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胁迫条件下山新杨 PdPapMYC2 基因的组织表达模式
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作者 杨建坤 殷缘 +5 位作者 车易达 雷佳敏 钟伊能 茶新有 李嘉哲 张荣沭 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第6期18-27,共10页
【目的】解明山新杨PdPapMYC2基因在生物胁迫、非生物胁迫及激素诱导下的组织表达模式。【方法】克隆山新杨PdPapMYC2基因,采用生物信息学技术分析其编码蛋白特性。采用qRT-PCR技术分析PdPapMYC2在山新杨顶尖、茎、叶和根等组织中的表达... 【目的】解明山新杨PdPapMYC2基因在生物胁迫、非生物胁迫及激素诱导下的组织表达模式。【方法】克隆山新杨PdPapMYC2基因,采用生物信息学技术分析其编码蛋白特性。采用qRT-PCR技术分析PdPapMYC2在山新杨顶尖、茎、叶和根等组织中的表达量,以及其在盐(NaCl)、碱(Na 2CO 3)和高渗透压(PEG6000)3种非生物胁迫处理,核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、链格孢菌(Alternaria alternata)和金黄壳囊孢菌(Cytospora chrysosperma)5种生物胁迫处理及脱落酸(ABA)、茉莉酸(JA)和水杨酸(SA)3种激素诱导下的组织表达量变化。【结果】PdPapMYC2基因长1944 bp,编码647个氨基酸,存在bHLH-MYC_N superfamily和bHLH_SF superfamily保守结构域。预测PdPapMYC2蛋白定位在细胞核;二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构与拟南芥4rru.1.A模型的一致性最高。系统进化结果显示,PdPapMYC2与毛白杨PtMYC2的亲缘关系最近。qRT-PCR分析结果显示,PdPapMYC2基因在山新杨顶尖、叶、茎和根中均有表达;与对照(CK)处理相比,在NaCl、Na 2CO 3和PEG6000胁迫处理下,顶尖部位PdPapMYC2的表达量均显著下调(P<0.05);成熟叶中PdPapMYC2的表达量在NaCl胁迫时显著上调(P<0.05),在碱和高渗透压胁迫处理中下调;3种胁迫处理下其在根中的表达量均下调,但均未达显著水平。与对照(CK)处理相比,5种土传致病真菌胁迫48 h后,顶尖中PdPapMYC2表达量均下调,成熟叶中表达量仅在链格孢菌诱导下略上调,根部表达量在尖孢镰刀菌、金黄壳囊孢菌、链格孢菌和核盘菌作用下上调。JA诱导下PdPapMYC2在各组织中的表达量均显著上调(P<0.05),ABA和SA诱导下其在各组织中的表达量均下调。【结论】PdPapMYC2基因在山新杨多组织中表达,参与植物抵御逆境胁迫,并响应相关激素诱导。 展开更多
关键词 杨树 myc2基因表达谱 激素诱导 逆境胁迫
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藏药多刺绿绒蒿MYC2基因的克隆和生物信息学分析
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作者 董刚 周海霞 +5 位作者 赵成周 张媛霞 马惠敏 王奇云 孙胜男 李萍 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第23期7770-7777,共8页
MYC类转录因子,是植物激素茉莉酸信号路径中起重要作用的核心转录因子,在植物生长、发育、免疫和响应非生物胁迫等方面调节作用显著。MYC2转录因子是MYC家族中非常重要的成员。本研究根据多刺绿绒蒿全长转录组注释的MYC2基因信息设计扩... MYC类转录因子,是植物激素茉莉酸信号路径中起重要作用的核心转录因子,在植物生长、发育、免疫和响应非生物胁迫等方面调节作用显著。MYC2转录因子是MYC家族中非常重要的成员。本研究根据多刺绿绒蒿全长转录组注释的MYC2基因信息设计扩增引物,利用PCR克隆获得MhMYC2基因,并对其编码的蛋白质进行相关生物信息学分析。结果显示:全长转录组注释MhMYC2全长序列大小为1980 bp,其开放阅读框(ORF)为1233 bp,编码410个氨基酸。MhMYC2编码的蛋白分子式和分子量分别是C1991H3064N538O652S9和45.26 k D,总原子数量是6254;该蛋白带正电荷和负电荷的残基总数分别是29和44,其理论等电点为4.91;该蛋白定位于细胞核内,稳定性较差,属于亲水性非分泌蛋白,不存在跨膜结构域;该蛋白二级结构主要包括延伸链、无规则卷曲和α-螺旋,其比例分别为15.37%、60.24%和22.68%。系统进化树分析发现MhMYC2蛋白与罂粟亲缘关系最近。以上研究结果在一定程度上为研究MhMYC2基因的功能及其调控作用奠定了理论基础。 展开更多
