大白猪MUC4基因多态性及其对mRNA表达和细胞因子水平的作用分析

已有大量研究将猪MUC4基因第17内含子243位点作为ETEC F4ab/F4ac抗性的重要遗传标记,本研究采用PCR-RFLP方法检测138头大白猪MUC4基因第17内含子243位点多态性,利用RT-PCR检测不同基因型个体的组织mRNA表达水平,同时测定部分重要细胞因子(IIL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、TGF-β及TNF-α)的水平,旨在分析该位点对基因表达和重要细胞因子水平的影响,为下一步将该位点作为遗传标记用于分子选育提供指导和依据。结果表明:在大白猪群体中检测到3种基因型,分别定义为AA、AG、GG基因型,基因型频率分别为0.42、0.46、0.12。MUC4基因在11个组织中均有表达,其中心脏、肺和肾脏中表达量较高;GG基因型个体在各个组织中MUC4基因mRNA表达水平普遍高于AA和AG基因型个体。GG基因型个体IL-8、IL-10水平显著高于AA和AG型个体(P<0.05),其他细胞因子3种基因型个体间差异不显著。结果提示,将MUC4基因第17内含子243位点变异作为潜在的重要遗传标记用于大白猪的分子选育,不仅会提高断奶仔猪对ETEC F4的抗性,在一定程度上还能提高机体的一般抗病力。

MicroRNA-150通过下调MUC4抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭

目的探讨microRNA-150(miR-150)与宫颈癌细胞生物学功能的相关性。方法收集宫颈癌/癌旁配对样本23例,培养宫颈癌细胞系SiHa细胞、HeLa细胞、miR-150 mimics干预细胞。生物信息学分析,确定miR-150靶标,双荧光素酶报告基因检测进行验证;RT-qPCR及Western blot检测miR-150、MUC4表达;CCK-8检测细胞增殖;AO-PI染色后荧光倒置显微镜下,观察细胞自噬;Transwell检测细胞迁移。结果在宫颈癌组织及SiHa、HeLa细胞中,miR-150表达显著下调,MUC4表达显著上调;荧光素酶报告基因检测证实MUC4是miR-150的直接靶标;miR-150过表达后MUC4表达显著降低,SiHa细胞增殖、迁移侵袭能力显著降低,且细胞凋亡增加;miR-150过表达与细胞自噬相关。结论miR-150可能通过下调MUC4表达抑制宫颈癌细胞的恶性生长和侵袭行为,这可能为宫颈癌的诊断和治疗策略提供新方法。

MUC4和ErbB2在胰腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨MUC4和ErhB2在胰腺癌中的表达及临床意义。方法 免疫组化SP法检测60例胰腺癌．12例慢性胰腺炎及8例正常胰腺组织标本中MUC4和ErbB2蛋白的表达。结果 MUC4和ErbB2在胰腺癌中的表达率较慢性胰腺炎及正常胰腺组织均明显升高（P＜0．01）；ErbB2随胰腺癌病理分化程度的降低．阳性表达率逐渐增高（P〈0．05）；MUC4和ErbB2在临床Ⅲ～Ⅳ期胰腺癌中的表达率均明显高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0．05），在伴淋巴结转移的39例胰腺癌患者中的表达率亦较无淋巴结转移者明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论 MUC4可能是一个特异的胰腺癌肿瘤相关标志物．与ErbB2共同在胰腺癌的发生、发展中发挥重要作用。

食管鳞状细胞癌组织中MUC4和CerbB-2蛋白的表达

目的:探讨MUC4及CerbB-2的表达与食管鳞状细胞癌发生、发展及浸润转移的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测60例食管鳞状细胞癌组织、30例癌旁不典型增生组织和60例正常食管黏膜组织中MUC4及CerbB-2蛋白的表达。结果:食管鳞状细胞癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中MUC4的阳性表达率分别为81.7%、56.7%和5.0%,CerbB-2的阳性表达率分别为73.3%、80.0%、36.7%,3组间MUC4与CerbB-2阳性表达率相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。MUC4及CerbB-2的蛋白表达均与食管鳞状细胞癌的组织学分级、浸润深度及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:MUC4及CerbB-2在食管癌的浸润、转移及黏膜上皮癌变过程中起重要作用,2者联合检测可望成为食管鳞状细胞癌早期诊断和判断预后的分子指标之一。

