MYH9基因突变伴肾小球轻微病变一例

MYH9突变相关性疾病是一种常染色体显性疾病,发病机制为编码非肌肉肌球蛋白重链ⅡA的MYH9基因突变导致细胞内肌球蛋白异常聚集,进而引起血液系统、眼、耳、肾脏、肝脏等组织器官的功能障碍。肾脏病变异质性大,而且因肾组织获取困难,尚缺乏充分认知和诊疗方案。本文首次报道1例MYH9基因尾端杂合突变患者,肾脏病理提示肾小球轻微病变,合并肾小动脉硬化,同时回顾相关文献,为临床诊疗提供新的依据。

TALEN介导的MYH9基因沉默及对细胞周期与凋亡的影响

目的利用TALEN技术敲除人胃癌细胞系MGC803细胞株MYH9基因,观察MYH9基因沉默后细胞周期及凋亡改变。方法根据斯丹赛Fast TALETMTALEN试剂盒说明书,设计并构建靶向MYH9基因的TALEN质粒对。通过质粒转染、DNA测序、RT-PCR和Western blot等检测质粒活性,成功挑取MYH9基因敲低单克隆株,并对构建好的细胞株进行周期和凋亡检测。结果成功挑选的MGC803单克隆细胞株未检测到MYH9基因完全敲除;MYH9基因敲低后,MGC803细胞周期受阻于G2/M期(P<0.05),早期凋亡增加(P<0.05)。结论利用TALEN技术成功构建MGC803细胞MYH9基因敲低单克隆株,该模型有助于后期深入探讨胃癌MYH9基因功能。

MYH9基因突变相关的遗传性血小板减少症1例并文献复习

目的提高对MYH9基因突变相关的遗传性血小板减少症(MYH9-RD)的认识。方法回顾性分析1例MYH9-RD患儿的临床资料及基因检测结果并检测父母相关基因。结果 6岁男性患儿,临床无出血表现,血常规提示血小板减少,外周血涂片及骨髓细胞学检查均发现巨大血小板,未发现中性粒细胞包涵体,基因测序结果为MYH9基因突变:exon17:c.2105G>A(p. R702H),父母基因检测为正常野生型。结论 MYH9-RD属于常染色体显性遗传,MYH9基因突变为该病的分子发病机制,应结合细胞形态学及基因检测以早期诊断,减少误诊。

我国部分汉族人群MYH9多态性与终末期肾病的关联研究

目的:探索我国部分汉族人群非肌性肌球蛋白9(MYH9)基因第22号外显子与24号外显子间基因序列多态性与终末期肾病(ESRD)的关系。方法:采用以医院为基础的病例对照研究设计,纳入180例ESRD患者,并选择同期体检118例作为对照人群。采用PCR后测序策略检测MYH-9基因多态性,运用Phase2.0软件计算多态性位点连锁关系,转录因子结合位点分析采用网络AliBaba2软件完成。结果:采用双向测序共发现8个基因片段多态性位点,其中5个为新发多态性位点,3个为以前报道的多态性位点。新发多态性位点中,有2个多态性位点(G489A和A616C)位于MYH9基因第23内含子中。关联研究发现,G489A仅存在于ESRD患者中,与对照组比较有显著差别(P=0.013),该结果提示该基因转换可能是危险因素。以前文献报道的Rs4821480(MYH9-92)、Rs2032487(MYH9-273)及Rs4821481(MYH9-787)未见与ESRD相关。连锁分析结果显示TCTCGGAT为最常见连锁形式,但ESRD人群该连锁基因型频率稍低于对照组,而TCTCGGCT和TCTCAGAT在ESRD人群出现频率较对照人群高。转录因子结合位点分析,MYH9基因第23内含子的野生型转录因子结合位点数量少于基因突变后的数量。结论:我国汉族人群MYH9基因23内含子附近基因序列的多态性及其连锁关系可能与ESRD发生、进展相关,该基因可能通过基因突变造成该区域转录因子结合位点数量改变来影响疾病的进程。