关键词 多刺绿绒蒿 myc2基因 基因克隆 生物信息学分析
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酵母双杂交诱饵载体pGBKT7_MYC2构建及表达鉴定 被引量:1
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作者 刘武 肖牧 +1 位作者 阮颖 刘春林 《作物研究》 2012年第2期143-147,共5页
MYC2是一类含有helix-loop-helix(bHLH)结构域的转录因子。为进一步研究MYC2因子在植物防御抗性中的作用及其参与植物JA,SA等信号途径的作用机制,克隆了拟南芥的MYC2基因,以此构建了pG-BKT7_MYC2酵母双杂交载体,通过Western blotting验... MYC2是一类含有helix-loop-helix(bHLH)结构域的转录因子。为进一步研究MYC2因子在植物防御抗性中的作用及其参与植物JA,SA等信号途径的作用机制,克隆了拟南芥的MYC2基因,以此构建了pG-BKT7_MYC2酵母双杂交载体,通过Western blotting验证表明,该载体能在酵母细胞里正常表达。 展开更多
关键词 myc2基因 pGBKT7_myc2 诱饵载体 蛋白表达
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肿瘤抑制基因N-myc下游调节基因2调节结肠癌细胞糖代谢 被引量:1
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作者 来伟 施景龙 +4 位作者 林显敢 曾育杰 许鹤洋 蓝球生 褚忠华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2533-2534,共2页
目的 观察肿瘤抑制因子N-myc下游调节基因2(NDRG2)于结肠癌细胞葡萄糖代谢调节作用.方法 稳定转染NDRG2于结肠癌细胞HCT116,乳酸检测试剂盒检测细胞(1×10^6个)乳酸代谢的水平;葡萄糖试剂盒检测通过细胞(1 ×10^6个)消耗... 目的 观察肿瘤抑制因子N-myc下游调节基因2(NDRG2)于结肠癌细胞葡萄糖代谢调节作用.方法 稳定转染NDRG2于结肠癌细胞HCT116,乳酸检测试剂盒检测细胞(1×10^6个)乳酸代谢的水平;葡萄糖试剂盒检测通过细胞(1 ×10^6个)消耗培养基葡萄糖的水平;Western blot检测HCT116细胞(1×10^6个)糖酵解中丙酮酸激(PKM)、乳酸脱氢酶(LDHA)、己糖激酶(HK)表达水平.结果 转染NDRG2后,NDRG2可有效抑制HCT116细胞乳酸[(38.2 ±3.4) mol/L比(62.1±4.8)mol/L,P<0.05]的生成,培养基剩余葡萄糖量则明显增多[(137.0±3.6) mol/L比(88.2±2.2)mol/L,P<0.05].Western blot检测NDRG2转染的HCT116细胞显示PKM、LDHA、HK表达显著低于对照组HCT116细胞.结论 NDRG2作为肿瘤抑制基因,能够 调控结肠癌细胞糖代谢,抑制糖酵解关键酶生成,从而抑制肿瘤细胞糖酵解. 展开更多
关键词 N—myc下游调节基因2 糖酵解 结肠癌
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转化生长因子-β1抑制人肾小管上皮细胞株HK-2中N-Myc下游调节基因2表达及意义 被引量:2
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作者 金志波 顾朝辉 +3 位作者 贾占奎 黄珍林 丁映辉 杨锦建 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第12期2068-2070,共3页