Plk1与MUC4在胰腺癌中的表达与临床意义

目的:探讨胰腺癌中Plk1、MUC4表达的意义。方法:应用免疫组化EnVision两步法检测33例胰腺癌及其癌旁组织、3例胰腺浆液性囊腺瘤,3例黏液性囊腺瘤,5例慢性胰腺炎中Plk1、MUC4的表达。结果:胰腺癌中Plk1、MUC4的阳性表达率分别为72.7%(24/33)、51.5%(17/33),与胰腺癌患者的年龄、性别、临床分期、组织学分级、淋巴结的浸润、肿瘤的部位无显著相关(P>0.05)。癌旁组织、慢性胰腺炎和良性胰腺肿瘤组织中Plk1、MUC4表达均为阴性。结论:Plk1、MUC4在胰腺癌中表达具有一定肿瘤特异性,可能是胰腺癌治疗的两个理想靶目标。

食管癌中癌基因MUC4的变化及临床病理意义

目的探讨癌基因MUC4在食管癌中的拷贝数变化及其意义。方法应用FISH方法检测MUC4基因在35例食管癌组织中的拷贝数变化,并与18例癌旁组织做对比研究。结果 MUC4基因在35例食管癌组织均出现高频率(100％)扩增,18例癌旁组织中仅5例出现低频率扩增(27.8％),两者之间差异极显著(P<O.01)。MUC4基因扩增频率与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤TNM分期、淋巴结转移及分化程度无相关性(P>0.05)。 结论MUCA基因扩增可能与食管癌的发生关系密切。

卵巢上皮性肿瘤组织中MUC4、MUC16蛋白的表达及临床意义

目的探讨黏蛋白抗原4(MUC4)及黏蛋白抗原16(MUC16)检测在卵巢癌组织中的表达及临床意义。方法通过免疫组织化学方法检测正常卵巢组织、卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MUC4、MUC16的表达。结果在正常卵巢组织、卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中MUC4的阳性表达率分别为0、10%、36%、80%;MUC16的阳性表达率分别为0、20%、54%、61%;在卵巢癌中,MUC4表达阳性与分化程度、淋巴结转移明显相关(P<0.05)。结论MUC4蛋白在卵巢癌组织中高表达,提示MUC4与卵巢癌的发生发展有关。

胰腺癌MUC4的表达及其临床相关影响因素的分析

目的:研究胰腺癌组织中MUC4的表达及其与临床相关因素间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测53例胰腺导管腺癌和对应癌旁组织,以及9例慢性胰腺炎组织MUC4的表达,分析胰腺癌MUC4的表达与肿瘤分化、分期、病人生存时间等临床因素之间的关系。结果:53例胰腺癌组织中MUC4蛋白阳性表达43例(81.1%),对应癌旁组织中MUC4蛋白均为阴性表达,9例慢性胰腺炎中MUC4蛋白阳性表达2例(22.2%)。MUC4蛋白在胰腺癌组织中阳性表达率显著高于癌旁组织及慢性胰腺炎组织(P<0.05),MUC4蛋白在胰腺癌组织中阳性表达程度在病人不同的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度及临床TNM分期之间无统计学差异(P>0.05)。单因素及多因素生存分析显示,淋巴结转移、临床TNM分期和MUC4的表达是胰腺癌预后相关的重要独立因素,MUC4的高表达组预后较差(P<0.05)。结论:MUC4可能是一个特异的胰腺癌肿瘤相关标志物,在胰腺癌中有较高的表达率,MUC4的检测有助于胰腺癌的诊断,并可作为鉴别胰腺癌和慢性胰腺炎的一个重要参考指标;同时MUC4的检测还有助于判断手术病人的预后。

人MUC4氨基酸序列片段CDT_8^+细胞表位的多参数预测

目的:预测人MUC4氨基酸序列(AAD53171)的CD8T细胞表位。方法:结合2种常用表位预测数据库和工具,应用多种参数和方法进行综合分析,包括主要组织相容抗原(MHC)结合力、蛋白酶体切割位点等综合预测方法。结果:得到HLA鄄A鄢0201的1(ATLLPVTSL)、145(ATPLPVTSL)和52(LPVTDASSV)3个可能表位,和HLA鄄A24的145(ATPLPVTSL)、1(ATLLPVTSL)两个可能表位。结论:本研究为应用合成肽抗原制备MUC4肿瘤疫苗提供了依据,提供了表位预测的可行方法。

MUC4HLA-A*0201限制性CTL表位的预测及结合力分析

目的:寻找并鉴定MUC4HLA-A0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位。方法:结合2种常用表位预测数据库(SYFPEITHI和ProPred-I)和工具,应用多种参数和方法进行综合分析,包括MHC结合力、蛋白酶体切割位点等综合预测方法。预测得到的抗原表位合成相应抗原肽。用T2细胞株测定各肽与HLA-A0201分子的亲和力。结果:综合分析预测得到HLA-A0201的5个可能表位;合成抗原肽经纯化后纯度>95%;在5个候选表位肽中,LLLGVGTFV(1125-33)和LLGVGTFVV(1126-34)2个九肽与HLA-A0201的结合力较强。结论:多参数表位预测结果和结合力分析实验结果一致性较好,两者联合应用初步认为LLLGVGTFV(1125-33)和LLGVGTFVV(1126-34)2个九肽为MUC4HLA-A0201限制性CTL表位的可能性最大。