MYH9基因多态性与内蒙古地区慢性肾脏病患者病情进展的相关性研究

目的:探讨MYH9基因多态性与内蒙古地区慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者病情进展的相关性。方法:收集301例CKD患者作为病例组,经体检证实的294例健康者作为正常对照组。采用PCR的方法分析MYH9基因Rs3752462、Rs4821480两位点基因多态性,分别比较两位点基因型及等位基因在CKD患者与对照组的差异,分析不同基因型与CKD患者发病年龄、血压、24h尿蛋白定量、血肌酐、肾小球滤过率的相关性,分析Rs3752462位点不同基因型与CKD病情进展的关系。使用SPSS16.0统计软件进行数据分析。结果:Rs3752462、Rs4821480位点符合群体遗传平衡。单因素分析显示CT基因型患者的收缩压(147.94±27.40)高于CC基因型的患者(136.43±19.09)(P<0.05);CC基因型患者的肾小球滤过率(32.00±29.98)高于CT基因型的患者(21.62±23.67)(P<0.05)及TT基因型的患者(21.99±24.18)(P<0.05)。校正年龄,采用Logistic回归显示Rs3752462位点CC基因型是造成CKD病情发展至终末期肾衰竭(end stage renal disease,ESRD)的独立保护因素。结论:MYH9基因多态性与内蒙古地区慢性肾脏病具有相关性,Rs3752462位点CC基因型是CKD病情发展至ESRD的独立保护因素,等位基因C突变为T可能导致ESRD的发生。

MYH9综合征的免疫荧光检测与基因分析

目的研究两个MYH9综合征家系中性粒细胞包涵体的本质及基因突变。方法瑞氏染色观察先证者及其家系患者的外周血片血小板和中性粒细胞的特殊形态。间接免疫荧光方法结合DAPI复染技术观察正常对照和患者血片非肌性肌球蛋白IIA的亚细胞定位。从先证者及家系成员外周血中白细胞中提取基因组DNA,PCR扩增MYH9的40个外显子及侧翼内含子序列,检测其基因突变。结果患者外周血片中性粒细胞胞浆中可见明显团块状、半月形的绿色荧光聚集,其大小、位置与瑞氏染色的中性粒细胞包涵体相同。Fechtner综合征MYH9基因改变为外显子40第5981位核苷酸C→T杂合改变,使第1933位密码子(CGA,编码Arg)突变为终止密码TGA。May-Hegglin异常MYH9基因改变为外显子38第5701位核苷酸G→A杂合改变,使1841位谷氨酰氨变为赖氨酸。结论建立了诊断MYH9综合征的一种独特的免疫荧光方法。R1933X和E1841K杂合改变是导致Fechtner综合征和May-Hegglin异常的原因。

MYH9基因Rs4821480位点单核苷酸多态性与IgA肾病病理及预后关系研究

目的:探讨IgAN患者MYH9基因Rs4821480位点基因单核苷酸多态性与病理及预后关系。方法:经肾组织活检确诊148例IgAN,56例随访。外周血提取DNA,采用限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)Rs4821480位点不同基因型与IgAN病理及预后的关系。结果:(1)三种基因型病理免疫荧光IgA、病理免疫荧光C3、镜下血尿、病理HASS分级、蛋白尿程度等无统计学差异。(2)Kaplan-Meier生存分析整体比较,从肾活检到肾功能减退时间,TT基因型快于其他基因型,基因型组两两比较,GG基因型与TT基因型有统计学差异。(3)采用Cox比例风险模型将多因素对预后的影响进行分析,结果显示发病时年龄、高血压、蛋白尿、CCR影响肾病患者预后。结论:Rs4821480位点基因型与病理无关,T等位基因的可能影响患者预后。

儿童散发性MYH9相关疾病1例报告

非肌性肌球蛋白重链9相关疾病(MYH9-RD)是遗传性血小板减少症的病因之一,常伴有肾脏损害、感觉神经性耳聋、白内障等血液系统以外的表现。患儿,女,13岁,血小板减少12年余,血尿、蛋白尿4年余。外周血涂片镜检存在血小板数量下降(10~30)×10^(9)/L,血小板体积增大。尿常规示蛋白+++,红细胞(15~17)/HP,24小时尿蛋白定量4.34 g[相当于76 mg/(kg·d)]。纯音阈测定提示高频听力受损,眼科检查提示存在早发性白内障。基因检测证实患儿存在MYH9基因c.2104C>T(p.R702C)位点杂合突变,为已见文献报道的致病性变异,家系验证患儿父母、哥哥均为野生型。明确诊断为MYH9-RD。先后予缬沙坦、环孢素治疗,患儿肾脏损害持续性进展,并进展至CKD2期。白内障及听力损害亦进行性加重。对于难治性血小板减少的患儿需警惕MYH9-RD可能,基因检测有助于早期明确断。

