MUC1/Y特异表位肽在大肠杆菌中的可溶性表达及其抗体的制备

为获得MUC1 Y的特异表位肽 ,制备抗体 ,用PCR扩增其编码序列 ,克隆到pGEX 2T中 ,转化DH5α感受态 ,0 2mmol LIPTG诱导表达 ,超声破碎或B PERTMⅡ试剂处理诱导菌 ,亲和层析和阴离子交换纯化目的蛋白 ,SDS PAGE及Westernblotting鉴定 ;免疫家兔制备多抗 ,初步用于免疫组化分析。结果表明 ,转化菌经诱导后表达融合蛋白GST Y30 ,约占菌体总蛋白的 2 0 % ,大多以可溶形式存在 ,与诱导温度无关。免疫家兔获得多抗 ,效价为1∶32 0 0 0 0 ,纯化的抗体具有特异性 ,可识别肿瘤细胞表面的MUC1 Y蛋白。所得蛋白和抗体可用于MUC1 Y的表达特征及其生物学功能研究。