射干制剂对失眠大鼠自主活动及TLR7/MyD88信号通路的影响

目的 探研射干制剂对PCPA致失眠大鼠自主活动、脑电波以及脑组织TLR7、MyD88基因表达的影响。方法 随机将70只健康SD大鼠分为空白对照组、模型对照组、射干制剂低剂量组(26 mg·kg^(-1))、射干制剂中剂量组(52 mg·kg^(-1))、射干制剂高剂量组(104 mg·kg^(-1))、朱砂安神丸组(1.62 g·kg^(-1))、地西泮片组(0.9 mg·kg^(-1))。荧光定量PCR检测各组TLR7、My D88基因的相对表达量;采用Etho Vision大小鼠行为学系统记录大鼠自主活动情况;通过无线遥测系统记录各组睡眠时脑电图。结果 与空白组对照比较,模型对照组脑组织TLR7、MyD88相对表达量显著升高(P<0.01);同模型对照组相比,射干制剂低剂量组、射干制剂中剂量组TLR7、MyD88的mRNA表达量均降低(P<0.05),射干制剂高剂量组TLR7、MyD88 mRNA表达量显著降低(P<0.01);与空白对照组相比,PCPA造模后大鼠运动量明显增加,不同剂量射干制剂组、朱砂安神丸组及地西泮片组运动有不同程度的减少,射干制剂高剂量组运动减少较为明显;给药120 min后,与空白对照组相比,模型对照组脑电波中的δ波百分比降低(P<0.05);与模型对照组相比,射干低中剂量组、朱砂安神丸组、地西泮片组δ波百分比均升高(P<0.05)。结论 射干制剂可有效抑制大鼠兴奋性,增加脑电图δ波百分比,改善睡眠,这些作用可能是通过调节脑组织TLR7和MyD88基因的表达来实现。

优质抗倒油菜新品种晟湘油88的选育

湖南省棉花科学研究所以甘蓝型油菜细胞核雄性不育系S899FA为母本,以恢复系n386为父本,配制育成优质抗倒油菜新品种晟湘油88。该品种于2018—2020年度参加湖南省油菜多点适应性试验,2年10点(次)试验中9点(次)增产,平均产量为2663.1 kg/hm^(2),较对照品种沣油520增产4.3%;其种子芥酸含量为0.02%,硫代葡萄糖苷含量18.62μmol/g,含油量43.37%。晟湘油88于2022年通过非主要农作物品种登记,适宜湖南冬油菜主产区秋播种植。介绍了晟湘油88的选育过程、产量及农艺性状等。

室旁核H_(2)S通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对盐敏感性高血压大鼠的影响

目的研究室旁核(PVN)硫化氢(H_(2)S)对高盐诱导的高血压大鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨H_(2)S降压的作用机制。方法选择40只成年雄性Dahl盐敏感性大鼠,鼠龄8周,体质量260~280 g。随机把大鼠分成正常对照组(Control组)、正常给药组(Control+GYY组)、高盐模型组(Model组)、高盐给药组(Model+GYY组),每组10只。于第4周末,利用微型渗透泵向Control+GYY组和Model+GYY组大鼠双侧PVN区域持续注射H_(2)S的缓释供体GYY4137,其余组大鼠全部注射等量人工脑脊液。连续注射6周后进行取材,通过酶联免疫吸附分析(ELISA)法来检测PVN H_(2)S及血浆去甲肾上腺素(NE)的水平,免疫荧光法检测TLR4、MyD88的表达,免疫组化法检测磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB p65)、磷酸化κB抑制蛋白激酶β(p-IKKβ)的表达,通过Western blot法检测TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65的蛋白表达。结果Model组平均动脉压(MAP)、血浆NE较Control组升高(t=10.204、24.155、23.967、25.657、22.069、31.036、23.054、28.189,P<0.05),PVN中H_(2)S水平降低(t=14.348,P<0.05),Model+GYY组与Model组相比MAP、NE水平降低(t=8.295、12.931、10.992、16.064、12.228、16.017,P<0.05),PVN中H_(2)S水平升高(t=7.889,P<0.05)。免疫荧光或免疫组化结果显示,Model组PVN中TLR4、MyD88、pNF-κB p65、p-IKKβ因子的表达水平较Control组均升高(t=8.844、10.344、6.813、3.909,P<0.05),Model+GYY组与Model组相比PVN中TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、p-IKKβ因子的表达水平均降低(t=4.719、4.313、3.234、4.955,P<0.05)。Western blot结果表明,与Control组相比,Model组大鼠PVN中TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平升高(t=15.951、6.537、7.394,P<0.05);与Model组大鼠相比,Model+GYY组TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平下降(t=9.415、4.901、8.997,P<0.05)。结论室旁核H_(2)S可明显降低高盐诱导的高血压大鼠的血压、降低外周交感神经活动,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