一个MYH9综合征家系2例耳聋患者临床特征及耳聋基因检测分析

目的分析一个MYH9综合征家系中2例耳聋患者的表型特征,进行候选耳聋基因的突变筛查,明确该家系耳聋表型的基因突变位点。方法对家系进行详细的病史问诊及体格检查、血常规及生化检查、听力学检测、外周血涂片瑞-吉染色及MYH9蛋白质免疫荧光检测;抽提2例患者外周血基因组DNA,使用全外显子组测序技术对包括所有已知的100多个耳聋相关基因进行筛查并对可疑突变进行Sanger测序验证。结果该家系所有患者有巨大血小板、血小板减少和中性粒细胞包涵体三联征,系谱分析符合常染色体显性遗传特征。本研究2例耳聋患者还伴有贫血、高脂血症和转氨酶升高;耳聋表现为语后性、迟发型和渐进性听力下降,以中高频听力损失为主的感音神经性耳聋。全外显子组测序技术检测到MYH9基因致病突变位点:c.G4546C:p.V1516L,未发现其他已知遗传性耳聋基因的致病突变。结论该家系2例患者的耳聋表型可能与MYH9致病突变p.V1516L相关。

一个非综合征MYH9基因新突变家系的遗传学特征及临床表现

目的对一个非综合征MYH9基因新突变的耳聋家系进行遗传学特征、临床表现及听力学特征分析,为该家系的遗传咨询提供依据。方法对这个耳聋家族成员进行全面的资料搜集,包括基本信息、专科检查、听力学检查、实验室检查、影像学检查等,绘制家系遗传图谱并分析可能存在的遗传方式。同时采集先证者家庭的外周静脉血,结合二代测序、Sanger测序进行检测。结果该耳聋家系可追踪的4代人中耳聋患者为11个,现存患者为8个,遗传方式为常染色体显性遗传。主要参与研究的5人均表现为双侧对称性、渐进性、以高频听力下降为主的迟发性耳聋,发病年龄一般在30岁左右。基因检测结果发现MYH9基因新的基因突变位点c.314A>T:p.Y105F。家系内该变异与耳聋表型共分离,文献未见报道。结论这个非综合征性常染色体显性遗传性耳聋家系的可能致病原因是MYH9 c.314A>T(p.Y105F)的杂合突变,临床主要表现是迟发性耳聋。

慢性肾脏病与非肌性肌球蛋白重链9基因多态性的相关性

目的：探讨我国慢性肾脏病（CKD）患者与非肌性肌球蛋白重链9（MYH9）基因多态性的相关性。方法：选取301例CKD患者作为观察组，294例体检健康者作为对照组。采用PCR法检测MYH9基因rs3752462、rs4821480两位点基因多态性，分析MYH9不同基因型与CKD患者的发病年龄、性别、血压、24h尿蛋白定量、血清肌酐、肾小球滤过率、原发病及服用降压药频率的相关性。结果：单因素分析结果显示，CT基因型患者的收缩压高于CC基因型（147．94±27．40mmHg，136．43±19．09mmHg，P〈0．05）；CC基因型患者的肾小球滤过率（32．00±29．98）显著高于CT基因型（21．62±23．67，P〈0．05）及TT基因型（21．99±24．18，P〈0．05）。校正年龄因素后，多因素Logistic回归分析结果显示：rs3752462位点CC基因型是CKD患者收缩压增高的保护因素，CT基因型CKD患者患高血压的概率是CC基因型的0．175倍（95％C10．071～0．431）；rs3752462位点CC基因型是CKD进展至终末期肾病（ESRD）的独立保护因素，CC基因型肾小球滤过率是TT基因型的0．410倍（95％C10．183～0．922）。结论：携带MYH9基因rs3752462位点CC基因型的CKD患者不易患高血压，且肾损害进展慢，CC基因型是CKD患者的保护因素。等位基因C突变为T可导致收缩压升高甚至ESRD的发牛。

MYH9基因突变导致家系遗传性血小板减少的临床分析

目的探讨引起就诊患者血小板减少的原因,明确家族遗传性血小板减少症的诊断。方法采用血常规和血涂片镜检检测外周血血小板数量和形态以及中性粒细胞包涵体改变,生化分析仪检测就诊患者肝肾功能指标改变,外周血基因组DNA提取,高通量测序检测患者基因突变类型。结果家系遗传性血小板减少患者肝肾功能正常,血小板显著减少,出现巨大血小板及中性粒细胞淡蓝色包涵体,所有患病者均出现典型血液系统“三联征”,遗传性血小板减少患者发生MYH9基因错义突变c.5521G>A(p.Glu1841Lys)。结论血常规检测联合高通量测序可明确MYH9基因突变导致家系遗传性血小板减少病因诊断,可防止临床因误诊特发性血小板减少性紫癜而过度治疗。

