猕猴SPF种群的建立及保持过程中B病毒抗体监测研究

目的 建立适合SPF猕猴种群建立与保持所需的B病毒抗体监测模式。方法 采用BVEIA及BVELISA等方法对本中心自繁自育仔猴从断奶开始进行BV感染情况跟踪。结果 从自繁自育猴中随机挑选 2 18只断奶食蟹猴 ,92只断奶猕猴 ,经过近两年反复筛选得到 2 5只SPF食蟹猴 ,9只SPF猕猴 ,此结果经美国BioReliance公司检测得到确认。结论 该模式能有效监测猕猴BV抗体变化 ,为本中心在国内建立猕猴SPF种群提供了有力的技术保障。

Pharmacokinetics of recombinant human granulocyte macrophage colony-stimulating factor in Macaca mulata

目的：研究重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭＣＳＦ）在恒河猴体内的药物动力学．方法：用酶连接免疫吸附测定法检测血浆中ｒｈＧＭＣＳＦ的含量．结果：ｉｖｒｈＧＭＣＳＦ后血药浓度时间曲线符合三房室模型．第１，２和３相的Ｔ１２分别为００５－００７ｈ，０１４－０５８ｈ和１４－４１ｈ．ＡＵＣ随剂量成比例增加．ｉｖ高剂量和低剂量的Ｃｌ和Ｋ１０都相似．ｓｃｒｈＧＭＣＳＦ后血药浓度的峰值为０９３±０１６μｇ·Ｌ－１，达峰时间为２６５±０１４ｈ，生物利用度为０６１．结论：恒河猴ｒｈＧＭＣＳＦ药物动力学数据为临床试验提供有用参考．

恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的基因合成、原核表达及纯化

目的人工合成恒河猴粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Macaca mulatta granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor,mGM-CSF)基因,在大肠杆菌中高效表达并纯化。方法根据大肠杆菌遗传密码子偏爱性优化设计并合成mGM-CSF基因,克隆至原核表达载体pET-43.1a(+)中,构建重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF,转化大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,IPTG诱导表达。表达的重组mGM-CSF蛋白经Sephacryl S-200分子筛层析纯化,复性后,Western blot检测其反应原性,MTT法检测其生物学活性。结果重组表达质粒pET-43.1a-mGM-CSF经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,表达量约占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度可达95%以上,并可与大鼠抗人GM-CSF单克隆抗体特异性结合,比活性为1.2×107IU/mg。结论在大肠杆菌中高效表达了重组mGM-CSF蛋白,纯化复性后的蛋白具有良好的生物学活性。