基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS分析马齿苋炒炭前后化学成分变化

目的:分析马齿苋炒炭前后化学成分变化,筛选差异性止血成分。方法:采用UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS技术检测,选择Waters BEH C_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱;流速为0.2 mL/min;进样量为1μL;柱温为35℃;流动相为水-乙腈,梯度洗脱;采用电喷雾离子源,正、负离子扫描模式,质量扫描范围m/z 50~1500,根据相对分子质量和碎片信息,结合文献及数据库鉴定化学成分。应用SIMCA 14.1软件对质谱数据进行主成分分析和正交偏最小二乘判别分析,通过查阅相关文献筛选马齿苋炒炭前后差异性止血活性成分。结果:在正、负离子模式下,马齿苋及其炭品共鉴定出41个成分,含黄酮9个、苷类6个、有机酸12个、脂肪酸4个、氨基酸3个、生物碱4个、萜类1个、其他成分2个,通过VIP值结合文献筛选出6个差异性止血成分,其中没食子酸、5,7,4′-三羟基黄酮、大豆苷元含量增加。结论:马齿苋炭主要含黄酮类和有机酸类等成分,上述研究结果可为马齿苋炒炭后止血作用增强提供物质基础依据。

马齿苋黄酮提取方法比较及工艺优化

采用加热回流提取、超声提取、微波提取以及加压溶剂提取等4种方法提取马齿苋黄酮,比较不同方法所得马齿苋黄酮提取率和DPPH·清除率的差别,并采用扫描电镜观察提取后药材微观结构的改变,在此基础上利用正交设计法对加压溶剂提取工艺进行优化。结果表明:加压溶剂法提取所得马齿苋黄酮提取率最高。其DPPH·清除率比另3种提取方法略高;最优提取工艺为以70%乙醇为溶剂,压力0.20 MPa,时间30min,料液比1∶45(g·mL^(-1)),温度80℃,此条件下提取率为1.33%,该工艺重现性好,可为工业上提取马齿苋黄酮提供参考。

基于网络药理学和分子对接的马齿苋治疗肝癌作用机制研究

目的:基于网络药理学和分子对接技术探讨马齿苋治疗肝癌的物质基础及其潜在作用机制。方法:经TCMSP平台筛选和文献挖掘来收集马齿苋的主要活性成分,通过PharmMapper和GeneCards数据库筛选出马齿苋活性成分的肝癌靶点。运用String数据库结合Cytoscape软件进行肝癌靶点蛋白相互作用网络构建和分析。运用Cytoscape的ClueGO和CluePedia插件对马齿苋潜在作用的肝癌靶点进行基因功能(GO)分析。运用DS软件对马齿苋的活性成分与肝癌靶点进行分子对接验证。结果:筛选得到马齿苋15个主要活性成分,涉及42个靶点及相关信号通路10个。网络分析结果表明马齿苋通过作用于MAPK1、IGF1、AKT1、HRAS、ALB和GRB2等关键靶点发挥抗肝癌作用。分子对接结果表明至少有9个活性成分能与MAPK1发生相互作用,其中杨梅黄酮(Myricetin)和MAPK1能稳定地结合并通过氨基酸残基ILE29、LYS52和GLN103等发生作用。结论:马齿苋治疗肝癌具有多靶点和多通路的潜在作用机制;黄酮类成分可能是其抗肝癌的主要物质基础,与调控MAPK信号通路有关。

三七、青黛等对溃疡性结肠炎组织中Fas/FasL表达的影响

目的:评价清热解毒、活血化瘀药物三七、青黛、马齿苋对溃疡性结肠炎(UC)大鼠免疫细胞介导Fas/FasL细胞凋亡途径的影响。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、三七组、青黛组、马齿苋组、混合组(三七、青黛、马齿苋)、柳氮磺胺吡啶片组(SASP组),并以三硝基苯磺酸(TNBS)诱发大鼠T细胞免疫机制UC模型。造模后各组第3天起开始分别以生理盐水、三七、青黛、马齿苋、混合物(三七、青黛、马齿苋)、SASP,1次/d,共5d。第6d处死,剖取结肠,记录病变组织大体损伤指数,常规病理观察各组抗炎效果,并检测结肠组织中Fas/FasL蛋白表达水平,以及组织中单核细胞趋化因子(MCP-1)。结果:除马齿苋组外,其余各治疗组见不同程度黏膜修复,与模型组相比在组织学分级上有差异。其中三七组、青黛组黏膜大部分较完整,其组织学分级优于马齿苋组和SASP组(P<0.05);用药后三七组下调Fas和FasL蛋白表达的作用最强,其效果优于马齿苋组和SASP组(P<0.05),而与青黛组比较无显著差异(P>0.05);三七组、青黛组、三药混合组的阻断MCP-1水平效应优于马齿苋组和SASP组(P<0.05)。结论:三七与青黛抗炎、阻断炎症细胞向黏膜上皮游走和免疫细胞Fas/FasL途径细胞凋亡方面的作用优于马齿苋,显示了三七和青黛可能通过对免疫炎症细胞的阻断从而发挥治疗UC的作用。同时提示肠道脉络瘀阻和湿热蕴毒是UC发病的主要病理因素,肠道湿热夹瘀证与细胞免疫功能密切相关。