MYH9相关综合征家系临床和基因突变分析

目的对MYH9相关综合征家系进行临床表现和相关致病基因分析,探讨其早期诊断的方法和发病机制。方法对一个MYH9相关综合征家系3名患者及家族3代共11人进行外周血检查,采用PCR扩增、DNA直接测序技术进行MYH9基因突变分析。同时进行100名健康对照人群的MYH9基因检测。结果外周血检测发现家系患者血小板减少,血小板体积增大,中性粒细胞中有包涵体。基因检测经PCR-DNA直接测序在先证者MYH9基因第30号外显子发现了碱基G/A错义突变,该突变导致GAC编码的第1424位天冬酰胺(D)突变为AAC编码的天冬氨酸(N),即D1424N突变。家系中患者检出与先证者相同的突变,而家系内健康人和家系外100名健康对照未发现这种突变。结论 MYH9相关综合征患者临床表现不一。MYH9基因突变是该综合征的分子发病机制,D1424N突变是国内未曾报道过的新突变。MYH9相关综合征的早期诊断有赖于家系调查和相关检查的早期开展。

一个MYH9基因相关性血小板减少症家系的基因突变分析

目的分析1个MYH9基因相关性血小板减少症家系的临床特征和突变类型，了解其发病原因。方法对该家系29名成员进行详细的体征检查和并发症及既往史调查，并应用PCR扩增先证者MYH9基因第1～40外显子及外显子与内含子连接区，对产物进行Sanger测序，将测序结果与UCSC数据库人类MYH9基因正常序列对比。确定突变位点后，对29名成员第30外显子进行Sanger测序验证。结果该家系患者的表型存在明显的异质性，4例患者有听力下降或耳聋表现，2例患者有肾炎或肾衰竭表现，其余8例患者无明显症状或仅表现为轻度出血症状。测序结果显示家系的9例患者MYH9基因第30外显子存在C．4270G〉A（p．Asp1424Asn）突变且与疾病表型共分离。结论MYH9基因第30外显子c．4270G〉A错义突变是导致该家系发病的原因。

MYH9基因突变伴糖尿病肾脏疾病一例报道

采用全外显子基因检测发现DKD患者携带MYH9基因(chr22:36681789,rs1254152525,C>T)突变,出现肾脏、肝脏、眼部受累,诊断为DKD合并MYH9基因突变,分析MYH9相关疾病特点,为临床诊治提供依据。

一个MYH9基因新突变导致的遗传性巨血小板减少症家系的遗传学分析

目的探讨一个MYH9相关综合征（MYH9 -related disorders, MYH9 -RD）家系的基因突变及临床特征。方法检测血常规，用血涂片法检查血小板和包涵体。提取外周血mRNA和基因组DNA，用PCR扩增MYH9基因的片段，用克隆测序和酶切实验确定突变位点和类型。结果患者的血小板减少，可观察到中性粒细胞包涵体和巨大血小板，但患者之间的临床表现有所不同。家系中所有8例患者的MYH9基因第41外显子第37碱基G杂合性缺失（c．5803delG），导致移码突变，造成非肌肉肌球蛋白重链ⅡA （nonmuscle myosin heavy chain Ⅱ A, NMMHC-Ⅱ A）端杆状尾部26个氨基酸改变（P．Ala1935Profs＊13）。而家系和非家系正常人均无此突变。结论c．5803delG突变是该家系患者发病的原因，患者的临床表现提示发生在NMMHC-ⅡA蛋白C端杆状尾部的突变所导致的症状较轻。该突变为新突变，国际上尚未见报道。