基于miR-155/TLR4/MyD88信号通路探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤的抗炎作用

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h后,模型组灌胃348 mg/(kg·d)生理盐水,蛇伤胶囊组灌胃348 mg/(kg·d)蛇伤胶囊,均连续灌胃1周。观察实验兔的一般行为学,qRT-PCR检测外周血中miR-155a-5p、TLR4和MyD88表达,ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)含量。结果与对照组比较,模型组精神和食欲变差,排便稀软带血,伤口溃烂,miR-155-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达均显著增加(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著下降(均P<0.01)。蛇伤胶囊组较模型组情况明显好转,miR-155a-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达显著下降(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著增加(均P<0.01)。结论蛇伤胶囊抑制竹叶青蛇伤造成的炎症反应,维持Th1/Th2细胞平衡,其作用机制可能与抑制miR-155/TLR4/MyD88轴的表达有关。

卫矛醇通过调节Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB信号通路缓解脂多糖诱导的猪肠道上皮细胞损伤

本试验旨在通过构建猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)经脂多糖(LPS)刺激后细胞损伤模型,揭示卫矛醇(DUL)对LPS处理后的IPEC-J2细胞屏障受损和炎症损伤的缓解作用及其可能的分子机制。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测IPEC-J2细胞活力,以确定LPS造模浓度(150μg/mL)和最佳DUL处理浓度(200μmol/L)。试验设3个组:对照(CON)组、LPS组和DUL组。IPEC-J2细胞贴壁后,CON组先用完全培养基处理24 h,然后用DMEM培养基处理24 h;LPS组先用完全培养基处理24 h,然后用含有150μg/mL LPS的DMEM培养基处理24 h;DUL组先用含有200μmol/L DUL的完全培养基处理24 h,然后用含有150μg/mL LPS的DMEM培养基处理24 h。观察各组IPEC-J2细胞生长状态,划痕试验评价细胞的迁移和增殖能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测屏障和炎症相关基因的mRNA和蛋白相对表达水平。结果表明:1)在IPEC-J2细胞上,确定200μmol/L的DUL为最佳处理浓度,150μg/mL的LPS为有效致炎浓度。2)相较于LPS组,DUL预处理缓解了细胞密度降低、细胞空泡增多、细胞边界不清晰的情况。3)相较于LPS组,DUL预处理显著增加了细胞迁移距离和细胞迁移面积(P<0.05)。4)相较于LPS组,DUL预处理显著升高了屏障相关基因闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(OCLN)、封闭蛋白1(CLDN1)的mRNA和蛋白相对表达水平及黏蛋白2(MUC2)、大肿瘤抑制激酶1(LATS1)、YES相关蛋白1(YAP1)的mRNA相对表达水平(P<0.05)。5)相较于LPS组,DUL预处理显著降低了通路相关基因髓样分化因子88(Myd88)、核因子-κB抑制蛋白-α(IκB-α)、核因子-κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA和蛋白相对表达水平和Toll样受体4(TLR4)的蛋白相对表达水平以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-18(IL-18)的mRNA表达相对表达水平(P<0.05)。由此可见,DUL通过下调TLR4/Myd88/NF-κB信号通路相关蛋白表达,调节炎症因子分泌,提高紧密连接相关基因表达,缓解LPS引起的IPEC-J2细胞屏障损伤和炎症反应。