MUC4 mRNA在胰腺癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的研究MUC4mRNA在人胰腺癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法采用逆转录实时PCR法检测20例胰腺癌、12例慢性胰腺炎患者及8例健康志愿者外周血单个核细胞中MUC4mRNA的表达。结果MUC4mRNA在慢性胰腺炎患者及健康志愿者外周血单个核细胞中无表达,20例胰腺癌患者中有12例表达,其阳性表达率(60%)明显高于慢性胰腺炎组及健康对照组(P均<0.01)。MUC4mRNA阳性表达率有随胰腺癌临床分期增加而逐渐增高的趋势,在临床TNMⅢ～Ⅳ期中的阳性表达率(76.92%)明显高于Ⅰ～Ⅱ期(28.57%)(P<0.05)。结论胰腺癌患者外周血MUC4mRNA的表达与临床分期具有高度相关性,可用于胰腺癌的早期诊断和鉴别诊断。

MUC4是硬化性上皮样纤维肉瘤的一种敏感、特异的标记物

硬化性上皮样纤维肉瘤（SEF）是一种罕见的发生在深部软组织的侵袭性成纤维细胞肿瘤，好发于中年人，其特征是上皮样细胞穿插在密集的胶原间质中。SEF易与其他上皮样的软组织肿瘤相混淆，而且SEF和低级别纤维黏液样肉瘤（LGFMS）之间在形态学和分子特征上存在一定的重叠。

宫颈鳞状细胞癌中MUC4、EGFR和p-AKT的表达及意义

目的探讨宫颈鳞状细胞癌中MUC4、EGFR和p-AKT的表达及意义。方法选择宫颈鳞状细胞癌患者120例的癌组织标本与癌旁组织标本作为研究对象,所有标本都给予MUC4、EGFR和p-AKT的免疫组化分析,分析其与临床病理特征的相关性。结果癌组织中MUC4、EGFR和p-AKT表达阳性率分别为90. 8%、74. 2%和93. 3%,癌旁组织分别为28. 3%、36. 7%和30. 0%,对比差异有统计学意义(P <0. 05)。在宫颈鳞状细胞癌组织中,MUC4、EGFR和pAKT表达阳性率随着分化程度的降低、临床分期的增加、肌层浸润深度的加深、淋巴结的转移而显著增高(P <0. 05)。Spearman等级相关分析显示MUC4与EGFR、p-AKT呈显著正相关性(P <0. 05),EGFR与p-AKT呈显著正相关性(P <0. 05)。结论 MUC4、EGFR和p-AKT在宫颈鳞状细胞癌中呈现高表达状况,与临床病理特征参数密切相关,共同参与调节宫颈鳞状细胞癌的发生与发展。

胰腺癌中MUC4表达的作用及临床意义

胰腺癌早期诊断困难,MUC4在胰腺癌的发生、发展中起重要作用,可以作为胰腺癌早期诊断的分子标记,并有望成为药物治疗胰腺癌新的靶点,本文就近几年研究进展作一简要综述。

MUC4在低度恶性纤维黏液样肉瘤中的表达及意义

目的探讨黏蛋白MUC4在低度恶性纤维黏液样肉瘤中的表达及意义。方法选取明确诊断低度恶性纤维黏液样肉瘤的病例12例、韧带样纤维瘤32例、神经纤维瘤27例、结节性筋膜炎19例,通过免疫组化EliVision的方法检测MUC4在这4种病变中的表达,并对4组实验数据进行统计学分析。结果 12例低度恶性纤维黏液样肉瘤的MUC4检测均表达阳性,5例韧带样纤维瘤、2例神经纤维瘤和2例结节性筋膜炎表达局灶阳性,其余均阴性。MUC4在低度恶性纤维黏液样肉瘤中的表达显著高于其他3种疾病。结论 MUC4的表达可为低度恶性纤维黏液样肉瘤的诊断提供依据。

胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因重组腺病毒载体的构建及其在COS-7细胞的表达

目的:构建含有胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因的腺病毒载体,并转染真核细胞COS-7。方法:多参数分析预测MUC4抗原HLA-A1、HLA-A2限制性CD8+T细胞表位kozac序列、引导序列以及通用Th表位PARDE和多表位基因串连后合成嵌合全基因。嵌合基因克隆到腺病毒穿梭载体pAdshuttle-CMV获得重组质粒pAdshuttle-CMV-PE。酶切鉴定后,将正确的重组质粒转化含有腺病毒骨架载体的BJ5183菌进行同源重组。PacⅠ酶切和测序鉴定正确的重组子,脂质体介导转染Ad293细胞,通过观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒(rAd-PE)。Ad293细胞反复感染冻融扩增病毒,流式细胞仪和TCID50检测病毒滴度。病毒颗粒感染COS-7细胞,荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达以及SDS-Page分析多表位嵌合蛋白的表达。结果:成功构建了含有胰腺癌MUC4的多表位嵌合基因重组腺病毒,病毒滴度为1×1010pfu/ml。SDS-Page发现在16kD处有一符合预期大小的蛋白表达。结论:该重组腺病毒成功构建并能够在真核细胞COS-7中表达,为下一步胰腺癌的肿瘤疫苗研究奠定相应的基础。

PADRE/MUC4重组腺病毒转染树突状细胞诱导特异性CTL体外杀伤作用研究

目的:观察PADRE/MUC4重组腺病毒转染树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL)及体外特异性杀伤作用。方法:pAd-CMV-PADRE/MUC4转染HLA-A2健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)来源的未成熟DC,TNF-α诱导成熟后与自体PBMC混合培养刺激3周,Cr51和Elispot实验检测CTL体外杀伤活性。结果:Cr51和Elispot检测结果显示PADRE/MUC4转染DC可以诱导产生特异性CTL,而pAd-CMV-GFP组和空白对照组不能产生有效特异性CTL。结论:腺病毒载体介导多表位嵌合基因(PADRE/MUC4)转染未成熟DC,在体外可以诱导产生特异性CTL,对表达MUC4肿瘤细胞具有杀伤效应。

MUC4、HER2/neu和CA-125在卵巢上皮性癌中的研究进展

卵巢恶性肿瘤是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一．卵巢位于盆腔深部．早期病变不易发现．确诊时3／4的患者已属晚期．近20年来。由于有效化疗方案的应用，卵巢恶性生殖细胞肿瘤的死亡率有了明显下降．从90％降至10％，但对卵巢恶性上皮性肿瘤（简称卵巢癌）的治疗效果却未见明显改善，死亡率居妇科恶性肿瘤首位，

黏蛋白MUC1、MUC4和MUC6在胰腺癌中的表达及预后意义

目的探讨黏蛋白MUC1、MUC4和MUC6组合表达对胰腺癌预后的分层意义及潜在的分子机制。方法171例患者MUC1、MUC4和MUC6的mRNA数据下载自癌症基因组图谱数据库(TCGA),临床队列数据收集自2006年至2016年在福建医科大学第一附属医院连续性并接受手术切除的168例患者,用免疫组织化学方法检测MUC1、MUC4和MUC6的表达,统计学分析黏蛋白组合表达与总生存期(overall survival,OS)的关系,并筛选显著差异表达基因进行基因本体富集分析。结果胰腺癌组织中MUC1、MUC4和MUC6的mRNA和蛋白表达水平均高于正常胰腺组织,MUC1异常表达与较高的组织学分级、pN分期呈正相关,而MUC6高表达与组织学分级和淋巴血管浸润呈负相关。Kaplan-Meier分析显示MUC1异常表达和MUC4高表达提示胰腺癌患者预后不良,多因素分析显示MUC4高表达是胰腺癌患者OS的独立预后不良因素。MUC1蛋白与MUC4或MUC6组合表达能分层胰腺癌预后作用,值得注意的是,无论mRNA还是蛋白表达水平,联合3种黏蛋白表达组合均对胰腺癌预后有分层意义。显著相关差异表达基因本体富集分析显示MUC1、MUC4和MUC6生物学功能与质膜信号受体、离子通道和免疫反应等途径有关。结论MUC1、MUC4和MUC6组合表达有望成为胰腺癌患者的预后指标。

卵巢上皮癌组织中MUC4和CA125的表达及其临床意义

目的:探讨MUC4和CA125在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义。方法:采用PV-9005免疫组化二步法检测59例卵巢上皮癌、19例卵巢交界性肿瘤、16例卵巢良性肿瘤和11例正常卵巢组织中MUC4和CA125的表达情况。结果:MUC4和CA125的阳性表达率在卵巢上皮癌中显著高于卵巢交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤和正常卵巢组织(P<0.05)。MUC4阳性表达率在卵巢上皮癌低分化组显著高于高-中分化组(P<0.05);CA125阳性表达率在卵巢上皮癌晚期、低分化、有淋巴结转移组显著高于早期、高-中分化、无淋巴结转移组(P<0.05),CA125阳性表达率在浆液癌组显著高于黏液癌和透明细胞癌(P<0.05)。卵巢上皮癌中MUC4和CA125的表达呈正相关(P<0.05)。结论:MUC4和CA125在卵巢上皮癌的发生发展中可能起重要作用。