目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞株HK-2中N-myc下游调节基因2(NDRG2)表达的影响。方法按照是否孵育TGF-β1分别设置对照组和实验组,取两组细胞分别提取蛋白及RNA行Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应... 目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞株HK-2中N-myc下游调节基因2(NDRG2)表达的影响。方法按照是否孵育TGF-β1分别设置对照组和实验组,取两组细胞分别提取蛋白及RNA行Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR),检验两组上皮细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Snail蛋白的表达差异。然后根据孵育TGF-β1的不同浓度梯度设置不同组别,分别取各组细胞提取蛋白及RNA行Western blot及RT-qPCR以检验NDRG2在TGF-β1作用后的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达。结果结果表明对照组和实验组在蛋白水平相关表达量分别为E-cadherin(1.0±0.2比0.3±0.2)(t=4.850, P=0.008),α-SMA(1.0±0.1比2.6±0.4)(t=6.721, P=0.003),Vimentin(1.0±0.1比2.6±0.4)(t=6.721, P=0.003),Snail(1.0±0.1比2.5±0.2)(t=11.620, P=0.000),以上标志物两组之间差异均有统计学意义。对照组和实验组在mRNA水平相关表达量分别为E-cadherin(1.0±0.2比0.2±0.1)(t=7.686, P=0.002),α-SMA(1.0±0.3比2.4±0.3)(t=5.715, P=0.005),Vimentin(1.1±0.2比2.6±0.5)(t=4.977, P=0.008),Snail(0.9±0.2比1.9±0.2)(t=6.124, P=0.004),以上标志物两组之间差异均有统计学意义。同时在TGF-β1孵育后,HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平都明显下调,各组在蛋白水平相关表达量分别为1.00±0.04比0.80±0.03比0.50±0.05比0.30±0.03比0.20±0.02(P=0.019),在mRNA水平相关表达量分别为1.00±0.05比0.70±0.03比0.50±0.04比0.30±0.02比0.20±0.05(P=0.021)。尤其当孵育TGF-β1浓度大于10 ng/ml时这种作用最为显著,各组表达水平之间差异有统计学意义。结论TGF-β1可以促进HK-2细胞中上皮-间充质转化(EMT)过程,同时TGF-β1可以下调HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平的表达量。 展开更多
关键词 N—myc下游调节基因2 转化生长因子-Β1 肾小管上皮细胞 上皮-间充质转化
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慢病毒介导的N-myc下游调节基因-2对肾癌细胞株786-0增殖及细胞周期素D1、p21表达的影响
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作者 高磊 张景 +3 位作者 张瑞 袁建林 武国军 王禾 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1113-1115,共3页
目的观察N—myc下游调节基因-2(NDRG2)对肾癌细胞株786—0增殖及细胞周期素(Cyclin)D1、p21表达的影响。方法以携带人NDRG2基因的慢病毒载体感染体外培养的肾癌细胞株786-O。采用间接免疫荧光实验检测慢病毒感染后细胞中NDRG2的过... 目的观察N—myc下游调节基因-2(NDRG2)对肾癌细胞株786—0增殖及细胞周期素(Cyclin)D1、p21表达的影响。方法以携带人NDRG2基因的慢病毒载体感染体外培养的肾癌细胞株786-O。采用间接免疫荧光实验检测慢病毒感染后细胞中NDRG2的过表达。Westernblot检测CyclinD1、p21的表达变化,通过细胞生长实验、平板克隆实验检测NDRG2对786一O细胞增殖能力的影响。