马齿苋合剂水提取液治疗生殖器疱疹的临床研究

【目的】观察马齿苋合剂水提取液治疗生殖器疱疹的临床疗效。【方法】采用单纯随机抽样法将120例患者分为实验组、对照组各60例。实验组采用马齿苋合剂水提取液治疗,对照组采用抗病毒药物无环鸟苷治疗。两组均以7 d为1个疗程,连续治疗4个疗程后对两组临床疗效进行评定。【结果】实验组治愈33例,显效13例,好转11例,无效3例,总有效率为95.00%;对照组治愈19例,显效14例,好转18例,无效9例,总有效率为85.00%;两组比较,实验组临床总疗效优于对照组(P<0.05)。随访1年,实验组的年复发次数少于对照组(P<0.05),说明实验组的远期疗效优于对照组。毒副作用观察结果显示,实验组未出现不良反应,对照组少数病例出现药疹、出汗、恶心、头痛等症状。【结论】马齿苋合剂水提取液对生殖器疱疹有较好的治疗作用。

基于网络药理学探讨马齿苋治疗溃疡性结肠炎作用机制

目的:通过网络药理学探索马齿苋治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:利用TCMSP数据库查找马齿苋活性成分,借助PubChem,PharmMapper数据库预测所选活性成分作用靶点,运用TTD、Omim数据库收集溃疡性结肠炎靶点。通过STRING数据库和Cytoscape软件构建马齿苋活性成分-溃疡性结肠炎共同靶点蛋白互作网络并进行拓扑分析,筛选出马齿苋治疗溃疡性结肠炎的潜在靶点。利用KOBAS数据库、DAVID数据库进行潜在靶点的GO、KEGG富集分析。结果:筛选出马齿苋活性成分9个,马齿苋活性成分与溃疡性结肠炎共同靶点7个;潜在靶点GO富集涉及生物过程117条,细胞组分27种,分子功能31种;潜在靶点KEGG富集包含mTOR信号通路、PI3K-Akt信号通路等。结论:马齿苋治疗溃疡性结肠炎具有多分子、多靶点的特点,可能主要通过调节mTOR信号通路实现其治疗作用。

马齿苋调节人肝癌细胞肺转移裸鼠的血液代谢组学分析

目的观察马齿苋对实验性人肝癌细胞肺转移裸鼠模型的血液组织代谢的影响。方法通过构建人肝癌细胞裸鼠的肺转移瘤模型,观察马齿苋对转移性肝癌裸鼠的抑瘤效果及血液代谢组学的影响。结果马齿苋能够抑制实验性人肝癌细胞裸鼠的肺内转移瘤生长,其发挥作用的机制与调节血液组织的氨基酸类、脂肪酸类、有机酸类代谢产物的表达有关。结论马齿苋可以通过调节肝癌动物血液氨基酸类、脂肪酸类、有机酸物质相关的体内代谢发挥抑制肝癌转移的作用。

马齿苋乙醇及其正乙醇提取物对D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆作用

目的:研究马齿苋不同提取物对D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆能力及其作用机制。方法:取小鼠随机分为正常组、模型组、马齿苋正丁醇提取物组(0.5、0.25g/(kg.d),以体质量计)和马齿苋乙醇提取物组(1、0.5g/(kg.d),以体质量计)。除正常组颈背部皮下注射生理盐水外,其他各组均皮下注射D-半乳糖(1g/(kg.d),以体质量计),注射后每天下午灌胃给药,连续42d。采用避暗法和水迷宫法测定衰老小鼠学习记忆能力,同时测定衰老小鼠脑组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果:马齿苋正丁醇提取物(0.5、0.25g/(kg.d))均可提高衰老小鼠学习记忆能力(P<0.01),0.5g/(kg.d)剂量组可显著提高衰老小鼠脑组织SOD和GSH-Px的活性(P<0.05,P<0.01),0.25g/(kg.d)剂量组马齿苋正丁醇提取物可显著降低MDA含量(P<0.05);马齿苋乙醇提取物可极显著提高衰老小鼠学习记忆能力(P<0.01),显著降低脑组织MDA含量(P<0.05)。结论:马齿苋不同提取物能明显改善衰老小鼠学习记忆能力,其机制可能与提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量有关。马齿苋正丁醇提取物好于马齿苋乙醇提取物。

