转录因子MZF-1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控研究

目的:探讨转录因子MZF-1对急性单核细胞白血病新抗原基因MLAA-34的转录调控作用。方法:利用双萤光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析MZF-1对MLAA-34基因启动子转录活性的影响。通过凝胶电泳迁移率变动检测(electrophoretic mobility slift assay,EMSA)和染色质免疫沉淀检测(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)实验,验证MZF-1是否与MLAA-34启动子核心区直接特异性结合。构建MZF-1真核表达载体和干涉载体,转染U937细胞,应用RT-PCR和Western blot法检测MLAA-34基因的转录和表达变化。结果:转录因子MZF-1对MLAA-34基因表达具有调控作用,MZF-1结合序列点突变后,相对荧光素酶活性降低(P<0.01)。EMSA和Ch IP实验从细胞内、外水平分别证明MZF-1可与MLAA-34启动子直接结合而发挥调控作用。在过表达试验中,MZF-1的增加可上调MLAA-34的表达(P<0.05);在干涉试验中,MZF-1的降低可下调MLAA-34的表达(P<0.05)。结论:转录因子MZF-1可与MLAA-34基因启动子上的转录调控区结合,并促进急性单核细胞白血病细胞中MLAA-34基因的转录。

促髓细胞分化的锌指基因单向PCR扩增直接测序的研究

锌指基因是一种造血调节基因，编码锌指结构蛋白，主要在髓细胞中表达，促进髓细胞分化，在急性早幼粒白血病维甲酸治疗中，促使病情缓解。本文报道了我们从基因分子上研究锌指基因作用中，探索并建立了单向聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增特定单链ＤＮＡ，直接测序的新方法。它能产生质和量均佳的单链ＤＮＡ，无需纯化即可直接用于测序，使复杂的测序研究简便易行，可在２，３天内完成。这种单向ＰＣＲ扩增特定单链ＤＮＡ直接测序的方法，经对锌指基因的ｃＤＮＡ测序，得到验证。此法不仅适用于疾病研究中的ＤＮＡ测序，还可制各单链ＤＮＡ探针，更利于基因结构组成的研究。