血清MyD88和TRAF-6联合检测在儿童重度急性呼吸道感染诊断和预后评估中的价值

目的探讨血清髓系分化初级反应蛋白88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)在儿童重度急性呼吸道感染辅助诊断和预后评估中的价值。方法选取2020年1月—2022年6月南阳市中心医院儿童急性呼吸道感染患儿80例(急性呼吸道感染组)。根据病原学检测结果分为非细菌感染组(42例)和细菌感染组(38例)。根据患儿病情严重程度分为轻度组(28例)、中度组(20例)、重度组(32例)。根据患儿预后情况分为预后良好组(58例)和预后不良组(22例)。以同期80名体检健康儿童为正常对照组。采用多因素Logistic回归分析评估急性呼吸道感染患儿预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断儿童重度急性呼吸道感染和评估预后的效能。结果急性呼吸道感染组血清MyD88、TRAF-6水平显著高于正常对照组(P<0.001)。细菌感染组血清MyD88、TRAF-6水平显著高于非细菌感染组(P<0.001)。轻度组、中度组、重度组血清MyD88、TRAF-6水平依次升高(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清MyD88、TRAF-6单项检测和联合检测诊断重度急性呼吸道感染的曲线下面积(AUC)分别为0.762、0.734、0.876。预后不良组细菌感染、下呼吸道感染、重度病情所占比例和白细胞(WBC)计数、反应蛋白(CRP)、MyD88、TRAF-6水平均显著高于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,重度病情、CRP升高、MyD88升高、TRAF-6升高均是儿童急性呼吸道感染预后不良的危险因素[比值比(OR)值分别为1.693、1.864、3.218、2.869,95%可信区间(CI)分别为1.142~2.510、1.228~2.830、1.561~6.633、1.511~5.446,P<0.05]。ROC曲线分析结果显示,血清MyD88、TRAF-6、CRP单项检测和联合检测判断急性呼吸道感染患儿预后的AUC分别为0.848、0.900、0.817、0.951。结论急性呼吸道感染患儿血清MyD88、TRAF-6水平显著升高,联合检测对儿童重度急性呼吸道感染的辅助诊断和预后评估均有较高的临床价值。

基于TLR-4/MyD88/NF-κB对健脾化滞丸治疗溃疡性结肠炎的机制进行拆方研究

目的:通过建立脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,探讨健脾化滞丸及其不同拆方对TLR-4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只、模型组56只,采用中医证候联合乙醇-2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组(M)、美沙拉嗪组(A)、健脾化滞丸全方组(B)、健脾清化方组(C)、健脾清化活血方组(D)、健脾清化导滞方组(E)、清化导滞活血方组(F),每组8只,给予相应药物灌胃4周,疗程结束后处死所有大鼠并取材,观察大鼠体质量变化、疾病活动度及结肠病理改变,ELISA及免疫组化检测大鼠结肠组织TNF-α表达;RT-PCR及Western blot检测大鼠结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健脾化滞丸全方、健脾清化方、健脾清化活血方组及健脾清化导滞方组大鼠体质量明显高于模型组(P<0.01),各治疗组均能明显改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤及疾病活动指数,其中健脾化滞丸全方组及健脾清化活血方组作用最好。各治疗组均可抑制结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达(P<0.001),其中美沙拉嗪组、健脾化滞丸全方组、健脾清化导滞方组及清化导滞活血方组在降低NF-κB mRNA及蛋白表达上明显优于健脾清化方组及健脾清化活血方组(P<0.05)。各组均能降低结肠组织TNF-α表达(P<0.001),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化滞丸及各拆方均可能通过TLR-4/MyD88/NF-κB通路发挥作用,其中黄连、煨木香、凤尾草、炮姜可能为本方核心药物,对临床具有一定指导意义。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

生脉强心颗粒对慢性心力衰竭气阴两虚夹瘀证病人TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及心肌纤维化的影响

