用荧光标记MVR-PCR方法研究中国汉族人群DYF155S1基因座多态性

建立简便、实用的DYF15 5S1基因座基因分型的银染和荧光标记半自动分析方法 ,对中国汉族 15 5个无关男性个体血样本DNA进行分型 ,两种方法分型结果一致。 15 5人共检出 66种等位基因 ,有 3 8个等位基因仅出现 1次。根据图谱中第一条DNA片段及DNA条带数从小至大命名 ,频率最高的为 18和 2 2号等位基因 ,其第一条DNA片段大小为 180bp ,DNA条带数为连续的 16和 17个 ,频率均为 0 0 65。这一位点的基因多样性 (h)为 0 9789。 15 5人中有 2 5人表现为连续DNA谱带中有 1个或 2个DNA条带的丢失 (nullrepeat) ,序列分析证明丢失的DNA条带位置对应于 3型核心序列。结果表明 ,本文建立的分析方法能很好地揭示DYF15 5S1基因座 5′端多态性 ,是目前仅作1次PCR能获得个体Y染色体多态信息较高的技术。用本方法建立的中国汉族人群DYF15 5S1基因座等位基因频率资料 ,为群体遗传学研究及法医学应用提供了基础资料。

用改进的MVR-PCR方法检测河北地区汉族人群D7S21基因座多态性

为研究D7S2 1基因座在河北汉族人群分布的多态性 ,应用MVR -PCR (MinisatelliteVariantRepeat -PolymeraseChainReaction)方法和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法对 12 4名河北汉人无关个体D7S2 1基因座进行了快速检测 ,并进行数字编码。每一个体平均得到 36个数字编码 ,未发现任何两个无关个体所有编码相同 ,两无关个体 36个编码相同的概率为 3.48× 10 -18。三种重复单位a型、t型和 0型出现的概率分别为 :48.5 %、49.4%和 2 .1%。该基因座杂合度为 0 .9876 ,非父排除率为 0 .9746 ,多态性信息含量为 0 .9872。研究表明 ,D7S2 1基因座在河北汉族人群中具有高度的多态性 ,聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法简便、快速 ,具有一定的实用价值。

MS31A的MVR-PCR分型

建立一种快速MVR－PCR分析方法，对中国汉族群体样本进行小卫星MS31A（D7S21基因座）分型及其频率调查。采用同位素掺入扩增和中性聚丙烯酸胺凝胶电泳分离技术。对200名无关个体血液样品的分析结果表明，每一样品MVR－PCR图谱均可获得近40条谱带。经计算机编码分析，不同个体的编码均不相同。MS31A前40个重复单位1、2、3、4型的频率分别为25．3％，27．2％，47．3％和0．2％；DP值可达99．999999999999％；四代家系分析表明：亲代小卫星MS31A的重复单位可稳定地传递给子代，符合孟德尔遗传规律。灵敏度分析显示：该技术最低能检测出1ng的基因组DNA.MW－PCR分析方法在法医学个人识别方面具有应用价值。

小卫星区域MS31A等位基因特异MVR-PCR分析

用等位基因特异MVR－PCR技术能够对小卫星区域MS31（D7S21位点）等位基因结构的多态性进行分析，在法医学个体识别上具有极其重要的作用。对100名中国人无关个体MS31A5'端侧翼DNA多态性（－4A／G、－109C／T和－221G／C）进行分析，获得了其不同等位基因的频率和单倍体型的分布，结果表明81．8％的中国人DNA样品能够用等位基因特异MVR－PCR分析。

三态MVR-PCR方法检测中国汉族人群D2S44(YNH24)基因座3’端遗传多态性

目的揭示中国汉族人群(河北)D2S44基因座3’端的遗传多态性。方法采用三态MVR-PCR和变性PAGE-银染技术对D2S44基因座进行检测,结果用数字编码表示。结果在被检116名无关个体中,每个个体平均得到11个数字编码,3种重复单位出现的频率分别为:I型34．33％、Ⅱ型33．52％、Ⅲ型21．63％、0型10．52％。在116名无关个体中,两个无关个体拥有相同的编码概率为0．136 5,所有编码均相同的概率为3．06×1-10,杂合度为0．975 5,多态信息含量为0．975 1,非父排除率为0．951 0。结论D2S44基因座在中国汉族人群(河北)中具有较高的遗传多态性,是法医学和人类群体遗传学研究的一个重要遗传标记。

MVR-PCR分析技术的研究进展

小卫星DNA通常是指以10～50bp为一重复单位,即核心序列(Core sequence)存在于基因组非编码区的串联重复序列.

MVR-PCR及其法医学的应用

小卫星可变重复单位作图(MinisatelliteVariantRepeatmapping,MVRmapping)是近十年发展起来的一项DNA分析技术。本综述对该技术的分子学基础、发展过程及其在法医学的应用作了系统的阐述。认为该技术在个人识别与亲子鉴定方面发挥着为其它DNA分析技术所不可替代的作用,正在成为法医学生物检材检验的重要手段之一。

MS31A位点MVR-PCR技术在法医学鉴定中的应用

应用小卫星特异性引物31A、31A -A、31A -G与α -32PdCTP掺入扩增技术对MS31A(位于D7S21位点)进行MVR -PCR分析 ,成功地建立了一套适合于刑事案件中微量血痕、混合斑、毛发、骨组织等样品鉴定的快速、简便、准确的分析技术。灵敏度分析表明 ,该方法能检测出低至1ng的基因组DNA ,具有较高的灵敏性。本技术在40余起强奸、凶杀等疑难案件中应用均获得成功。本研究还利用MVR数据库资料对实际案件中的犯罪嫌疑人成功地进行了筛选、排查以及串并案工作。

