二硫化二砷和靛玉红对骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡及其相关蛋白的影响

目的研究中药青黄散主要成分二硫化二砷(As_2S_2)和靛玉红对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Caspase-3的影响。方法实验于2015年6月-2016年6月在中国中医科学院西苑医院血液科实验室进行。以MDS-RAEB细胞株MUTZ-1为研究对象,实验分4组:对照组、As_2S_2组、靛玉红组和联合组(As_2S_2和靛玉红联合应用)、以As_2S_2、靛玉红及二者联合分别作用MUTZ-1细胞48 h和72 h,以流式细胞术检测细胞周期,以Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡情况,以流式细胞术检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果 As_2S_2和靛玉红对MUTZ-1细胞有明显的抑制作用。与对照组相比,As_2S_2组和联合组在48 h时S期和G2/M期细胞的比例减少、G0/1期细胞比例增加(P均<0.05);在72 h时S期细胞的比例减少、G0/1期细胞比例增加(P均<0.01),G2/M期细胞的比例无明显变化(P=0.842)与对照组比较,靛玉红组细胞不同时间点各细胞周期无明显变化(P均>0.05)。与As_2S_2组和靛玉红组相比,联合组在48 h时S期和G2/M期细胞比例减少,G0/1期细胞比例增加(P均<0.01);72 h时S期细胞比例减少。G0/1期比例增加(P<0.01)。与对照组相比,As_2S_2组和靛玉红组细胞早期凋亡明显增加(P<0.05)。与As_2S_2组和靛玉红组相比,联合组促进早期凋亡作用也增强(P<0.05)。与对照组比较,靛玉红组和联合组在48 h时细胞表达Caspase-3增加(P<0.01);As_2S_2组在72 h时细胞表达Bcl-2减少(P<0.01)、Bax增加(P<0.05)。与As_2S_2、靛玉红组相比,联合组对MUTZ-1细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的无影响(P>0.05)。结论中药青黄散主要成分As_2S_2和靛玉红通过促进MDS细胞MUTZ-1的凋亡、影响凋亡相关蛋白起到治疗MDS的作用,单用As_2S_2可抑制MUTZ-1细胞的增殖,与靛玉红联合应用能增强其调控细胞周期、促进细胞凋亡的作用。

5′-杂氮-2′-脱氧胞苷对高危组骨髓增生异常综合征细胞作用的体外研究

本研究探讨 5′ 杂氮 2′ 脱氧胞苷 (5 aza 2′ deoxycytidine ,5 Aza CdR ,Decitabine)对高危组骨髓增生异常综合征 (MDS)细胞体外作用的机制。以人MDS RAEB细胞株MUTZ 1细胞为研究对象 ,采用细胞培养技术、MTT增殖抑制实验测定细胞存活率及抑制率 ;用细胞形态学、流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸 (PS)转位及细胞凋亡 ;用RT PCR检测 p15INK4B基因、甲基转移酶 (DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA表达 ;用甲基化特异PCR(MSP)方法检测 p15INK4B基因甲基化程度。结果表明 :5 Aza CdR对MUTZ 1细胞有生长抑制作用 ;作用后的细胞显示凋亡细胞的特征性改变。p15INK4B基因甲基化程度随 5 Aza CdR剂量增加而减弱 ,伴随 p15INK4B基因mRNA表达增加。经 3.2mmol/L 5 Aza CdR作用 4 8小时后 ,MUTZ 1细胞DNMT3A mRNA表达水平较未加药组明显下降 (灰度比为 0 .385∶0 .6 5 4 ,P <0 .0 5 ) ,DNMT1、DNMT3B mRNA表达水平与未加药组相比无明显改变。结论 :在 0 .4 - 6 .4mmol/L浓度范围 5 Aza CdR通过诱导MUTZ 1细胞凋亡而抑制该细胞生长 ,这可能是其抗肿瘤的主要机制之一。 5 Aza CdR可能通过下调DNMT3A mRNA表达使p15INK4B基因甲基化程度下降 ,从而恢复其表达。