目的:探讨生脉强心颗粒对慢性心力衰竭气阴两虚夹瘀证病人Toll样受体4(TLR4)/髓分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路及心肌纤维化的影响。方法:选取2021年10月—2022年10月黑龙江中医药大学附属第二医院收治的慢性心力衰竭气阴两虚夹瘀证病人80例,采用随机数字表法分为研究组与对照组,每组40例。对照组采用常规治疗方案,研究组在对照组基础上加用生脉强心颗粒治疗。比较两组临床疗效及不良反应发生率,观察两组治疗前后中医证候积分、TLR4、MyD88及NF-κB的mRNA及蛋白表达,心肌纤维化指标[Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)]水平。结果:研究组临床疗效总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(90.0%与65.0%,P<0.05)。治疗后,研究组中医证候各项积分均明显低于对照组(P<0.05),TLR4、MyD88及NF-κB的mRNA及蛋白表达均明显低于对照组(P<0.05),血清TGF-β_(1)、MMP-2及PⅢNP水平均明显低于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:生脉强心颗粒治疗慢性心力衰竭气阴两虚夹瘀证病人,可缓解临床症状,抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及心肌纤维化进程,且安全性较好。

重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R和MYD88水平与患儿预后的关系

目的分析重症腺病毒肺炎患儿血清白细胞介素-6受体(IL-6R)和髓样分化因子88(MYD88)水平与患儿预后的关系。方法将沧州市中心医院2020年6月至2022年6月收治的腺病毒肺炎患儿146例纳入研究,根据患儿病情严重程度分为非重症组(50例)和重症组(96例);根据重症腺病毒肺炎患儿出院时病情将患儿分为预后良好组(63例)及预后不良组(33例)。血清IL-6R和MYD88水平检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)。分析重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R、MYD88水平及二者与序贯器官功能衰竭(SOFA)评分、Murray肺损伤评分、白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数(PLT)的相关性。采用Logistic回归分析重症腺病毒肺炎患儿预后的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IL-6R和MYD88水平对重症腺病毒肺炎患儿预后的预测价值。结果重症组血清IL-6R、MYD88水平及SOFA评分、Murray肺损伤评分均高于非重症组(P<0.05)。预后不良组WBC>10×10^(9)/L、CRP≥8 mg/L及PLT≥10×10^(9)/L患儿比例均高于预后良好组(P<0.05),IL-6R、MYD88水平及SOFA、Murray肺损伤评分均高于预后良好组(P<0.05)。血清IL-6R和MYD88呈正相关(P<0.05)。血清IL-6R、MYD88均与SOFA评分、Murray肺损伤评分、WBC、CRP以及PLT呈正相关(P<0.05)。经Logistic回归分析,IL-6R、MYD88升高是影响重症腺病毒肺炎患儿预后的危险因素(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清IL-6R和MYD88联合预测重症腺病毒肺炎患儿预后的曲线下面积(AUC)优于各自单独预测(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清IL-6R和MYD88水平显著升高,二者与患儿预后密切相关,二者联合较各自单独使用可更好地预测患儿预后。

基于天枢与上巨虚穴经皮神经电刺激观察对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织TLR9/MyD88/NF-κB蛋白表达的影响