DYF155S1基因座的法医学应用研究

目的探讨Y染色体小卫星DYF155S1基因座在法医学中的应用价值。方法采用荧光MVR-PCR和Amp-FLP技术。结果同一个体不同组织所获得的分型结果一致;本方法能作出正确分型的最低基因组DNA量为0.3 ng;在女性成份为男性成份100倍的混合DNA样本(总DNA量多少为110 ng)中能正确检出DYF155S1基因型;调查130个父系家庭的男性成员样品(减数分裂336次),总共发现DYF155S1基因座有3次突变,突变率为0.9%。对强奸案混合斑的分析,可直接检出DYF155S1基因型。但是,本方法只能区分哺乳类雄性动物与非哺乳类动物。结论采用荧光MVR-PCR和Amp-FLP方法分析Y染色体小卫星DYF155S1基因座,方法可靠,灵敏度高,对混合斑和微量检材中男性DNA的分析具有较高的应用价值。

中国维吾尔族人群MSY1(DYF155S1)基因座多态性及其结构特点

应用荧光标记MVR PCR、Amp FLP与DNA序列分析技术等检测106例中国维吾尔族人群无关男性个体血纱样品,揭示了中国维吾尔族人群Y特异的小卫星MSY1(DYF155S1)基因座5′和3′端多态性及其基因结构特点。DYF155S1基因座的多态性表现为3个方面:(1)长度多态性;(2)5′端多态性;(3)3′端多态性。106例无关个体共检出37个不同长度的片段,5′端检出68个类型,3′端检出23个类型。综合这3方面多态性,106例个体间没有相同,其基因多样性(h)超过0.9999。DNA序列分析发现该基因座5′端表现有7种模块结构,3′端有2种模块结构。DYF155S2片段缺失率约为4.7%。MVR PCR、Amp FLP与DNA序列分析技术结合起来可以更充分地揭示人群Y染色体特异的小卫星MSY1(DYF155S1)基因座多态性,并提出命名方式,从而为人类遗传学及法医学研究提供了有用的方法和基础资料。

云南白族人群Y染色体DYF155S1基因座多态性研究

揭示云南白族 136例无关男性个体Y染色体小卫星DYF15 5S1基因座多态性。用已建立的Amp FLP和MVR PCR方法分析DYF15 5S1基因座长度多态性、5′端多态性、3′端多态性。DYF15 5S1基因座具有高度多态性 ,基因多样性 (h)达 0 9996。研究表明将Amp FLP和荧光MVR PCR结合起来更能充分揭示DYF15 5S1基因座多态性 ,可为遗传学、人类学及法医学的研究提供有效的工具和基础资料。

HRP标记探针MVR分型法在法医学上的应用

采用辣根酶标记寡核管酸探针数字编码小卫星MS可变重复序列（HRP标记探针MVR方法），检验微量生物材料。结果表明，相当于5μl血液的血痕、单根有毛囊的毛发以及相当于4μl唾液的斑迹均获得了清晰易读的MVR图谱，灵敏度达1ng。将此方法应用于检案实践取得了较好的效果。MVR－PCR技术在法医学个人识别和亲子鉴定方面极有应用前景。

应用MVR－PCR和毛细管电泳分析D1S8位点的结构多态性

应用ＭＶＲ－ＰＣＲ扩增１０名无血缘关系个体的ＤＮＡ样本，扩增产物用毛细管电泳分离并用激光诱发荧光（ＬＩＦ）检测。结果显示每一个体可检出６～１４个扩增片段，个体间呈明显差异。该方法适合法医物证检验中分析微量或部分降解的ＤＮＡ样品。

河北汉族人群D7S21位点DNA多态性研究

目的探讨D7S2 1位点在河北汉族人群分布的多态性 ,为DNA指纹数据库的构建及其法医学应用提供基础资料。方法应用MVR PCR方法和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法对 12 4名河北汉族人群无关个体D7S2 1位点进行了快速检测 ,并进行数字编码。结果每一个体平均得到 3 6个数字编码 ,未发现任何两个无关个体所有编码相同 ,两无关个体 3 6个编码相同的机率为 3 .4 8× 10 -18。三种重复单位a 型、t 型和o 型出现的机率分别为 4 8.5 %、4 9.5 %和 2 .1%。该位点杂合度为 0 .9876,非父排除率为 0 .974 6,多态性信息含量为 0 .9872。结论D7S2 1位点在河北汉族人群中具有高度的多态性 ,聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳银染法简便、快速 。

数字编码小卫星可变重复序列法对中国汉人分型

介绍用辣根过氧化物酶标记的寡核苷酸探针检测的数字编码小卫星MS32可变重复序列方法。经用此法研究发现，中国汉人可得到50个编码以上，无关个体前50个编码中至少有20个编码不同，未发现两个无关个体的编码相同，50个编码全部相同的概率为4．09×10-16。三种重单位，即a-型、t-型和o-型出现比例分别为61．5％、32％和6．5％。MVR－PCR得到的数字编码具有高度的变异性，识别率高，为法医物证检验提供一个新的个人识别方法。