清热化湿调枢方对葡聚糖硫酸钠结肠炎模型小鼠肠黏膜MUC-2、Claudin-2表达的影响

目的 本研究基于粘蛋白2(mucoprotein-2,MUC-2)和闭合蛋白2(Claudin-2)的表达变化,探讨了在预防和缓解小鼠肠黏膜损伤的DSS结肠炎模型中,清热化湿调枢方可能发生的机理。方法 24只C57BL/6小鼠随机抽取6只小鼠为正常组,其余18只小鼠均给予2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)水溶液自由饮用7天以制成每组6只的DSS结肠炎小鼠模型,然后再将其随机分为模型组,美沙拉嗪组,清热化湿调枢方组。对正常组、模型组的小鼠,每组用0.5 mL的纯净水进行灌胃;美沙拉嗪组的小鼠给美沙拉嗪混悬液灌胃,剂量为0.52 g/(kg·d);清热化湿调枢方组的小鼠给予1.69 g/(kg·d)的清热化湿调枢方中药颗粒剂灌胃;每组每天1次,共7天,与模型同步进行。7天后测定各组小鼠体质量,记录小鼠体质量变化,评分疾病活动指数(disease activity index, DAI),记录各组小鼠结肠长度,观察结肠组织病理变化,检测MUC-2和Claudin-2在结肠组织中的表达。结果 模型组的小鼠体质量较正常组显著下降,DAI评分显著上升,结肠长度变短,结肠组织中Claudin-2和MUC-2蛋白的表达明显下降(P<0.05)。与模型组相比,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方组的小鼠体质量显著增加,DAI评分下降,结肠长度增加,Claudin-2、MUC-2蛋白在结肠组织中的表达均有明显提高(P<0.05)。从结肠组织的病理变化来看,模型组小鼠肠黏膜上皮可见明显缺损,杯状细胞减少,固有层和隐窝结构破坏严重,排列错乱,淋巴细胞浸润较多;清热化湿调枢方组和美沙拉嗪组小鼠结肠黏膜上皮近乎完整,炎性细胞少量浸润。结论 清热化湿调枢方对DSS结肠炎小鼠肠道黏膜屏障损伤具有一定防治作用,其机制可能是通过提高结肠组织MUC-2表达,刺激Claudin-2分泌促进黏膜修复,从而维持肠黏膜屏障的稳态。

MUC-2、PCNA在结肠直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨结肠直肠癌组织中的MUC-2及PCNA的表达与不同的临床病理参数的关系及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测104例结肠直肠癌和20例正常结肠直肠黏膜中MUC-2、PCNA的表达。结果20例正常结直肠组织中MUC-2的表达阳性率为100%。而104例结直肠癌组织中MUC-2的阳性率为40.38%,PCNA的阳性率为79.6%。MUC-2、PCNA在结肠直肠癌中的表达与肿瘤的浸润深度,淋巴结转移和Dukes分期密切相关(P<0.05),而MUC-2与肿瘤的分化程度无关(P>0.05)。结论MUC-2、PCNA可能参与结直肠癌的发生发展,但MUC-2的高低不能作为结直肠癌的定性依据,它们可以间接反映肿瘤的预后。

溃结灵含药血清对大鼠结肠上皮细胞损伤模型MUC-2及TGF-α含量的影响

目的:观察溃结灵含药血清对结肠上皮细胞损伤模型MUC-2及TGF-α蛋白含量的影响,进一步探讨溃结灵促进肠黏膜损伤修复的机理。方法:TNF-α(50ng/mL)干预大鼠结肠上皮细胞6h造成细胞损伤模型,采用Elisa方法检测不同浓度溃结灵含药血清对细胞损伤模型MUC-2及TGF-α蛋白含量的影响。结果:①结肠上皮细胞损伤模型组MUC-2蛋白含量较空白对照组升高(P<0.05);②溃结灵含药血清高剂量组MUC-2蛋白含量较模型对照组升高(P<0.05);溃结灵含药血清高剂量组TGF-α蛋白含量较模型对照组升高(P<0.01)。结论:溃结灵含药血清可促进TNF-α致结肠上皮细胞损伤模型中MUC-2、TGF-α含量升高,进而促进受损肠黏膜上皮的修复。

