MUC1黏蛋白启动子的克隆及在胰腺癌Panc-1细胞中的转录活性

目的 克隆MUC1黏蛋白启动子,研究MUC1启动子在人类胰腺癌细胞株Panc-1细胞和人类宫颈癌细胞株Hela细胞中的转录活性.方法 采用巢式PCR扩增MUC1启动子片段并酶切连接至含有EGFP报告基因的pEGFP-N1载体中构建质粒pEGFP-MUC1-N1,采用基因重组方法将MUC1启动子片段及EGFP报告基因构建于pShuttle质粒上形成pShuttle-MUC1-EGFP质粒.通过脂质体共转染人胰腺癌细胞株Panc-1和人宫颈癌细胞株Hela.使用荧光素酶检测系统（Luciferase assay system）测定细胞的荧光素酶活性,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测MUC1启动子在Panc-1细胞中的特异转录活性.结果 成功克隆出MUC1启动子,双酶切、PCR检测和DNA测序证实pEGFPMUC1-N1、pShuttle-MUC1-EGFP载体构建成功.重组报告载体荧光素酶活性显著升高（t=18.975,P =0.001）.经pEGFPMUC1-N1、pShuttleMUC 1-EGFP质粒转染后MUC1启动子在Panc-1细胞中的转录活性为阳性对照CMV启动子活性的69.6％及63.6％,明显高于Hela细胞中的4.2％及3.7％,在胰腺癌细胞中具有较高特异性,且在胰腺癌细胞中的活性明显高于阴性对照pGL3-Basic的0.093％.结论 MUC1启动子在淋巴瘤细胞中具有较高的特异性,可以作为胰腺癌细胞基因转染的肿瘤特异性启动子使用.此研究为进一步运用MUC1启动子在基因水平靶向治疗胰腺癌奠定了基础.

腺病毒介导钠/碘泵基因靶向治疗胰腺癌

目的观察0.8 kb的Mucin 1黏蛋白(MUC1)启动子驱动人钠/碘同向转运体(hNIS)基因在胰腺癌细胞靶向表达,评估其吸收碘的能力及结合放射碘治疗胰腺癌的效果。方法采用双质粒脂质体共转染方法获得复制缺陷型腺病毒Ad/MUC1/hNIS。Ad/MUC1/hNIS体外感染细胞,通过免疫荧光染色方法及细胞^(125)I的吸收试验检测hNIS在细胞的靶向表达及吸碘功能。构建鼠Capan-2胰腺癌模型,瘤内注射病毒后,结合^(131)I治疗,观察对移植瘤生长的抑制作用。结果hNIS仅在MUC1阳性的CAPAN-2和SW1990细胞的胞膜靶向表达,且有高的^(125)I吸收能力,分别较对照组提高20.5和13倍。Ad/MUC1/hNIS感染的肿瘤结合^(131)I治疗能抑制肿瘤生长,肿瘤体积减小到原来的83%。结论0.8 kb的MUC1启动子能驱动hNIS基因在MUC1阳性的胰腺癌细胞靶向表达,结合^(131)I治疗后能抑制胰腺癌的生长。