目的基于“合募配穴”原则观察经皮神经电刺激(transcutaneous electrical nerve stimulation,TENS)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠结肠组织Toll样受体9(toll-like receptor 9,TLR9)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨TENS治疗UC的相关机制。方法从48只SPF级成年SD大鼠中随机抽取12只作为空白组。其余36只通过2-4-6三硝基苯磺酸(2-4-6 trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇法制备UC大鼠模型,成模后再次随机分为模型组、TENS组、阳性药物组,每组12只。成模后第1天开始干预:模型组仅行捆绑固定;TENS组捆绑固定后刺激天枢、上巨虚两穴;阳性药物组用225 mg/kg剂量的柳氮磺胺吡啶混悬液灌胃。以上各组干预均每天1次,共10次。观察记录各组大鼠每天食量和体质量。干预结束后,HE染色观察各组大鼠结肠组织病理学变化;ELISA法检测结肠组织白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)炎性因子的含量;Western blot法检测结肠组织TLR9、My D88、NF-κB蛋白的表达量变化。结果(1)与空白组相比:模型组大鼠结肠组织出现明显溃疡面,上皮细胞大面积萎缩,炎性因子大量浸润,IL-6、TNF-α炎性因子含量升高(P<0.05);TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表达量上调(P<0.05)。(2)与模型组相比:TENS组和阳性药物组结肠组织损坏情况较轻,上皮细胞黏液较充分,腺体分支较少,炎性细胞浸润面积小;IL-6、TNF-α含量减少(P<0.05);TLR9、NF-κB蛋白表达量降低(P<0.05)。(3)与阳性药物组相比:TENS组TNF-α、IL-1β的含量及TLR9、MyD88、NF-κB蛋白表达量相对较高(P<0.05)。结论TENS能够保护肠道上皮细胞,减轻肠道炎症,其机制可能与降低结肠细胞促炎因子水平,抑制TLR9/MyD88/NF-κB信号通路蛋白的过表达有关。

多发性硬化中TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的作用及机制

背景:多发性硬化是以T细胞介导的中枢神经系统慢性炎性脱髓鞘疾病,Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路在疾病发生发展过程中有重要作用,探究出信号通路的具体作用机制对进一步治疗该疾病,改善患者的预后至关重要。目的:综述TLRs/MyD88/NF-κB信号通路及其在多发性硬化/实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中的作用,并就抑制该信号通路为多发性硬化的治疗提供新的思路和策略。方法:检索中国知网、万方及PubMed数据库在2002年1月至2022年12月与文章主题相关的文献,最终纳入61篇文献进行分析。结果与结论:①TLRs/MyD88/NF-κB信号通路是介导炎性免疫反应的重要信号通路;②TLRs/MyD88/NF-κB信号通路通过调节树突状细胞的抗原提呈、破坏血脑屏障的完整性、促进T细胞、B细胞和小胶质细胞的激活等途径,在多发性硬化的发展中发挥了重要的作用;③通过靶向作用于TLRs、MyD88和NF-κB分子,抑制TLRs、MyD88和NF-κB的激活或信号传导,减少促炎因子的分泌可以达到治疗多发性硬化的目的;④动物实验研究表明,中药的活性成分如黄酮类和苷类、中药复方如补阳还五汤也可通过影响TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎,这为寻找靶向TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗多发性硬化的药物指明方向。

血清HDAC4和MYD88水平与急性脑梗死rt-PA静脉溶栓后出血转化的关系研究

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)和髓样分化蛋白88(MYD88)水平与重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓后发生出血转化的关系。方法选取2020年5月至2022年5月在该院就诊并进行rt-PA静脉溶栓治疗的169例ACI患者作为研究对象,并根据患者进行rt-PA静脉溶栓后是否发生出血转化将其分为转化组(46例)和非转化组(123例),另外选取同期在该院进行体检的156例体检健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验对各组血清HDAC4、MYD88水平进行检测,并对转化组和非转化组的一般资料进行比较;采用Pearson相关对ACI患者血清HDAC4和MYD88水平的相关性进行分析;采用多因素Logistic回归分析影响ACI患者rt-PA静脉溶栓后出血转化的相关因素;进一步通过受试者工作特征(ROC)曲线评估HDAC4、MYD88水平及二者联合对ACI患者rt-PA静脉溶栓后出血转化的诊断价值。结果ACI组血清HDAC4水平低于对照组,血清MYD88水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);非转化组和转化组ACI患者的性别、年龄、体重指数、空腹血糖及高血脂、冠心病占比比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而患者心房颤动占比、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、发病至溶栓时间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);转化组较非转化组血清HDAC4水平降低,血清MYD88水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,ACI患者血清HDAC4水平与MYD88呈负相关(r=-0.401,P<0.001);多因素Logistic回归分析显示,心房颤动、发病至溶栓时间、NIHSS评分、MYD88水平是ACI患者rt-PA静脉溶栓后发生出血转化的危险因素,HDAC4水平是ACI患者rt-PA静脉溶栓后发生出血转化的保护因素(P<0.05);血清HDAC4、MYD88联合检测ACI患者rt-PA静脉溶栓后发生出血转化的曲线下面积为0.876,灵敏度和特异度分别为65.22%和98.37%,优于HDAC4和MYD88单独诊断(Z二者联合-HDAC4=2.298,P=0.022;Z二者联合-MYD88=2.545,P=0.011)。结论ACI患者血清HDAC4和MYD88水平与rt-PA静脉溶栓后发生出血转化密切相关。