术苦芩总多糖对湿热泄泻仔猪小肠杯状细胞数量以及MUC-2和ITF-3 mRNA转录的影响

为探讨术苦芩总多糖(ZKQPs)对湿热泄泻仔猪小肠修复作用的影响,将60头断奶仔猪分为空白对照组(n=10)造模组(n=50),造模组采用高温高湿环境配合高脂配合饲料等建立湿热泄泻模型,进一步将造模成功后的50头仔猪随机分为模型组、阳性药物组(白头翁散)、ZKQPs高、中、低剂量组(n=10),分别拌料给药,连用7d。采用过碘酸雪夫染色(PAS)结合显微镜观察小肠组织杯状细胞(GC),利用RT-PCR和ELISA分别检测湿热泄泻仔猪小肠黏液中黏蛋白-2(MUC-2)和肠三叶因子(ITF-3)的转录和含量变化。试验结果:1)模型组仔猪十二指肠、空肠、回肠中GC数量均减少,与空白组比较,差异显著(P<0.05);与模型组比较,ZKQPs高剂量组、中剂量组和阳性药物组仔猪十二指肠、空肠、回肠中GC数量均增加,ZKQPs高剂量组、阳性药物组仔猪十二指肠、空肠、回肠和ZKQPs中剂量组仔猪十二指肠、回肠GC的数量差异显著(P<0.05)。2)与空白组比较,模型组仔猪十二指肠、空肠、回肠中MUC-2mRNA的转录量和含量均降低,差异显著(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,ZKQPs各剂量组和阳性药物组仔猪十二指肠、空肠、回肠中MUC-2mRNA的转录量和含量均升高,ZKQPs高剂量组和阳性药物组仔猪十二指肠、空肠、回肠MUC-2mRNA的转录量和含量差异显著(P<0.05或P<0.01)。3)与空白组比较,模型组仔猪十二指肠、空肠、回肠中ITF-3mRNA的转录量和含量均降低,差异极显著(P<0.01)。与模型组比较,ZKQPs高剂量组、中剂量组和阳性药物组仔猪十二指肠、空肠、回肠中ITF-3mRNA的转录量和含量均升高,ZKQPs高剂量组、中剂量组和阳性药物组仔猪空肠、回肠中ITF-3mRNA的转录量和含量差异显著(P<0.05或P<0.01)。ZKQPs可提高湿热泄泻仔猪小肠GC的数量以及MUC-2和ITF-3mRNA的转录,促进湿热泄泻仔猪小肠内GC分泌物MUC-2和ITF-3分泌。

基于MUC-2及CXCR-4变化探讨四君子汤干预溃疡性结肠炎临床研究

目的观察治疗前后肠镜、结肠黏膜MUC-2以及CXCR-4变化,综合评价四君子汤辨治溃疡性结肠炎临床疗效及其可能机制。方法 60例患者随机分为2组,治疗组(四君子汤干预) 30例,对照组(艾迪莎) 30例,疗程24周。应用免疫组化、实时荧光定量PCR技术检测治疗前、后结肠黏膜MUC-2、CXCR-4变化。结果溃疡愈合方面四君子汤疗效与艾迪莎相近(P>0. 05);治疗后2组患者结肠黏膜MUC-2阳性细胞表达分布面积及其mRNA表达呈上升趋势;而CXCR-4阳性细胞表达分布面积及其mRNA表达呈下降趋势,与治疗前比较有统计学意义(P <0. 05)。治疗组与对照组比较,MUC-2及CXCR-4变化无统计学意义(P> 0. 05)。结论四君子汤可能通过增加MUC-2分泌,减少CXCR-4分泌,达到促进黏膜修复、溃疡愈合,缓解溃疡性结肠炎临床症状的效果。

食管鳞癌组织中MUC-2与SleX蛋白的表达

目的探讨食管鳞癌组织中MUC-2及SleX蛋白的表达。方法应用免疫组化SP法检测50例食管鳞癌组织、19例癌旁不典型增生组织及50例正常食管黏膜组织中MUC-2与SleX蛋白的表达。结果食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织及正常黏膜组织中MUC-2蛋白的阳性表达率依次降低，分别为78．0％（39／50）、47．4％（9／19）、18．0％（9／50），组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；SleX蛋白的阳性表达率依次降低，分别为80．0％（40／50）、52．6％（10／19）、16．0％（8／50），组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；MUC-2和SleX蛋白表达与食管鳞癌的组织分级、浸润深度、淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。结论MUC-2和SleX在食管鳞癌的发生、发展、转移中起重要作用，联合检测MUC-2及SleX可望成为食管鳞癌早期诊断和预后判断的分子指标之一。

Bcl-2、Cyclin D1、Ki-67、Muc-2在胰腺疾病中的表达及其意义

Bcl-2是重要的凋亡抑制基因，表达于正常的外分泌导管上皮、癌前病变和某些上皮来源的肿瘤。Bcl－2高表达与肿瘤分化程度、转移有关，而与年龄、性别、TNM分期无关。Cyclin D1和Ki-67均与细胞增殖活性有关，它们的表达与肿瘤的恶性程度呈正相关。