基于网络药理学探究马齿苋缓解结肠炎的作用机制

目的:利用网络药理学探究马齿苋活性成分缓解结肠炎的作用机制。方法:基于TCMSP数据库获得其活性成分和对应靶标,利用STRING进行靶标间互作分析并筛选核心靶标,经KEGG富集分析得到马齿苋治疗疾病的相关信号通路。基于Drugbank数据库获取结肠炎的相关疾病靶标,与马齿苋成分靶标进行映射,得到马齿苋治疗结肠炎的作用机制。结果:共筛选获得马齿苋活性成分花生四烯酸、β-谷甾醇、山柰酚、木犀草素、异甜菜素、槲皮素等10个,其对应靶标共187个,核心靶标共62个,经KEGG富集分析发现核心靶标与癌症、病毒感染、炎症性肠炎和免疫调节相关通路密切相关,并通过ABCC4、ABCG2、ACAT1、ALB、ALOX5、CYP3A4、IFNG、IKKA、MPO、NOS2、NQO1、NR1I2、PPARG、PTGS1、PTGS2、TNF、XDH起到治疗结肠炎的作用。结论:马齿苋可通过抗炎、抗氧化和调节细胞增殖与凋亡发挥多靶点、多通路缓解结肠炎的作用。

清肠栓质量标准研究

目的建立清肠栓（三七、青黛、五倍子等）的质量标准。方法 TLC法对三七、青黛、五倍子和马齿苋进行定性鉴别,HPLC法定量测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含有量。结果 TLC斑点清晰,分离度好。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1分别在1.007 5~8.06μg（r=0.999 9）、0.99~7.92μg（r=0.999 1）、1.012 5~8.1μg（r=0.999 1）范围内线性关系良好,平均回收率均大于95%。结论该方法可靠准确,专属性好,可用于清肠栓的质量控制。

马齿苋对糖尿病胃轻瘫模型大鼠果糖胺、胃泌素水平的影响

目的:观察马齿苋对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠果糖胺、胃泌素水平的影响,探讨其改善DGP的作用机制。方法:采用链脲佐菌素诱导大鼠模型,将大鼠分为对照组、模型组、马齿苋大剂量组、马齿苋中剂量组、马齿苋小剂量组、多潘立酮组。分别灌胃8周后,采用放射免疫法测定其血浆胃泌素,比色法测定果糖胺水平。结果:治疗后马齿苋中剂量组、马齿苋大剂量组果糖胺均低于模型组(P<0.05);马齿苋小剂量组、马苋中剂量组、马齿苋大剂量组胃泌素均低于模型组(P<0.05)。结论:马齿苋可降低DGP大鼠血浆胃泌素水平,促进胃肠运动,并有降低血糖的作用。

基于数据挖掘的马齿苋临床外用规律分析

目的:采用数据挖掘技术分析马齿苋临床外用规律。方法:检索2009年1月至2019年12月中国期刊全文数据库(CNKI)和万方数据库中关于马齿苋外用的临床研究文献,提取组方信息,运用Excel 2013、Clementine12.0及IBM SPSS Statistics 23软件对筛选出的组方进行频数分析、关联规则分析和因子分析,总结马齿苋外用的治疗疾病,分析马齿苋外用的用药特点及配伍规律。结果:1)共纳入103篇文献,共计中药组方103首。2)马齿苋外用治疗的疾病主要为湿疹,尖锐湿疣,肛肠疾病,皮炎,扁平疣等。3)与马齿苋配伍应用的高频中药包括黄柏、苦参、蒲公英、蛇床子等,药味以苦和辛为主;药性多为寒性,温性;归经多集中于肝经、胃经。4)功效分类以清热药,活血化瘀药为主。5)关联规则分析共计得到马齿苋外用配伍的核心组合32个,并提取出8个公因子。结论:马齿苋外用以治疗湿疹,扁平疣、尖锐湿疣最为常见,且外用时多与蒲公英配伍。通过数据挖掘方法得到的马齿苋临床外用规律可为临床用药提供参考。