麦粒灸对坐骨神经损伤大鼠脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的观察麦粒灸“环跳”对坐骨神经损伤(SNI)大鼠坐骨神经功能、坐骨神经干病理形态及脊髓组织TLR4/MyD88/NF-κB表达的影响,探究麦粒灸治疗SNI的可能机制。方法24只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和麦粒灸组,每组6只。模型组、麦粒灸组采用坐骨神经钳夹制备SNI大鼠模型,造模后第7日起麦粒灸组取患侧“环跳”麦粒灸干预,每次6壮,1次/d,连续10 d。观察造模后第7日及干预结束后大鼠坐骨神经功能指数(SFI)、纤维丝测痛仪测量大鼠机械痛阈值(MWT),ELISA检测脊髓组织一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量,HE染色观察坐骨神经干形态,Western blot检测脊髓组织Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κBp65、p-NF-κBp65、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠SFI、MWT显著降低(P<0.01),坐骨神经干神经纤维排列紊乱,施万细胞数量明显增多,有大量空泡变性,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,麦粒灸组大鼠SFI、MWT显著升高(P<0.01),坐骨神经干损伤减轻,细胞排列较整齐,施万细胞数量减少,轴突脱髓鞘及细胞空泡变性减少,脊髓组织NO、iNOS含量及TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论麦粒灸“环跳”可下调SNI大鼠脊髓组织TLR4、p-NF-κBp65、MyD88、p-IκBα蛋白表达,抑制NO、iNOS分泌,从而缓解疼痛、减轻受损神经组织炎症反应。

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路介导的NLRP3炎性小体活性探讨振腹推拿改善CUMS模型大鼠海马组织炎性损伤的手法机制研究

目的 观察振腹推拿对抑郁症模型大鼠海马组织Toll样受体4(Toll-like Receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)/核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)通路介导的NLR蛋白3(NLR protein 3,NLRP3)炎性小体活性的影响,探讨振腹推拿改善抑郁症模型大鼠海马区炎性损伤的作用机制。方法 将40只大鼠随机分为4组,采用慢性不可预见性温和应激方法复制抑郁症大鼠模型。采用离子钙接头蛋白-1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba1)免疫荧光染色检测各组大鼠海马组织海马回(cornuammonis, CA)的小胶质细胞活化程度,采用酶联免疫吸附法法检测大鼠海马组织中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、IL-10的含量,采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR(Real time-PCR,RT-PCR)法检测各组大鼠海马组织中TLR4、MyD88、磷酸化核因子-κB(phospho-nuclear factor kappa-B,p-NF-κB)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)蛋白及其基因表达。结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠海马组织CA1、CA2、CA3、CA4区的活化小胶质细胞占比均显著升高(P<0.01)。与模型组大鼠比较,振腹组、氟西汀组大鼠海马组织CA1、CA2、CA4区的活化小胶质细胞占比均显著降低(P<0.01),氟西汀组大鼠海马组织CA3区的活化小胶质细胞占比与模型组相比降低有统计学差异(P<0.05),振腹组大鼠海马组织CA3区的活化小胶质细胞占比与模型组相比仅有降低趋势。(2)与正常组比较,模型组大鼠海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1含量显著升高(P<0.01),IL-10含量显著降低(P<0.01)。与模型组大鼠比较,振腹组、氟西汀组大鼠IL-10含量均显著升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6、Caspase-1含量均显著降低(P<0.01)。(3)与正常组比较,模型组大鼠海马组织TLR4、MyD88、p-NF-κB、NLRP3、ASC的蛋白和mRNA含量均显著升高(P<0.01)。与模型组大鼠比较,氟西汀组大鼠海马组织TLR4、MyD88、p-NF-κB、NLRP3的蛋白含量均显著降低(P<0.01),ASC的蛋白含量下降有统计学意义(P<0.05);氟西汀组大鼠TLR4、MyD88、p-NF-κB、NLRP3、ASC的mRNA含量均显著降低(P<0.01)。与模型组大鼠比较,振腹组大鼠海马组织TLR4、ASC的蛋白含量下降有统计学意义(P<0.05),MyD88、p-NF-κB、NLRP3的蛋白含量显著降低(P<0.01);振腹组大鼠TLR4、MyD88、NF-κB、NLRP3的mRNA含量均显著降低(P<0.01),ASC的mRNA含量均降低有统计学意义(P<0.05)。结论 振腹推拿缓解抑郁模型大鼠抑郁样行为的其机制与抑制海马组织中TLR4/MyD88/NF-κB通路介导的NLRP3炎性小体活性、改善海马组织炎性损伤有关。