COX-2在卵巢上皮癌中的表达及其与黏蛋白MUC-1表达相关性的探讨

目的探讨COX-2及MUC-1在卵巢上皮癌中的表达及临床意义。方法采用SP免疫组织化学方法,对39例卵巢上皮癌、11例良性卵巢上皮瘤和10例正常卵巢组织的石蜡标本作COX-2及MUC-1的检测,并分析卵巢上皮癌的临床病理资料。结果正常卵巢组织COX-2及MUC-1均呈阴性表达,良性卵巢上皮瘤COX-2呈阴性表达,MUC-1呈阳性表达。卵巢上皮癌中有COX-2及MUC-1表达,COX-2在正常卵巢,卵巢良性肿瘤与卵巢恶性肿瘤之间的表达有极显著差异(P<0.01);MUC-1在正常卵巢、卵巢良性与恶性肿瘤之间的表达有极显著差异(P<0.01);卵巢上皮癌与卵巢上皮瘤相比表达呈升高趋势,但无统计学意义(P>0.05);COX-2的阳性表达与卵巢上皮癌的临床分期、组织分化程度及病理类型无关(P>0.05);MUC-1的阳性表达与卵巢上皮癌的临床分期、组织分化程度及病理类型有关(P<0.05);COX-2及MUC-1的阳性表达与卵巢上皮癌的预后有关(P<0.05);⑷COX-2及MUC-1在卵巢上皮癌中的表达呈一致性相关,二者表达无显著性差异(P>0.05),具有相关性(P=0.012)。结论COX-2及MUC-1可能是卵巢上皮癌发生的相关基因,与肿瘤的发展及转移有关,检测COX-2及MUC-1可以估计卵巢上皮癌患者的预后,辅助指导临床化疗。

犬弓首蛔虫黏蛋白2的原核表达及多克隆抗体的制备

根据犬弓首蛔虫(Toxocara canis)黏蛋白2的基因组数据(GenBank:AF167707),以T.canis成虫的基因组DNA为模板扩增Tc-muc-2基因并进行序列分析;同时构建Tc-muc-2/pCold TF原核表达载体,采用ITPG诱导表达,对重组蛋白进行纯化并制备多克隆抗体.结果显示Tc-muc-2基因全长序列为549 bp,共编码183个氨基酸;多重序列比对发现犬弓首蛔虫的黏蛋白均具有SKhT保守结构域,且含有不同串联重复序列组成的黏蛋白结构域;种系发育分析结果显示与猪蛔虫进化关系较近;SDS-PAGE结果表明重组蛋白Tc-MUC-2相对分子质量为7.5×10^(4),以可溶性形式表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,以250 mmol/L咪唑进行洗脱时可获得高纯度目的蛋白;将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体,间接ELISA结果显示其多克隆抗体效价大于1∶512000,表明重组蛋白的免疫原性较好,SDS-PAGE结果显示纯化后的抗体纯度高于95%,Western Blot结果显示抗体能与Tc-MUC-2蛋白特异性结合,表明抗体特异性高.

胃癌组织中唾液酸化Lewis和黏蛋白-2的表达

目的探讨人胃癌组织中唾液酸化Lewis(SleX)和黏蛋白-2(MUC-2)的表达情况及与胃癌浸润转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测103例人胃癌组织中SleX和MUC-2蛋白的表达。以20例正常胃黏膜为对照。结果正常胃黏膜组织中SleX和MUC-2蛋白阳性表达率均为20.0%(4/20)。胃癌组织中SleX和MUC-2蛋白阳性表达率分别为90.29%(93/103)和82.52%(85/103),均高于正常胃黏膜(P<0.05)。进展期胃癌组织中SleX和MUC-2蛋白阳性表达率高于早期胃癌(P<0.05);SleX和MUC-2蛋白表达与胃癌浸润和淋巴结转移有关(P<0.05)。胃癌组织中2者的表达呈正相关(P<0.05)。结论SleX和MUC-2蛋白表达与胃癌的浸润和转移密切相关,可作为判断胃癌浸润和转移的指标之一。

溃疡性结肠炎PCNA、EGFR、MUC2表达水平及临床意义

目的探究溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者结肠黏膜组织中黏液基因蛋白2(mucin2,MUC2)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,并分析其与UC病情严重程度、内镜下病变严重程度的相关性。方法选取2017年6月~2020年10月潍坊市人民医院收治的54例UC患者(轻度13例,中度32例,重度9例),另选取同期10例健康对照者的结肠镜活检标本,采用免疫组化法检测结肠黏膜组织中MUC2、EGFR、PCNA表达,比较两组MUC2、EGFR、PCNA表达水平之间的差异,分析黏膜组织中MUC2、EGFR、PCNA水平与UC不同病情严重程度及Mayo内镜下评分(mayo endoscopic subscore,MSE)的相关性,并分析EGFR及MUC2与PCNA之间的相关性。结果UC组的EGFR、MUC2表达水平低于对照组(P<0.05),PCNA表达水平高于对照组(P<0.05)。不同疾病严重程度及MSE的UC患者EGFR、MUC2、PCNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR、MUC2表达水平与UC患者的疾病严重程度及MSE呈负相关,而PCNA表达水平与疾病严重程度及MSE呈正相关。结论UC患者结肠黏膜组织中MUC2、EGFR表达水平降低,PCNA表达水平升高,与患者病情严重程度有关,可能在UC发病及病情发展过程中起重要作用。

