水平。

siRNA对肺癌细胞株bcl-2基因表达的抑制

目的研究小干扰RNA(siRNA)对bcl-2基因表达的抑制作用。方法利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA,通过脂质体将合成的siRNA转入A549和NCIH460细胞株,以未转染细胞和转染bcl2的反义药物G3139为对照,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制,RTPCR检测bcl2mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变和bcl-2蛋白表达,反应siRNA对bcl-2表达的抑制效应。结果siRNA组与对照组细胞存活率各时间点均有显著差异(P<0.05);与反义组在24、48h也有显著差异(P<0.05),而72h无差异(P>0.05)。转染12h后,siRNA组bcl-2mRNA与对照组和反义组有显著差异(P<0.05)。转染48h后,siRNA组bcl2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组和反义组细胞阻滞于S期。结论体外转录合成的siRNA可抑制A549和NCIH46细胞bcl2基因的表达,效率可达50%以上。

IL-6在人胃癌细胞株AGS中生物学效应及其信号传导途径

目的探讨白细胞介素6(I-L6)在人胃腺癌细胞株AGS中产生生物学效应的信号传导途径。方法通过MTT法检测IL-6刺激AGS细胞后对其生长增殖的影响;采用电泳迁移变动试验(EMSA)和Westernblot观察IL-6刺激前后AGS细胞中IL6相关转录因子Stat3和参与IL-6信号传导功能的蛋白激酶Jak1的诱导活化状态,并确定该细胞中的IL6信号传导通路;通过免疫细胞化学染色确定磷酸化Stat3在AGS细胞内的定位。结果IL-6可显著促进AGS细胞的增殖;转录因子Stat3和蛋白激酶Jak1都能在AGS细胞中被IL-6诱导激活,且Stat3的活性与IL6的刺激呈一定的剂量和时间依赖性;磷酸化Stat3的染色定位于AGS细胞核。结论JAK/STAT信号传导途径的活化介导了IL-6对AGS细胞增殖的促进功能。

逐痹胶囊对大鼠佐剂性关节炎的影响

目的:观察逐痹胶囊对大鼠佐剂性关节炎(adjuvantarthritis,AA)的影响及作用机制。方法:用福氏完全佐剂(CFA)诱导大鼠AA模型,MTT法检测脾淋巴细胞增殖能力,免疫组织化学方法检测踝关节滑膜白细胞介素1(IL-1),白细胞介素6(IL-6)含量,并且测量原发及继发性关节肿胀程度。结果:生药52,26,13g·kg-1体重灌胃大鼠,逐痹胶囊显著抑制AA大鼠原发及继发踝关节炎性肿胀;降低脾淋巴细胞增殖能力及踝关节滑膜内IL1,IL-6含量。结论:逐痹胶囊对大鼠AA有一定抑制作用。

体外扩增CIK细胞对结肠癌SW480细胞株杀伤作用的研究

目的：观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）体外增值情况,了解其扩增后杀伤结肠癌SW480细胞株最佳比例及最有效的维持时间.方法：分离健康人外周血单个核细胞在体外诱导制备成CIK细胞,计数不同培养时间的CIK细胞,采用流式细胞仪检测其表型特征.倒置显微镜下观察CIK细胞作用与SW480结肠癌细胞的形态学变化,采用HE染色、AO/EO荧光染色和MTT法检测CIK细胞对SW480结肠癌细胞株的杀伤活性.结果：CIK细胞在体外培养14 d细胞增殖倍数为（100.22±8.68）倍,培养21 d细胞增殖倍数为（300.86±10.13）倍,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）;培养28 d细胞增殖倍数为（305.06±5.13）倍,与培养21 d的细胞增殖倍数比较差异无统计学意义（P＞0.05）.培养21 d的CIK细胞中CD3＋、CD56＋双阳性细胞的百分比为（45.3±5.1）％,与28 d相比较差异无统计学意义（P＞0.05）,第35天细胞增殖（212.50±4.25）倍,呈下降趋势.CIK细胞对结肠癌SW480细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤率为（68.21±1.31）％.结论：CIK细胞具有较强的抗结肠癌细胞活性,体外培养14～21 d具有较强的抗瘤活性,此时应用较为合适.CIK细胞作用于肿瘤细胞应达到一定数量并维持一定时间,可达到较好的抗瘤活性.

bFGF对人晶状体上皮细胞系内钙离子及IP3R、RyR的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶状体上皮细胞系LEC-B3内静息Ca2+浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)、ryanodine受体(RyR)表达的影响。方法:LEC-B3细胞系传代培养,分别以1,10,100μg/L bFGF诱导第3代细胞的增殖,MTT法检测其增殖度,激光扫描共聚焦显微镜测细胞内静息钙浓度;RT-PCR(reverse-transcriptase,PCR)方法检测10μg/L bFGF作用后细胞内IP3R和RyRmRNA的表达。结果:与对照组相比,3个浓度的bFGF对LEC-B3都有促增殖作用(P<0.01),其中10μg/L作用最强;bFGF作用后细胞内Ca2+浓度呈bFGF浓度依赖性增高,10μg/L,100μg/LP<0.01,1μg/L<0.05;10μg/L bFGF作用后的细胞IP3RI mRNA表达无明显变化,III型表达明显减弱(P<0.01),ryan-odineRI,IIImRNA表达升高(P<0.05,0.01)。结论:bFGF诱导LEC-B3细胞增殖引起细胞内钙离子浓度增加。Ca2+升高呈bFGF浓度依赖性,并不与细胞增殖度平行。bFGF对IP3R和RyR亚型的mRNA表达有一定影响,并且细胞内Ca2+浓度升高与bFGF刺激RyRmRNA表达升高有关。

TNP-470对人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨TNP 4 70对体外培养的人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 采用MTT法检测TNP 4 70对体外培养的Lovo细胞的生长抑制作用 ,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡百分率。结果 TNP 4 70对Lovo细胞生长具有抑制作用 ,并存在量效和时间依赖性。流式细胞仪分析表明 :G0 /G1期细胞百分率上升 ,S期细胞百分率下降 ,增值指数 (PI)下降 ,凋亡率上升 ,电镜下可见典型的细胞凋亡形态改变。结论 TNP 4 70对Lovo细胞的增殖具有抑制作用 。