猪ETECK88ac、K99黏附素蛋白生物信息学分析及多表位疫苗载体构建

由猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起的仔猪腹泻是规模化猪场最常见的疾病之一。目前国内和国际上制备ETEC疫苗的靶基因多为其黏附素基因K88ac、K99。本试验通过分析ETEC K88ac、K99黏附素蛋白的生物学信息,将抗原表位进行组合,设计了一种同时含有K88ac、K99基因的多表位重组疫苗载体。首先应用ProParam、SOPMA和GOR软件分析K88ac、K99蛋白的理化特性及二级结构,应用IEDB与ABCpred软件预测二者的B细胞抗原表位,应用RANKPEP软件预测Th细胞表位,应用IEDB与NetMHC-4.0软件预测CTL细胞表位;然后将预测的B细胞、Th细胞和CTL细胞抗原表位加上接头序列,按照一定顺序进行组合,分别设计多表位连接多肽Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;最后通过分析抗原性、致敏性,筛选抗原性最强的连接多肽,并对其进行表征。结果显示:共筛选出9个抗原表位,按照不同的排列组合获得了3种连接多肽,其中连接多肽Ⅱ抗原性最强,为0.906 8;应用AllerTOP v. 2.0在线工具对连接多肽Ⅱ进行过敏性预测,发现其没有过敏性;应用ZpGJn4在线工具对连接多肽Ⅱ进行三维建模,发现其结构表位暴露性较好,易与抗体结合,在蛋白分子构象上符合表位设计要求。将该多表位肽的氨基酸序列按照乳酸菌密码子嗜好性反向翻译为核苷酸序列,随后插入pET28a载体中获得了p ET28a-KT质粒。结果表明,构建的连接多肽Ⅱ适合作为多表位疫苗的备选载体蛋白。多表位肽的设计及pET28a-KT质粒的获得为下一步构建表达ETEC多表位抗原的重组乳酸菌提供了技术支撑。