丝裂霉素-C抑制大鼠代膀胱分泌黏液的实验研究

目的:利用大鼠代膀胱模型,观察丝裂霉素-C和无水乙醇对肠黏膜和杯状细胞的作用。方法:实验用SD大鼠20只按照随机数字表法分为生理盐水对照(NS)组、丝裂霉素(MMC)组(0.6 mg/ml)。建立大鼠代膀胱模型,分别于模型建立后的第8、11、14天灌注丝裂霉素-C,留取尿液标本,第17天处死大鼠,取代膀胱组织,行HE染色、AB-PAS染色以及MUC-2免疫组化染色,测定尿液中的总黏液蛋白以及唾液酸的浓度,对肠黏膜进行黏膜评分。结果:MMC组黏蛋白浓度(4.16±0.97)mg/ml较NS组(11.63±2.31)mg/ml显著降低(P<0.05);MMC组唾液酸浓度(199.7±26.6)mg/L较NS组(411.4±45.1)mg/L显著降低(P<0.05);AB-PAS:MMC组的蓝染杯状细胞比例(15.73±4.1)0%与NS组(42.96±9.51)%相比差异有统计学意义(P<0.05)。Muc-2免疫组化:MMC组杯状细胞数(39.12±5.98)与NS组(35.22±7.20)相比无显著性差异,回肠黏膜评分:MMC组(平均秩24.88)与NS组(平均秩10)相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丝裂霉素-C可使尿液中黏蛋白浓度以及唾液酸浓度显著下降,同时丝裂霉素可使成熟杯状细胞比例下降。

食管癌高发区食管癌组织碘染不同着色区多种蛋白的表达

目的:探讨食管癌高发区不同食管病变组织中多种蛋白表达的变化与碘染色的关系。方法:对食管癌手术切除标本进行碘染色处理,于碘染色和碘不染色区域分别对应取样,检测组织中E-cadherin、Cyclin D1、C-erbB-2、MUC-1、P21、C-met蛋白的表达水平。结果:碘不染区的病变程度较重,尤其是原位癌仅出现在碘不染区。MUC-1、E-cadherin、C-erbB-2及C-met蛋白的表达与碘染色无关;P21蛋白在碘染区、Cyclin D1于碘不染区的阳性检出率更高。结论:食管癌变早期P21及CyclinD1蛋白表达的变化可能与糖原代谢调控有关。

支原体脂肽经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC

目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）诱导人气道上皮细胞分泌粘蛋白MUC5AC的分子机制。方法体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/m L MALP-2刺激NCI-H292细胞24 h,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测培养上清中MUC5AC和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的含量;Western blot检测表皮生长因子受体（EGFR）磷酸化水平。同时采用EGFR抑制剂AG-1478或MMP-9抑制剂（MMP-9 Inhibitor I）处理细胞,观察其对MUC5AC分泌的影响。结果 NCI-H 292细胞未刺激时,MUC 5 AC以及MMP-9分泌水平极低。当给予0.1~5μg/m L MALP-2作用18 h后,MUC 5 AC的分泌水平显著增高。此外,5μg/m L MALP-2作用NCI-H 292细胞1 h后可诱导EGFR磷酸化。采用AG-1478预处理细胞1 h后,MMP-9及MUC 5 AC分泌水平明显减少,同时,采用10 nmol/L MMP-9抑制剂处理后也能下调MUC 5 AC水平。结论支原体MALP-2经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC。

Quranic Verse No. 8 of Surat Al-Jumu’ah Leads Us to Describe Cancer and Determine its True Cause (Part-II)

Cancer is cell fleeing from death by blocking the intrinsic and extrinsic programs of cell death. The six elements that shut down those programs are: muc-1, muc-4, muc-16, Bcl-2, MMPs and decoy R3. The nuclear factor-kappa B (NF-Kb) stimulates the expression of genes responsible for the production of those elements, which are used by cells to block those two programs. In other words, the nuclear factor kappa B (NF-KB) is responsible for blocking both programs. Therefore, the nuclear factor kappa B (NF-Kb) is the true cause of cancer.