MYH9相关疾病临床表型及基因突变特征分析

目的分析MYH9相关疾病的临床表型及基因突变特征。方法回顾性分析2010年1月至2022年12月苏州大学附属第一医院66例MYH9相关疾病患者临床资料。根据有无出血将患者分为出血组和未出血组,根据突变位点将患者分为非肌性肌球蛋白重链ⅡA头部区域(MD)突变组和尾部区域(TD)突变组。统计分析不同组别患者血小板数量、出血情况、肾功能、白内障及听力等基本临床表型特征以及MYH9基因突变情况。结果66例MYH9相关疾病患者中,其中男28例,女38例,确诊年龄为1~63(26±2)岁,41%(27/66)为散发病例。所有患者均出现血小板减少伴有巨大血小板,血小板聚集功能(10/10)均正常。92%(54/59)患者中性粒细胞内可见蓝色的包涵体,30%(20/66)患者存在出血,45%(22/49)患者存在蛋白尿或肾小球肾病,20%(8/41)患者存在双侧听力受损,10%(4/42)患者存在双侧白内障。共发现18个基因突变位点,包括错义突变15个、剪切突变1个、终止突变2个,其中56%(29/52)患者存在p.Asp1424Asn、p.Arg1933^(*)及p.Arg702His/Cys突变,p.Ser96Leu、Arg1165Cys及p.Glu1841Lys突变为重现型突变,p.Ala44Thr、p.Asp1447Ala及c.3838-2A>G突变为新发突变。出血组患者血小板数量为(19±3)×10^(9)/L,明显少于未出血组的(36±3)×10^(9)/L(P<0.001)。与TD突变组比较,MD突变组血小板数量更少,出血等级更高,肾脏受累程度、听力受损及白内障等临床表型症状更重(均P<0.05)。结论p.Asp1424Asn、p.Arg1933^(*)及p.Arg702His/Cys为MYH9相关疾病患者的热点突变。MD突变组血小板数量更少,出血等级更高,肾脏受累程度、听力受损及白内障等临床表型症状重于TD突变组。

1例May-Hegglin异常的致病基因研究及家系调查

目的 对1例疑诊May-Hegglin异常(MHA)的患儿进行致病基因分析及家系调查。方法 提取家系成员的外周血基因组DNA,采用全外显子组捕获高通量测序技术,对MHA致病基因非肌性肌球蛋白重链9基因(MYH9)进行测序,采用Sanger测序验证结果,并对致病基因进行家系分析。结果 本家系中MHA患者表现为典型的“血小板减少、巨大血小板、外周血白细胞Dohle样小体”三联征,无感音神经性耳聋、白内障和肾炎症状。先证者MYH9基因编码区存在c.5521G>A(p.Glu1841Lys)错义变异。家系样本验证结果显示,受检者父亲、奶奶样本中也检测到该变异,考虑该变异为致病变异。结论 MYH9基因c.5521G>A(p.Glu1841Lys)错义变异是该家系的遗传学病因。

慢性肾脏病患者非肌性肌球蛋白重链9基因多态性与高血压易感性的研究

目的探讨慢性。肾脏病（CKD）患者非肌性肌球蛋白重链9（MYH9）基因多态性与高血压易感性的相关性。方法收集本院301例CKD患者临床资料，采用PCR法检测MYH9基因rs3752462、rs4821480两位点基因多态性，294名体检健康者作为健康对照组。分析不同MYH9基因型CKD患者的发病年龄、性别、收缩压、舒张压、原发病分布频率、服用降压药频率上的差异，以及rs3752462位点不同基因型与CKD患者高血压易感性的相关关系。结果单因素分析结果显示，cT基因型患者的收缩压[（147．94＋27．40）mmHg]高于cc基因型[（136．43±19．09）mmHg，P〈0．05]；CC基因型患者使用各种降压药的频率（7．4％）低于TT（43．9％）、CT（48．7％）基因型（P〈0．05）；校正年龄因素后，多因素Logistic回归分析结果显示，rs3752462位点CC基因型是CKD收缩压增高的保护因素，CT基因型CKD患者患高血压的概率是CC基因型的0．175倍。结论携带MYH9基因rs3752462位点CC基因型的CKD患者相对不易患高血压，CC基因型是CKD患者收缩压增高的保护因素，等位基因c突变为T可导致收缩压升高。基因检测可作为CKD患者高血压发生率的预测因子之一。

Fechtner综合征肾脏病理特点及机制探讨

目的研究Fechtner综合征先证者肾脏病改变特点并探讨其发病机制。方法采用HE染色、免疫组化、免疫荧光和电镜等方法对Fechtner综合征患者的肾活检组织进行研究。结果免疫组化结果显示在足细胞和远曲小管上皮，非肌性肌球蛋白重链IIA（NMMHC-IIA）有高表达，近曲小管刷状缘有微弱表达。与正常肾组织相比，患者NMMHC-IIA在硬化的肾小球足细胞的表达减少。免疫荧光结果提示患者肾小球有明显的NMMHC-IIA沉积；足细胞特异性抗体标记结果显示NMMHC-IIA主要沉积在患者的足细胞；电镜显示足突部分融合并伴微绒毛形成。结论突变的NMMHC-IIA沉积在肾小球足细胞，足突部分融合伴微绒毛形成影响了足细胞的功能，导致了Fechtner综合征肾脏病变的发生。