靶向MYC基因抗肿瘤研究进展

MYC是研究最为广泛的原癌基因之一,属于碱性螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链(bHLH-Zip)DNA结合蛋白超家族,通过与MAX形成MYC-MAX异二聚体发挥功能。MYC影响蛋白质合成、细胞黏附、增殖、分化、细胞周期、代谢、细胞凋亡和血管形成等多种生物学过程。因其结构与位置的特殊性,难以直接靶向,针对MYC的治疗策略是研究的热点,本文将系统回顾MYC基因的结构、功能和其抑制剂的研究进展,为靶向MYC治疗肿瘤提供新思路。

c-Myc功能及其下游靶点

c-Myc是一个在进化上较为保守的,具有b/HLH/LZ结构的转录调节因子,它可以与Max形成异源二聚体通过结合于启动子区的E盒结构对基因进行转录激活调控,也可以通过其他方式对基因进行正负调节,参与调控了细胞的增殖、分化、生长、凋亡、细胞周期进程、细胞内生物大分子的代谢以及细胞的恶性转化。近期,研究者通过采用微阵列芯片、生物信息学技术、染色质免疫沉淀(ChIP)、基因表达系列分析(SAGE)等高通量研究的新技术对c-Myc下游靶点进行研究,这对于揭示c-Myc结构与功能之间的关系具有重要的生物学意义。

真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B的改构与应用

目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A、胆绿素还原酶B和过氧化氢酶基因的重组真核表达载体,瞬时转染293T细胞后,用His标签抗体验证其表达。结果:测序结果证实已将预想的序列替换至pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中相应位置,改构为质粒pcDNA3.1(-)reconstruct;利用改构的真核表达载体表达了相应的目的基因。结论:改构的真核表达载体pcDNA3.1(-)reconstruct可以简化融合myc和His标签的目的基因克隆的过程,并且增加了限制性位点的可选择性。

miR-760靶向c-Myc对人食管鳞状细胞癌TE-10细胞生物学特性的影响

目的·观察miR-760对人食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)TE-10细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响并初步探究其机制。方法·应用反转录–定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blotting检测miR-760和c-Myc在5个ESCC细胞株(正常食管鳞状上皮细胞作为对照)和14例ESCC组织(癌旁组织作为对照)标本中的mRNA与蛋白表达水平。使用miR-760的模拟物、抑制剂(miR-mimics组、miR-inhibitor组)及模拟物阴性对照、抑制剂阴性对照(mimics-NC组、inhibitor-NC组)转染TE-10细胞,通过RT-qPCR验证miR-760的过表达和抑制效率以及c-Myc在mRNA水平的表达变化。CCK-8和集落形成实验检测miR-760对TE-10细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡比例的变化;Western blotting分析c-Myc蛋白及细胞周期、凋亡、迁移和侵袭等相关蛋白表达水平的变化。通过双荧光素酶实验验证miR-760与c-Myc的靶向结合作用。结果·5个ESCC细胞株的miR-760表达水平均低于正常食管鳞状上皮细胞,而c-Myc mRNA和蛋白的表达水平高于正常食管鳞状上皮细胞;在癌组织中miR-760的表达水平较癌旁组织降低,而c-Myc mRNA和蛋白的表达水平较癌旁组织升高。与mimics-NC组相比,miRmimics组的细胞增殖能力降低,细胞形成的集落数目减少,阻滞在G1期的细胞和凋亡细胞的比例均明显增加,迁移和侵袭细胞的数量减少;miR-mimics组周期蛋白D1、B细胞淋巴瘤2蛋白、基质金属蛋白酶2和波形蛋白的表达水平降低,而裂解型半胱氨酸蛋白酶3、上皮钙黏素和β-连环蛋白的表达水平升高;miR-inhibitor组则呈现与miR-mimics组相反的结果。双荧光素酶实验证实了miR-760与c-Myc 3'非翻译区具有靶向结合作用。结论·miR-760可能通过靶向c-Myc抑制TE-10细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。