马齿苋标准汤剂特征图谱研究

目的为提高马齿苋配方颗粒质量评价标准,以马齿苋标准汤剂控制马齿苋配方颗粒内在质量。方法以10批不同产地马齿苋饮片为原料,制备了10批马齿苋标准汤剂,建立了马齿苋标准汤剂特征图谱方法,并对10批样品进行主成分分析。结果马齿苋标准汤剂特征图谱精密度RSD分别为0.00%~0.44%、0.00%~1.89%;重复性RSD分别为0.00%~1.74%、0.00%~2.15%;12 h内稳定性考察RSD值分别为0.00%~1.84%、0.00%~4.08%。10批马齿苋标准汤剂共有7个特征峰,与马齿苋饮片中成分一致,并提取出2个主成分。基于PCA数据,对10批马齿苋标准汤剂进行评分分级。结论马齿苋标准汤剂特征图谱方法具有稳定、可靠的特性,可为马齿苋配方颗粒的质量评价提供参考。

马齿苋对离体心脏药理作用研究

目的:探讨马齿苋对离体心脏的药理作用。方法:采用斯氏离体蛙心灌流法,制备离体蛙心模型,观察马齿苋对离体蛙心心肌收缩力的影响。结果:马齿苋与西地兰均能明显增强心力衰竭心脏的收缩力;马齿苋能延长心脏存活时间。结论:马齿苋能有效增强离体牛蛙心脏收缩力从而改善心脏功能,其正性肌力作用类似于西地兰和肾上腺素,且毒副作用较小,有明显的心脏保护作用。

基于网络药理学探讨马齿苋药理作用的分子机制

目的:运用网络药理学的方法探讨马齿苋药理作用的分子机制。方法:以"马齿苋"为检索词,在中药系统药理学数据库与分析平台进行检索,根据口服生物利用度及类药性参数查找有效成分及其靶基因,构建有效成分-靶点基因网络作用图;构建蛋白质相互作用(protein-protein interation, PPI)网络图,筛选出相互作用的核心靶点并对其作用靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析,明确马齿苋具体的作用分子机制。结果:共筛选出10种马齿苋的有效成分、221个靶点蛋白,靶蛋白PPI网络中其中的核心靶点蛋白包括AKT1、ALB、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)等。富集分析发现马齿苋作用的靶点蛋白多分布于神经突触后膜、细胞质的核周区域及细胞外基质等区域、分子功能涉及蛋白质同源二聚体激活、转录因子结合、蛋白质结构域特异性结合等;生物过程富集于对有机环状化合物及有毒物质的反应等;生物通路包括多条癌症通路、乙型肝炎通路及动脉粥样硬化通路。结论:马齿苋在抗癌、心血管等方面有潜在的药理作用。

基于网络平台的马齿苋标志物预测及质量评价

目的预测马齿苋的质量标志物,并建立其质量评价方法,为药房中马齿苋的质量管理及临床应用提供依据。方法利用文献检索与网络药理学筛选出马齿苋中关键成分;采用ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),0.1%磷酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,检测波长330 nm,柱温30℃,进样量10μl,建立指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)结合主成分分析对数据进行分析评价。结果预测出13个关键成分,建立了马齿苋的指纹图谱,确定30个共有峰,相似度均大于0.95,从中筛选出9个共有峰作为马齿苋药材质量评估的关键指标,分别为1、3、8、15、16、19、20、22、24号峰。结论将网络大数据、指纹图谱与主成分分析关联对马齿苋药材进行质量评估是一种有效可靠的方法,可较为全面地反映马齿苋药材化学成分信息,为马齿苋药材质量控制及临床应用提供支持。