舒芬太尼调节TLR4/MyD88/NF-kB通路对重症肺炎大鼠肺损伤的影响

目的:探讨舒芬太尼(Sufentanil,Sufen)对重症肺炎(Severe pneumonia,SP)大鼠肺损伤及Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子-κB(Toll-like receptor 4/myeloid differentiation factor 88/nuclear factor-κB,TLR4/MyD88/NF-κB)通路的影响。方法:构建SP大鼠模型;将造模成功大鼠分为重症肺炎组(SP组)、舒芬太尼低、高剂量组(Sufen-L、Sufen-H组)、舒芬太尼高剂量+TLR4激活剂LPS组(Sufen-H+LPS组),每组24只,另取24只正常大鼠作为对照组(Control组);检测肺泡灌洗液中炎症因子水平及肺泡灌洗液沉淀物中炎症细胞数目;检测肺组织湿干重比(Wet/Dry,W/D);HE染色观察各组大鼠肺组织病理变化;Western blot检测肺组织中TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达水平。结果:SP组较Control组肺组织遭到破坏损伤严重,其中肺间质增厚,肺泡水肿并伴有大量炎性细胞浸润,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和EOS、NEU炎症细胞数目及W/D比、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05);Sufen-L、Sufen-H组较SP组大鼠肺组织损伤减轻,肺泡结构逐渐完整,水肿减轻,炎症细胞浸润逐渐减少,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和EOS、NEU炎症细胞数目及W/D比、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著降低,其中Sufen-H组优于Sufen-L组(P<0.05);Sufen-H+LPS组较Sufen-H组大鼠肺组织损伤加剧,肺泡结构破坏严重,肺泡水肿明显,炎性细胞浸润增加,TNF-α、IL-1β、IL-6水平和EOS、NEU炎症细胞数目及W/D比、TLR4、MyD88、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:Sufen改善SP大鼠的肺损伤,与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

优化溃结方对溃疡性结肠炎大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB信号通路的影响

目的观察优化溃结方对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠Toll样受体/髓样分化因子88/核转录因子κB(TLR/MyD88/NF-κB)信号通路的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、优化溃结方组、柳氮磺吡啶组,每组10只。除空白组外,其余3组均参考三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇二次致炎法结合束缚法建立UC气滞血瘀型大鼠模型。造模成功后优化溃结方组大鼠予优化溃结方药液1.674 g/(kg·d)灌胃,柳氮磺吡啶组大鼠予柳氮磺吡啶药液0.54 g/(kg·d)灌胃,空白组、模型组不予任何治疗。14天后检测各组大鼠血清白细胞介素17A(IL-17A)、IL-10、IL-22水平,结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达水平。结果与空白组相比,模型组血清IL-17A、IL-22水平显著升高(P<0.05),IL-10水平显著下降(P<0.05);与模型组相比,优化溃结方组、柳氮磺吡啶组IL-17A、IL-22水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05);优化溃结方组IL-17A、IL-22、IL-10水平与柳氮磺吡啶组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组相比,模型组结肠组织MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著增加(P<0.05);与模型组相比,柳氮磺吡啶组、优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达均显著下降(P<0.05);优化溃结方组MyD88、TLR2、TLR4、NF-κB p65蛋白和mRNA表达与柳氮磺吡啶组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论优化溃结方可能通过调节TLR/MyD88/NF-κB信号通路,降低炎症因子水平,减轻炎症反应,修复结肠组织的超微结构,从而修复UC大鼠结肠黏膜屏障功能。

羊肺炎支原体感染对贵州不同品种羊TLRs MyD88通路因子转录水平的影响

羊肺炎支原体(Mo)可引起山羊、绵羊发生支原体肺炎。本研究旨在分析Mo感染对贵州不同品种羊Toll样受体(TLRs)MyD88通路因子基因转录水平的影响,进而分析不同品种羊对Mo感染的差异性。本研究以Mo人工感染贵州5个主要品种羊,应用TaqMan RT-qPCR方法对不同品种试验羊肺脏和血液样本TLRs MyD88通路因子基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示,不同品种羊感染Mo后,MyD88、TRAF6、NF-κB、FOS、JUN基因mRNA相对表达量均显著上调(P<0.01)。同时发现,感染死亡的贵州黑山羊、贵州白山羊血液和肺脏样本中MyD88、FOS基因转录水平上调倍数均显著高于感染未死亡的波尔山羊、湖羊(P<0.05);感染未死亡的波尔山羊血液中NF-κB基因转录水平上调倍数均极显著高于其余四种羊(P<0.01),这种差异表达出现的原因可能是Mo对不同品种羊的致病机理不同。以上研究结果表明,贵州不同品种羊对Mo的易感程度与TLRs MyD88通路因子转录水平有关,为研究Mo对于不同品种羊的致病机制提供基础研究资料。