缺血性脑卒中病人外周血中NDRG2蛋白、mTOR含量与预后的相关性分析

目的研究缺血性脑卒中病人外周血中N-Myc下游调节基因2(NDRG2)蛋白、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的含量,并分析其与病人预后的相关性。方法选取缺血性脑卒中病人300例为观察组,根据神经功能缺损评分分为轻度组(n=99)、中度组(n=113)、重度组(n=88),根据出院90 d改良Rankin量表(mRS)分为预后不良组(mRS>3分,n=108)与预后良好组(mRS≤3分,n=192),同期随机选取体检的健康者278名为对照组。收集研究对象的一般资料并检测常规生化指标水平;利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血NDRG2蛋白、mTOR含量,Pearson法分析NDRG2蛋白、mTOR与缺血性脑卒中病人常规生化指标的相关性;病人出院后随访3个月,利用ROC曲线分析NDRG2蛋白、mTOR含量预测缺血性脑卒中预后不良的价值。结果观察组病人外周血中NDRG2蛋白与mTOR含量均显著高于对照组(P<0.01);病人外周血中NDRG2蛋白与mTOR含量神经功能缺损重度组高于中度组和轻度组,中度组亦高于轻度组(P<0.05);缺血性脑卒中病人外周血NDRG2蛋白、mTOR含量分别与LDL-C、TG、TC、Hcy、D-D、Lp(a)、Hs-CRP呈正相关关系(P<0.05~P<0.01),与HDL-C呈负相关关系(P<0.01)。预后良好组病人外周血中NDRG2蛋白与mTOR含量均低于预后不良组(P<0.01);外周血NDRG2蛋白、mTOR含量评估缺血性脑卒中预后不良AUC分别为0.733、0.952,敏感度分别为62.04%、89.81%,特异度分别为76.56%、89.58%;二者联合评估缺血性脑卒中AUC为0.958,敏感度为86.11%,特异度为93.23%。结论缺血性脑卒中病人外周血中NDRG2蛋白、mTOR均呈高水平,二者联合检测对缺血性脑卒中预后不良具有较高的预测价值。

着丝粒蛋白F mRNA在肺腺癌细胞系、肺腺癌组织中的表达变化及相关调控信号通路分析

目的观察着丝粒蛋白F(CENPF) mRNA在肺腺癌细胞系中的表达变化,分析CENPF mRNA在肺腺癌组织中的表达变化并探讨其相关调控信号通路。方法①采用实时定量PCR法检测肺正常上皮细胞系BEAS-2B、肺腺癌细胞系(A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975) CENPF mRNA。②采用癌症基因组图谱(TCGA)的肺腺癌数据集分析CENPF mRNA表达与肺腺癌临床病理参数、预后的关系,Cox回归模型分析肺腺癌患者预后的影响因素。③采用基因集富集分析(GSEA)法分析受CENPF调控的肺腺癌相关信号通路。结果①A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975、BEAS-2B细胞CENPF mRNA相对表达量分别为4. 333±0. 271、3. 193±0. 188、2. 770±0. 091、5. 491±0. 249、1. 006±0. 071,A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975细胞CENPF mRNA相对表达量均高于BEAS-2B(P均<0. 05)。②肺腺癌、癌旁正常组织CENPF mRNA的相对表达量分别为9. 632±0. 059、6. 472±0. 093,二者比较,P <0. 001。CENPF mRNA表达与肺腺癌患者的性别、年龄、T分期、N分期及TNM分期相关(P均<0. 05)。生存分析结果显示,与CENPF mRNA低表达患者比较,CENPF mRNA高表达的肺腺癌患者的预后差(P=0. 001)。CENPF mRNA表达、临床TNM分期(HR分别为1. 667,1. 414; P均<0. 01)是影响肺腺癌患者预后的因素。③与CENPF mRNA高表达有关的肺腺癌调控信号通路有G2M检查点(P <0. 001,FDR <0. 001)、有丝分裂纺锤体(P <0. 001,FDR <0. 001)、E2F靶基因(P <0. 001,FDR <0. 001)、MYC靶基因(P <0. 001,FDR=0. 001)、m TOR信号通路(P=0. 002,FDR=0. 005)、精子形成(P=0. 002,FDR=0. 009)、未折叠蛋白反应(P=0. 002,FDR=0. 020)及PI3K/Akt/m TOR信号通路(P=0. 015,FDR=0. 117)等。结论肺腺癌组织及细胞系中存在CENPF高表达,CENPF高表达与肺腺癌患者的恶性病理特征及不良预后密切相关。CENPF mRNA高表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素。CENPF可能通过调节G2M检查点、有丝分裂纺锤体、E2F靶基因、MYC靶基因、m TOR信号通路、精子形成、未折叠蛋白反应及PI3K/Akt/m TOR信号通路在肺腺癌的发生、发展中起重要作用。