“肺与大肠相表里”视角下探索肠道菌群与肺癌因果关联及潜在干预中药预测

目的在“肺与大肠相表里”理论指导下采用孟德尔随机化(Mendelian randomization,MR)明确与肺癌发生具遗传因果效应的肠道菌群,并预测能通过调控肠道菌群干预肺癌的潜在中药。方法从IEU OpenGWAS数据库获取肠道菌群与肺癌的全基因组关联研究汇总数据。使用R语言TwoSampleMR软件包进行MR分析,以逆方差加权法为主要的遗传因果效应评估方法。对工具变量邻近基因进行功能富集分析以探析相关微生物介导肺癌发生的信号通路。结合CTD和Coremine数据库预测对工具变量邻近基因具有潜在调控作用的中药,统计其性味归经及功效信息。结果MR分析发现了10个与肺癌发生具遗传因果效应的肠道菌群,其中变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、毛螺菌科(Lachnospiraceae)、Marvinbryantia、瘤胃球菌科(Ruminococcaceae UCG004)和粪居拟杆菌Bacteroides coprocola菌群与肺癌发生风险降低相关,草酸杆菌科(Oxalobacteraceae)、普氏菌属7(Prevotella 7)、黑臭杆菌属(Odoribacter)和大肠杆菌Escherichia coli菌群与肺癌发生风险升高相关。工具变量邻近基因主要富集在Janus激酶(Janus kinase,JAK)/信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor,PPAR)和磷脂酰肌醇-3-羟激酶(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)等信号通路。潜在调控中药四气以温为主,寒、平次之,五味以苦味为主,甘、辛次之,归经以肝为主,肺、脾、胃和肾次之,功效以清热为主,补虚次之,还包含活血、理气、祛风湿、化痰止咳平喘和利水渗湿等。其中映射频率靠前的代表中药包括人参、马齿苋、生姜、姜黄、郁金、白果、五味子和丹参等。结论基于“肺与大肠相表里”中医经典理论,采用MR分析发现以厚壁菌门、Marvinbryantia和变形菌门为代表的10种肠道菌群可能通过JAK/STAT、MAPK、PPAR和PI3K/Akt等信号通路介导肺癌发生发展。潜在调控中药主要包括清热药、补虚药、活血药和理气药等。丰富了“肺与大肠相表里”的生物学内涵,将为从“肠道菌群”视角探索肺癌的中医药防治策略提供参考。

鲜马齿苋的古今临床应用及现代研究分析

鲜药是中医学数千年来的医治经验的总结,具有不可替代的优势,鲜药饮片也将是今后中药发展的新方向、新趋势。鲜马齿苋临床应用广泛,既可外用又可内服。现代药理研究表明,鲜马齿苋所含生物碱类、黄酮类及脂肪酸成分明显高于干品,其抗菌、抗氧化、抗过敏、降血糖作用优于干马齿苋。我国马齿苋分布广泛,药源广阔,价格低廉,但目前市面上鲜马齿苋的相关制剂仍较少,有必要开发马齿苋鲜药饮片。文章通过对鲜马齿苋的古今临床应用及现代研究特点进行整理归纳总结,探讨其现代临床使用策略,为鲜马齿苋的进一步开发研究与临床应用提供前期参考依据。

马齿苋醇提取物对结肠癌细胞及其干细胞体外增殖作用的机理研究

目的探讨马齿苋醇提取物对结肠癌细胞及其干细胞体外增殖能力的影响及其作用机制。方法对结肠癌干细胞进行无血清培养,CCK-8法测定不同浓度马齿苋醇提取物对结肠癌HT-29细胞及HT-29干细胞的生长抑制情况,流式细胞仪检测其对HT-29细胞及其干细胞的凋亡情况及对细胞周期的影响。RT-PCR法以及Western blot分析马齿苋醇提取物对HT-29细胞及其干细胞Notch、Wnt双信号通路中Notch1、Notch2及β-catenin基因及蛋白表达的影响。结果马齿苋醇提取物对HT-29细胞及HT-29干细胞增殖有抑制作用,其作用时间、剂量与细胞增殖抑制率呈正相关,且对HT-29细胞增殖的抑制作用及凋亡率的影响较HT-29干细胞显著(P<0.05)。马齿苋醇提取物可下调HT-29细胞及其干细胞Notch1、β-catenin基因表达,并下调Notch1、Notch2及β-catenin蛋白表达(P<0.05)。结论马齿苋醇提取物可以通过下调Notch-1、Notch-2、β-catenin蛋白的表达发挥体外抑制结肠癌细胞及其干细胞增殖的作用。

鲜、干马齿苋药材中生物碱类成分的含量差异

目的：比较鲜、干药材中去甲肾上腺素和多巴胺的含量差异。方法：采用HPLC-UV测定马齿苋中去甲肾上腺素和多巴胺含量,流动相甲醇-水[70∶30,含30 mmol·L^-1十二烷基硫酸钠和0.02 mol·L^-1磷酸盐缓冲液（p H 3.2）],流速0.8 m L·min-1,检测波长280 nm。结果：HPLC中去甲肾上腺素和多巴胺的分离度很好,二者线性范围分别为52.5~157.5,64.7~194.1 mg·L^-1。鲜马齿苋中去甲肾上腺素和多巴胺质量分数分别为0.070%和0.50%,二者在干品中质量分数分别为0.015%和0.20%。结论：鲜药材中去甲肾上腺素和多巴胺含量明显高于干药材,可为马齿苋的合理使用提供实验依据。