流式细胞仪检测感染前后细胞的凋亡。结果786一O细胞经慢病毒感染后NDRG2蛋白表达水平明显增加。Westernblot实验显示慢病毒感染后细胞中CyclinD1表达明显降低;而p21表达明显增加。噻唑蓝(MTT)比色(抑制率12h为3.96%,24h为4.78%,36h为9.32%,48h为20.27%,60h为22.85%,72h为30.86%)显示NDRG2对786—0细胞的生长有明显抑制作用。平板克隆实验(3组分别为67.1%、65.5%和41.7%)显示lenti—NDRG2组786—0细胞的克隆形成能力明显降低。流式细胞术显示lenti-NDRG2组细胞凋亡率为(17.20±1.44)%,明显高于对照组[(6.30±0.46)%,t=12.49,P〈0.01]和lenti—mCherry组[(6.00±0.31)%,t=13.17,P〈0.01]。结论通过慢病毒载体使786-O细胞表达NDRG2基因,可以明显抑制细胞的增殖,并可降低CyelinD1表达,同时增加p2l的表达。 展开更多
关键词 肾癌 N—myc下游调节基因-2 细胞增殖 细胞周期
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胰腺疾病组织N—myc下游调节基因2的表达与分布
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作者 贺菲菲 焦凯 +1 位作者 刘新平 沈岚 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期162-164,共3页
分离胰岛细胞增生症患者、胰岛素瘤患者、胰尾高中分化腺癌患者和正常人胰腺组织,制成石蜡切片,用抗N-myc下游调节基因2(Ndrg2)单克隆抗体进行免疫组织化学染色(ABC法),用Western印迹法检测Ndrg2的表达与分布情况。结果显示,Nd... 分离胰岛细胞增生症患者、胰岛素瘤患者、胰尾高中分化腺癌患者和正常人胰腺组织,制成石蜡切片,用抗N-myc下游调节基因2(Ndrg2)单克隆抗体进行免疫组织化学染色(ABC法),用Western印迹法检测Ndrg2的表达与分布情况。结果显示,Ndrg2阳性反应物主要分布在胰岛细胞的胞浆,与胰岛素的阳性反应物分布与定位相似;胰岛细胞增生症患者胰岛数量增加,体积增大,且该疾病患者胰腺中Ndrg2表达增加;Western印迹实验结果显示胰岛细胞增生症患者胰腺组织中Ndrg2蛋白的表达量较正常组增高。提示Ndrg2基因可能在胰岛细胞中发挥重要的生理功能。 展开更多
关键词 N—myc下游调节基因2 胰岛细胞 胰岛素 免疫组织化学
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橡胶树无性系产胶能力株间一致性分析 被引量:1
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作者 包杰 张世鑫 +1 位作者 史敏晶 田维敏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第11期2173-2178,共6页
橡胶树无性系株间产量存在明显差异是导致产量育种选择周期长的主要原因之一。橡胶树的产量主要取决于产胶能力和排胶能力2个因素。树干树皮中的次生乳管数量及乳管细胞内的天然橡胶生物合成效率与产胶能力直接相关。从次生乳管分化和... 橡胶树无性系株间产量存在明显差异是导致产量育种选择周期长的主要原因之一。橡胶树的产量主要取决于产胶能力和排胶能力2个因素。树干树皮中的次生乳管数量及乳管细胞内的天然橡胶生物合成效率与产胶能力直接相关。从次生乳管分化和橡胶合成关键因子基因表达2个层面对无性系株间产胶能力的一致性进行分析。结果表明:树皮最内石细胞群以内次生乳管列数与次生韧皮部厚度的比值具有品系特征;在同一品系中,该比值的株间差异小,表现出良好的一致性。8 a割龄大树该比值的株间一致性较3 a幼树差,而在3 a幼树中,树高40 cm处该比值的株间一致性比树高100 cm处更好。因此,以3 a幼树树高40 cm处的该比值作为产量育种早期筛选标记较合适。胶乳中MYC1、HRT2基因的表达量在割胶后上调,并且具有品系特征,但这2个基因的表达量在株间的一致性较差,故在产量育种早期筛选中只能起到辅助作用。 展开更多
关键词 橡胶树无性系 产胶能力 石细胞 次生乳管 myc1/HRT2基因表达
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