血清N-myc下游调节基因2和雷帕霉素靶蛋白与急性缺血性脑卒中患者早期神经功能恶化的关系

目的观察急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke, AIS)患者血清N-Myc下游调节基因2(N-Myc downstream regulated gene 2, NDRG2)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)水平变化,探讨其与AIS患者发生早期神经功能恶化(early neurological deterioration, END)的关系。方法 150例AIS患者,入院时和入院第7天采用美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale, NIHSS)评估END发生情况,其中发生END者33例为END组,未发生END者117例为非END组。比较2组一般资料,入院时及入院第7天NIHSS评分,入院时血清NDRG2、mTOR水平及血脂等指标;多因素logistic回归分析AIS患者发生END的影响因素;绘制ROC曲线,评估入院时血清NDRG2、mTOR预测AIS患者发生END的价值。结果 END组年龄,体质量指数,性别、合并症、TOAST分型、吸烟、饮酒比率,入院时收缩压、舒张压、空腹血糖、血小板计数、纤维蛋白原及血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平与非END组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。END组入院时、入院第7天NIHSS评分[(6.25±1.24)、(8.05±2.41)分]均高于非END组[(5.31±1.01)、(4.74±1.51)分](t=4.482,P<0.001;t=9.627,P<0.001),入院时血清NDRG2[(8.25±2.46)mmol/L]、mTOR[(31.29±7.85)mmol/L]水平均高于非END组[(6.54±1.58)、(28.25±5.67)mmol/L](t=4.801,P<0.001;t=2.485,P=0.014)。入院时NIHSS评分(OR=4.327,95%CI:2.745~6.821,P<0.001)、入院第7天NIHSS评分(OR=4.701,95%CI:3.128~7.065,P<0.001)及入院时血清NDRG2(OR=4.518,95%CI:2.941~6.941,P<0.001)、mTOR(OR=4.606,95%CI:3.025~7.012,P<0.001)是AIS患者发生END的影响因素。血清NDRG2、mTOR分别以8.22 mmol/L、32.81 mmol/L为最佳截断值,预测AIS患者发生END的AUC分别为0.695(95%CI:0.582~0.809,P<0.001)、0.605(95%CI:0.480~0.729,P<0.001),灵敏度分别为42.42%、45.45%,特异度分别为94.02%、85.47%;二者联合预测AIS患者发生END的AUC为0.839(95%CI:0.761~0.918,P<0.001),灵敏度为69.70%,特异度为81.20%;二者联合预测的AUC大于单独预测(Z=3.115,P=0.012;Z=2.098,P=0.006)。结论 AIS患者血清NDRG2、mTOR水平增高提示END发生风险大,血清NDRG2、mTOR联合检测对AIS患者发生END有一定预测价值。

N-myc下游调控基因2在恶性肿瘤中作用机制研究进展

N-myc下游调控基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是NDRG家族成员,与细胞增殖、分化、凋亡、应激反应和细胞迁移、侵袭等密切相关。NDRG2最早在神经系统中被发现,在脑和骨骼肌中高表达,但在乳腺癌、结直肠癌、胶质瘤、口腔鳞状细胞癌、黑色素瘤和淋巴瘤组织中低表达或无表达。NDRG2作为一种新的抑癌候选基因,在多种恶性肿瘤中以不同机制发挥抑制肿瘤生长的作用。本文就NDRG2在恶性肿瘤中作用机制的研究进展作一综述。

芪玉三龙方调节Wnt/β-catenin通路下游靶基因表达抑制荷瘤小鼠肺癌生长

目的:探讨芪玉三龙方对荷肺癌小鼠的抑瘤效果和对Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-myc、cyclin D1、Axin2表达的影响。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,芪玉三龙方低、中、高剂量组,化疗组,联合组,每组8只;造模第2天开始予以芪玉三龙方低、中、高剂量组小鼠分别按20.12、40.24、80.48g·kg-1·d-1灌胃给药,化疗组按照0.4m L顺铂腹腔注射给药,联合组以高剂量中药灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量0.9%氯化钠溶液给药,连续给药21d;称取瘤质量,计算抑瘤率;RT-q PCR检测肿瘤组织c-myc、cyclin D1、Axin2 m RNA的转录水平。结果:与模型组和低剂量组比较,芪玉三龙方中、高剂量组和化疗组c-myc m RNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各用药组cyclin D1 m RNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与低剂量组比较,中剂量组、化疗组表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各用药组Axin2 m RNA表达显著降低(P<0.01);与低剂量组、化疗组比较,芪玉三龙方中、高剂量组表达显著降低(P<0.01)。结论:芪玉三龙方对肺癌移植瘤具有一定的抑制作用,其抑瘤机制可能与芪玉三龙方调节肺癌组织c-myc m RNA、cyclin D1 m RNA、Axin2 m RNA的转录水平有关。芪玉三龙方高剂量抑瘤效应较优,量效关系明显,其与化疗药合用具有协同效应。